环状RNA 作为中国人群非小细胞肺癌潜在预后指标的Meta分析△

洪佳如，樊星星，陈开举，杨倜

广州医科大学1 公共卫生学院，2 基础医学院，广州5114360

肺癌的发病率和病死率极高，严重威胁人类生命健康，其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）约占所有肺癌类型的83%。近年来，NSCLC 在诊断及治疗（包括手术、放疗和化疗）方面取得了较大的进展，但多数患者确诊时的临床分期就已经处于Ⅲ～Ⅳ期，5 年生存率仅为23%，患者的生活质量较差，预后不良，生存期较短。近年来，多项研究表明，环状RNA 在NSCLC的发生发展过程中发挥着重要作用，成为NSCLC早期诊断及预后评估的新型生物标志物。环状RNA 是一类新型、广泛存在于人体内的内源性非编码RNA，是通过磷酸二酯键形成的不具有3'末端和5'末端的闭合环状结构，比线性RNA 具有更好的稳定性和保守性，在肿瘤诊治及预后评估中具有极高的临床应用价值。多项研究发现，环状RNA在NSCLC组织和癌旁组织中存在表达差异，其可通过竞争内源RNA、调控可变剪切和转录、蛋白翻译等机制调控肿瘤细胞的增殖、转移及侵袭过程。目前，已有多项研究发现，环状RNA 对预测NSCLC 患者的预后有一定作用，初步表明环状RNA 在肿瘤患者预后评估中有潜在的应用价值，但关于环状RNA 作为NSCLC 患者潜在预后因素的Meta 分析尚未见深入报道。因此，本研究采用Meta 定量分析方法评价环状RNA 在中国NSCLC患者预后评估中的应用价值，旨在为环状RNA 是否可作为NSCLC 患者预后评估的新型生物标志物提供循证医学证据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 检索策略

在PubMed、Web of Science、The Cochrane Library、Embase、CNKI、VIP 和万方数据库中进行检索，检索关于环状RNA 与NSCLC 患者预后关系的已发表文献，检索时间截至2020 年5 月5 日。采用主题词与自由词相结合的方式进行检索，中文检索词为“环状RNA”“肺癌”“肺肿瘤”“非小细胞肺癌”“肺腺癌”“肺鳞癌”，英文检索词为“circular RNA”“circRNA”“lung cancer”“lung neoplasm”“pulmonary cancer”“pulmonary neoplasm”“nonsmall cell lung cancer”“NSCLC”“lung adenocarcinoma”“lung squamous cell carcinoma”。

1.2 文献纳入与排除标准

文献纳入标准：①关于circRNA 表达的病例对照研究或队列研究，诊断以病理学为金标准，样本来源于NSCLC 组织；②病例来源于中国人群；③评估环状RNA 对中国NSCLC 患者预后的预测价值；④病例数明确，风险比（hazard ratio，HR）及其95%置信区间（confidence interval，CI）等参数可以直接或间接从文献中获取。排除标准：①对照例数未知或对病理类型界定不明确；②文献类型为会议摘要、病例报道、动物实验、综述；③样本量﹤20；④纳入的NSCLC 患者不是原发性NSCLC。

1.3 数据提取和文献质量评价

由两名研究员独立完成数据提取和文献质量评价，若出现分歧与第三名研究员协商确定。提取内容主要包括：①纳入研究的基本特征，包括作者、发表年份、环状RNA 类型、环状RNA 表达水平、检测方法、对照例数、病例数等；②直接提取或间接使用Engauge Digitizer 4.1 软件从生存曲线上获取所需数据，再通过Jayne F Tierney 提供的HR计算表格获得总生存率的HR 及其95%CI。根据纽卡斯尔·渥太华量表（Newcastle-Ottawa scale，NOS）对纳入文献进行质量评价，内容包括：①研究对象的代表性、研究起始时结局指标是否确定等；②暴露组和非暴露组的可比性；③结果的测定方法、随访时间是否足够长、随访的完整性等3 个方面。NOS 评分范围为0～9 分，评分≥6 分表明纳入文献的质量较高。

1.4 统计学方法

采用Review Manager 5.3 进行Meta 分析。依据统计量

I

判断各研究间的异质性，

I

﹥50%时，表明各研究间存在异质性，采用随机效应模型；反之，采用固定效应模型。合并效应量采用HR 及其95%CI，用于评估环状RNA 与NSCLC 患者预后的关系，以

P

﹤0.05 为差异有统计学意义。采用敏感性分析评估Meta 分析结果的稳定性，通过漏斗图检测是否存在发表偏倚。

2 结果

2.1 文献筛选结果

按照检索策略共获得相关文献850 篇，剔除重复文献386 篇，剔除会议摘要、病例报道、动物实验、综述类文献409 篇后得到55 篇文献，剔除不能直接或没有充分数据计算HR 和95%CI 的文献后，最终纳入27 篇文献。

