维生素D3联合美沙拉嗪对轻中度溃疡性结肠炎患者血清CCL11、PTPRO表达的影响研究

郑森元，李 健，高鸿亮

（新疆医科大学第一附属医院消化病二科，乌鲁木齐 830054）

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病，主要累及人体乙状结肠与直肠黏膜，多发于20～30岁之间，随着经济水平的发展和生活质量的提高，我国UC 的发病率呈逐年上升趋势[1-2]。临床表现主要为反复腹泻、腹痛、脓血便为主，病程长且易复发，严重影响患者生活质量[3]。研究表明长期未控制的UC 会导致患者肠道纤维化狭窄，与结直肠癌的发生有密不可分的关系[4,5]。目前UC的发病机制尚不明确，遗传、环境和肠道微生物等因素可能共同参与了UC 的发生发展。针对轻、中度UC患者诱导和维持缓解的药物主要以氨基水杨酸类为主，其中包括美沙拉嗪，但长期单纯使用此类药物对于改善长期疗效有限，甚至会发生一些不良反应。血清CC 趋化因子配体11（CLL11）和肠粘膜受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O（PTPRO）都是肠道黏膜炎性机制的重要调节因子，CCL11通过刺激嗜酸性粒细胞在肠道中聚集，激发肠道黏膜炎性反应，诱导肠道免疫平衡的破坏[6]。Toll 样受体4（TLR4）作为一种天然免疫系统的模式识别受体，在维持肠黏膜正常功能中发挥着重要作用，PTPRO 可通过TLR4 促进巨噬细胞产生促炎细胞因子，加重UC 病情的发展[7]。维生素D3（vitamin D3，VD3）具有调节人体钙、磷代谢及免疫功能，人体缺乏VD3会导致肠道免疫系统紊乱，加重UC的病情进一步进展[8]。本研究通过测定轻、中度UC患者治疗前后血清CLL11、PTPRO表达水平及内镜下Mayo 评分，评价VD3和美沙拉嗪联合用药对轻、中度活动期溃疡性结肠炎的治疗效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料以2020年1月～12月在新疆医科大学第一附属医院消化病内科就诊住院的103名轻、中度UC 患者作为研究对象，其中男性51 例，女性52例，年龄32~47岁，平均（39.95±6.5）岁，随机分为治疗组（n=52）和对照组（n=51）。两组患者性别、年龄、基础疾病等基线资料差异相比均无统计学差异（P＞0.05）。本研究通过新疆医科大学第一附属医院伦理委员会审核批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准[2]纳入标准：（1）符合《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2018 年，北京）》的轻、中度溃疡性结肠炎诊断标准；（2）首次使用维生素D3治疗；（3）既往没有接受过免疫抑制剂及抗感染药物治疗。排除标准：（1）重度溃疡性结肠炎患者；（2）合并严重心、肝、肾功能障碍者；（3）肿瘤性疾病者；（4）甲状旁腺功能亢进及骨质疏松者；（5）合并其他自身免疫性疾病者。

1.3 治疗方法对照组患者口服美沙拉嗪缓释颗粒（美沙拉嗪缓释颗粒：0.5 g/袋，上海爱的发制药有限公司，国药准字H20143164），每次1 g，每天4 次。治疗组患者在此基础上口服维生素D3（骨化三醇胶丸：0.25 µg/粒，上海罗氏制药有限公司，进口药品注册证号J20150011），每次0.25 µg，每天1 次。两组患者连续治疗8 周，治疗期间均加强对患者的心理指导，根据患者实际情况给予相应饮食指导及纠正水电解质紊乱等对症治疗。

1.4 指标测定

1.4.1 血清CC 趋化因子配体11 指标测定 采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测血清CCL11 水平，分别于治疗前和治疗8周以后，分别抽取两组患者早上8 点空腹静脉血5 mL，进行离心处理并分离上层清液，放置于-20℃冰箱保存。CCL11 试剂盒及操作步骤由艾美捷科技公司提供，于酶标包被板标准孔中加样50 µL，向待测样品孔中加入40 µL 样品稀释液及10 µL 待测样品，37℃下温育30 min 后洗涤。加入酶标试剂后，再次温育、洗涤，依次加入显色剂A 和B，于37℃避光显色后加终止液终止反应。以空白孔调零，测定450 nm处每个孔的吸光度（OD值）。

1.4.2 肠粘膜受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O 指标测定通过蛋白质印迹法检测UC 患者肠道组织细胞中PTPRO 蛋白表达水平，分别于治疗前及治疗8 周后，取两组患者肠道黏膜细胞加入蛋白裂解液进行定量处理，滴加匀浆缓冲液后转移至4℃环境下、3 500 r/min 离心15 min。吸取上层清液，于电压位120V 电泳，转膜缓冲液平衡5 min，共3 次，后浸入转膜缓冲液进行转膜10 min。用PBS 缓冲溶液洗膜5 min，共3 次，加入一抗并放置于4℃孵育过夜，用磷酸盐吐温缓冲液(PBST)清洗3 次,每次10 min，加入二抗，放置室温下孵育1 h，再用PBST 清洗3 次后曝光并观察结果。

