复方桐叶烧伤油及其原料脂溶性成分分析

郭洪伟， 刘一涵， 田云刚， 王建霞， 李思迪,2， 姚福宏， 魏 华,2*

(1.吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000；2.国家中药现代化工程技术研究中心土家医药分中心，湖南 吉首 416000；3.湘西宏成制药有限责任公司，湖南 吉首 416000)

复方桐叶烧伤油是湘西土家族姚氏家族所研制的秘方药, 是国家中药三类新药[1]，有清热解毒、消肿止痛、祛腐生肌之效，用于治疗面积小于29%的Ⅱ度烧烫伤，能改善烧烫伤后出现的疼痛、肿胀、渗液等状况，加快伤口愈合时间，降低伤口感染及其他并发症的发生率，在临床应用中越来越广泛。复方桐叶烧伤油的主要原料为白花泡桐叶和湘产芝麻油。

白花泡桐Paulowniafortunei(Seem.) Hemsl.为玄参科泡桐属植物，别名泡桐、大果泡桐、华桐，主要分布于我国南方地区[2]。白花泡桐是我国重要绿化树种之一[3]，同时还是湘西民间常用中药。白花泡桐主要成分包括黄酮类、三萜类及精油类成分[4]。湘产芝麻油作为复方桐叶烧伤油的油状基质，具有保湿作用，可减少创面的渗液，降低创面感染的发生率。其含有木脂素类成分和维生素E等，具有杀菌抗炎、扩张末梢血管，改善血液循环等功效[5]。目前复方桐叶烧伤油已有文章报道其临床应用[6-8]。对复方桐叶烧伤油及其原料的脂溶性成分进行分析，比较复方桐叶烧伤油及其主要原料的成分，并考察不同提取方法对白花泡桐叶脂溶性成分提取的影响，以期为白花泡桐原料的质量控制标准提供科学依据，并为复方桐叶烧伤油的药效物质基础提供一定的实验依据。

1 材料

1.1 试剂与药物 白花泡桐叶、湘西产芝麻油、复方桐叶烧伤油(湘西宏成制药有限责任公司)。正己烷、石油醚、甲醇(分析纯，天津富宇精细化工有限公司)；无水硫酸钠、浓硫酸(天津科密欧化工有限公司)；纯净水(华润怡宝饮料有限公司)。C7-C40正构烷混合对照品(上海安谱实验科技股份有限公司)。

1.2 仪器 GCMS-QP2010(日本岛津公司)；LE204E型电子分析天平(万分之一，瑞士梅特勒-托利多公司)；万家寻WJX-800A型多功能粉碎机(上海缘沃工贸有限公司)；R-210型旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司)；佳祥KDM型调温电热套(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司)；昆山KQ2200E型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；DZKW-D-6型电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器有限公司)。

2 方法

2.1 超声辅助提取法 称取桐叶20 g，粉碎，置于500 mL锥形瓶中，加入石油醚200 mL，置于超声波提取器中，以功率6 kW、温度50 ℃、频率40 kHz提取40 min，结束后抽滤收集溶液，减压浓缩，即得。

2.2 索氏提取法 称取桐叶20 g，粉碎，用滤纸包好，置于索氏提取器的提取管中，提取管上端连接冷凝管，并用一团脱脂棉轻轻塞入冷凝管上口，提取管下部连接抽提瓶，抽提瓶中加入200 mL石油醚，并置于恒温水浴锅中，在80～90 ℃下提取，使每小时虹吸6～8次，抽提时间为6 h，结束后收集溶液，减压浓缩，即得。

2.3 甲酯化方法 取油样100 mg于50 mL锥形瓶中，用适量正己烷将油样溶解，加入10 mL 1%硫酸甲醇溶液,于70 ℃水浴加热回流60 min后, 加入正己烷10 mL, 并加蒸馏水适量, 取上清液, 再用5 mL正己烷洗涤1次, 合并上清液, 加入无水硫酸钠干燥，过0.22 μm微孔滤膜，即得超声提取样品T1、索氏提取样品T2、湘产芝麻油T3、复方桐叶烧伤油T4。

2.4 分析条件 SH-Rtx-5MS气相色谱柱(30.0 m×0.25 mm, 0.25 μm)；载气高纯氦气(纯度>99.99%)；载气体积流量1.0 mL/min；进样口温度250 ℃，接口温度250 ℃；初始温度120 ℃，恒温2 min，以8 ℃/min速率升至240 ℃，恒温10 min，以10 ℃/min速率升温至280 ℃，恒温20 min；进样量1.0 μL。离子源为EI源；电离能为70 eV；质量扫描范围m/z50～550；离子源温度230 ℃。