2.2 纳入文献的基本特征

共纳入27 篇文献，均发表于2018—2019年，样本量为2197 例，均为NSCLC 患者，其中环状RNA 高表达1142 例，低表达1055 例，随访时间为16～150 个月，结局指标均包括总生存率。27 篇文献中，12 篇文献可直接获得HR 及95%CI，15 篇文献需要提取生存曲线数据间接计算。根据NOS 量表对27 篇文献进行质量评价，总体NOS 评分为6～8 分，提示纳入预后分析研究的质量较高。（表1）

表1 纳入文献的基本特征

2.3 Meta 分析结果

2.3.1 促癌环状RNA 对NSCLC 患者预后的评估价值 本研究中共22 篇文献探讨了促癌环状RNA 对NSCLC 患者预后的评估价值，异质性分析结果显示，

I

=0，

P

﹥0.05，故采用固定效应模型进行预后Meta 分析，结果显示，与促癌环状RNA 低表达的患者相比，促癌环状RNA 高表达NSCLC 患者的总生存率明显更低（HR=2.07，95%CI：1.81～2.38，

P

﹤0.01）。（图1）

图1 促癌环状RNA不同表达情况NSCLC患者的总生存森林图

2.3.2 抑癌环状RNA 对NSCLC 患者预后的评估价值 本研究中共5 篇文献探讨了抑癌环状RNA 与对NSCLC 患者预后的评估价值，异质性分析结果显示，

I

=0，

P

﹥0.05，故采用固定效应模型进行预后Meta 分析，结果显示，与抑癌环状RNA高表达的患者相比，抑癌环状RNA 低表达NSCLC患者的总生存率明显更低（HR=0.50，95%CI：0.36～0.70，

P

﹤0.01）。（图2）

图2 抑癌环状RNA不同表达情况NSCLC患者的总生存森林图

2.4 敏感性分析和发表偏倚

逐渐排除单个研究时，其余研究合并的HR 没有明显变化，表明该Meta 分析结果的稳健性较好。本研究基于总生存率绘制HR 漏斗图进行发表偏倚检测，结果显示，漏斗图集中趋势明显，不存在发表偏倚。（图3）

图3 纳入研究文献的发表偏倚漏斗图

3 讨论

全球范围内，肺癌对人类生命健康的威胁日益严重，其发病率及病死率均居中国首位。尽管NSCLC 的表皮生长因子受体（epidermal growthfactor receptor，EGFR）、程序性死亡受体配体1（programmed cell death 1 ligand 1，PDCD1LG1，也称PD-L1）等靶向治疗的应用价值较高，但NSCLC起病隐匿、确诊晚、治疗缓解率较低、继发性耐药性较高、预后差等问题仍亟待解决。准确评估NSCLC 患者的预后可以作为治疗方案调整的重要参考。因此，寻找一种能够指导NSCLC 诊断、治疗的新型特异性生物标志物，特别是与NSCLC 患者总生存率相关的潜在靶点是肺癌治疗领域亟待解决的问题。

近年来，随着高通量测序技术和生物学信息技术的发展和完善，临床关于环状RNA 的研究不断深入，发现环状RNA 在肿瘤发生发展中发挥着重要作用。同时，环状RNA 以其数量多、稳定性高、高度进化保守性及组织特异性强等特点，可能成为肿瘤早期诊断和预后评估的新型生物标志物。目前，已有多项研究初步发现，环状RNA 对NSCLC 患者的预后评估具有一定的预测价值，初步表明环状RNA 在NSCLC 预后评价中具有潜在的临床应用价值。

本研究共对27 篇关于环状RNA 与NSCLC 患者预后关系的相关文献进行了Meta 分析，结果显示，促癌环状RNA 高表达NSCLC 患者的总生存率明显更低，抑癌环状RNA 低表达NSCLC 患者的总生存率明显更低，表明高表达的促癌环状RNA 和低表达的抑癌环状RNA 可能成为NSCLC 患者预后的不良指标。此外，本研究Meta 分析结果的稳定性较好，且不存在发表偏倚。但本研究尚有一些不足之处：①样本量有限，需要进一步扩大样本量以增加可信度。②亚组分析可以得出一些新的结论，但分组后样本量减小，再次合并后可能增大某些偏倚。③纳入的研究皆为队列研究或病例对照研究，文献证据等级存在一定局限性。④预后分析中，部分文献的HR 需要间接提取，可能与文献结果存在一定偏差。

综上所述，环状RNA 可能作为中国NSCLC 患者预后评估的新型生物标志物，但今后还需要更多大样本、高质量的前瞻性研究来进一步证实其准确性和稳定性。