1.4.3 改良Mayo 评分[2]对纳入患者的便血情况、排便次数及肠镜下结直肠黏膜情况等实施综合性评估，包括：（1）排便次数：0 分：正常；1 分：比正常排便次数增加1~2次/d；2分：比正常排便次数增加3~4次/d；3 分：比正常排便次数增加5 次/d 或以上。（2）便血情况：0 分：无出血；1 分：不到一半时间出现便中混血；2 分：大部分时间内便中混血；3 分：一直存在出血。（3）内镜发现：0分：正常或无活动性病变；1分：轻度病变(血管纹理减少、轻度易脆、红斑) ；2 分：中度病变(血管纹理缺乏、易脆、糜烂、明显红斑)；3 分：重度病变(有自发性出血或溃疡形成)。（4）医师总体评价：0 分：正常；1 分：轻度病情；2 分：中度；3 分：重度。临床缓解：治疗后不适症状全部消失，肠镜下显示肠道黏膜基本正常，溃疡面愈合，无明显糜烂。有效：治疗后不适症状基本消失，肠镜下显示肠道黏膜轻度炎症或假息肉形成。无效：未符合上述标准。有效率=（临床缓解人数+有效人数）/总人数×100%。

1.5 统计学处理采用SPSS 22.0 软件进行统计分析，计数资料以例（%）表示，组间比较采用χ2检验，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 两组患者临床疗效比较与对照组治疗后比较，治疗组患者治疗后总有效率提高，差异具有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 两组患者临床疗效比较

2.2 两组患者治疗前后血清CLL11、PTPRO 蛋白水平比较治疗前两组患者血清CLL11水平、PTPRO蛋白表达量比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。与对照组治疗后比较，治疗组治疗后患者血清CLL11 水平、PTPRO 蛋白表达量均降低，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 两组治疗前后血清CLL11水平、PTPRO蛋白表达量比较（±s，ng/mL）

表2 两组治疗前后血清CLL11水平、PTPRO蛋白表达量比较（±s，ng/mL）

组别治疗组（n=52）对照组（n=51）t值P值血清CLL11水平治疗前1.25±0.23 1.24±0.24 0.35>0.05治疗后0.47±0.12 0.74±0.11 5.25<0.05 PTPRO蛋白表达量治疗前3.74±0.72 3.73±0.70 0.26>0.05治疗后2.06±0.55 2.52±0.72 4.34<0.05

2.3 两组患者治疗前后Mayo 评分比较治疗前两组患者Mayo 评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组治疗后比较，治疗组治疗后患者Mayo 评分降低，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

表3 两组治疗前后Mayo评分比较[（±s），分]

表3 两组治疗前后Mayo评分比较[（±s），分]

组别治疗组（n=52）对照组（n=51）t值P值Mayo评分治疗前1.46±0.49 1.45±0.46 0.64>0.05治疗后0.65±0.57 1.09±0.55 3.34<0.05

3 讨论

溃疡性结肠炎在欧美国家发病率较高，在我国的发病率随饮食结构改变也有逐年上升趋势[2]。目前溃疡性结肠炎的诊断、病情活动度监测以及疗效判断主要依赖于临床评估、血清学指标和内镜检查等指标。研究发现黏膜愈合（MH）指标对于治疗UC患者疗效具有重要的指导作用[9,10]，能够较好地预测后期疾病复发率[11]，但部分血清学指标（血常规、C 反应蛋白、红细胞沉降率等）与其他疾病也有一定的相关性，导致它们不能作为评价溃疡性结肠炎活动度的准确标志指标。本研究选取血清CLL11 水平、PT‑PRO 蛋白表达量在UC 患者呈中高表达，检测其表达水平对UC 患者病情活动度监测及疗效判断有一定的参考意义。

美沙拉嗪能有效抑制人体前列腺素合成及白三烯B4释放，减轻肠道黏膜炎症反应，阻止肠粘膜损伤进展[12]。外源性VD3在人体能够合成活性VD3，促进肠黏膜屏障损伤修复，保护其完整性，维持肠道免疫平衡。Hlavaty 等[13]研究指出，维生素D3缺乏在UC 患者中十分常见，血清VD3水平与UC 患者的生活质量有着密切的关系。Gubatan 等[14]研究发现当血清VD3含量低于35 ng/mL 时会增加UC 复发的风险。本研究显示UC 患者普遍存在VD3缺乏，与杨林雪等的研究结果相一致[15]。外源性VD3的补充对人体炎症反应、免疫系统反应的调节等具有重要作用[16]。

综上所述，维生素D3与肠道免疫、肠道黏膜屏障完整性等相关，与美沙拉嗪联合更有利于控制轻、中度活动期患者病情变化，有效抑制炎症反应的进一步发展。对于判断UC 患者病情活动度监测及疗效判断，新标志物血清CLL11 水平、PTPRO 蛋白表达量指标的补充具有一定的临床价值。