2.6 定性定量分析 各样品经GC-MS分析后，通过NIST14质谱图库进行自动检索，然后将测定的保留指数并与NIST官网(https://webbook.nist.gov/chemistry/name-ser/)保留指数进行对比(误差不超过3%)，最佳鉴定结果以质谱相似度及保留指数 RI 值接近度最高的化学结构为准。色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含有量。

3 结果与讨论

GC-MS总离子流图见图1，其结果采用Nist14谱库检索后，与NIST官网(https://webbook.nist.gov/chemistry/name-ser/)中的保留指数进行对比来加以定性,面积归一化法计算各成分含量,结果见表1。

图1 各样品总离子流图

表1为超声辅助提取法T1、索氏提取法T2、湘产芝麻油T3、复方桐叶烧伤油T4分析结果，从表中可知超声提取法中共鉴定了28个组分，占总样品的89.67%；索氏提取法中共鉴定44个组分占总样品的98.22%；湘产芝麻油中共鉴定了12个组分，占总样品的99.34%；复方桐叶烧伤油中鉴定了24个组分，占总样品的98.91%。白花泡桐叶脂溶性成分含量从高到低依次为亚麻酸(两种方法平均含量为18.4%)、棕榈酸(13.2%)、亚油酸(8.84%)、角烯鲨(7.6%)、三十三烷(5.8%)、α-生育酚(4.8%)、2-甲基三十烷(4.73%)、硬脂酸(2.41%)等。在2种提取脂溶性成分方法中，索氏提取法提取的成分更多，更全面。在酸类、醇类和其他类的相对含量中T2>T1，而烷烃类、烯烃类和酚类的相对含量中T1>T2。新植二烯、十六烯、十二烷基四氢吡喃醚等5种成分只在超声提取法中检测得到，邻苯二甲酸二丁酯、二十烷、植物醇等22种组分只在索氏提取法中检测得到。在同时检测得到的物质中索氏提取法所提取的百分含量略大于超声提取法，这可能是提取时间长的原因。

表1 复方桐叶烧伤油及其原料中挥发性、脂溶性成分

湘产芝麻油作为复方桐叶烧伤油的药物基质，可以使伤口保持一定的油性环境，有利于坏死细胞的脱落和新细胞的生长，从而促进伤口的快速愈合；能抑制感染属性菌的生长，降低伤口感染及并发症的发生率[1]。根据GC-MS的分析结果可知，芝麻油中主要成分为亚油酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸、β-谷甾醇、芝麻素。亚油酸据报道对维持表皮动态平衡和角质层渗透屏障起着重要作用[9]，此外外用富含亚油酸-神经酰胺的保湿剂可以减轻卡泊三醇诱导的特应性皮炎小鼠模型皮肤炎症，修护皮肤屏障[10]。因此，亚油酸在复方桐叶烧伤油治疗烧伤过程中有着修复皮肤的作用。何晓梅等[11]运用滤纸片-抑菌圈法测定芝麻素的抗菌活性，发现芝麻素对蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌均有不同程度的抑制作用。通过GC-MS对复方桐叶烧伤油脂溶性成分分析，显示其主要含有亚油酸、油酸、棕榈酸、β-谷甾醇、芝麻素、α-生育酚、角烯鲨等活性成分。对比复方桐叶烧伤油及其原料成分可以得知，主要成分基本来自于原料成分，α-生育酚、角鲨烯来自于白花泡桐叶，β-谷甾醇、油酸、芝麻素来自于芝麻油。α-生育酚是公认的抗氧化剂，可提高人体内超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性, 促进受损组织细胞的修复和创面愈合[12]，而且在烧伤、冻伤、毛细血管出血、美容等方面也有着良好的效果[13]。β-谷甾醇在抗氧化、抗血脂、抗炎、免疫调节等方面表现出良好的药理作用[14]。角鲨烯能帮助皮肤抵抗由于紫外照射和其它氧化反应导致的损伤除此之外还有润肤、保湿等功效[15]。由此可知，在复方桐叶烧伤油中，来自芝麻油的油酸、芝麻素、β-谷甾醇与来自白花泡桐叶的角鲨烯、α-生育酚等成分存在使得创面能去腐生肌并快速愈合。

4 结论

在本实验中，采用GC-MS结合保留指数对复方桐叶烧伤油及其原料脂溶性成分分析，并用面积归一法计算各组分相对含量，确定了复方桐叶烧伤油的主要成分为亚油酸、油酸、棕榈酸、β-谷甾醇、芝麻素、α-生育酚、角鲨烯等所代表的组分，其中油酸、β-谷甾醇、芝麻素来自芝麻油，α-生育酚、角鲨烯来自与白花泡桐叶。在不同方法提取白花泡桐叶脂溶性成分中，索氏提取法所提取的组分更全面，本研究结果可为白花泡桐原料质量控制标准提供科学依据，并为复方桐叶烧伤油的药效物质基础提供一定的理论依据。

续表1