基于质谱技术的药物代谢产物鉴定策略进展

周惠

（泰州市第三人民医院，江苏 泰州，225300）

目前对于MDPV 药物的检测，主要集中在气相色谱-质谱联用法、液相色谱法等。液相色谱-质谱（LC-MS）技术属于较为先进技术，目前被广泛用于食品、医药等方面。1 次进样后可以获取二级以及三级子离子的全扫描质谱图，定性分析时，获取的化合物结构信息比四级杆质谱多，由此液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用技术已成为代谢物结构分析的常用方法。本次研究主要探讨采用液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用技术，构建MDPV 药物代谢产物的鉴定方法，对于代谢动力学、病毒学等方面均具有一定指导意义。

1 资料与方法

1.1 样品来源检测样品为亚甲基二氧吡咯戊酮（MDPV），来源于安徽省公安厅合肥市公安局提供；SD 大鼠，均为雄性。

1.2 试验条件色谱条件：色谱柱（150mm×2.1mm，5μm），流动相为醋酸铵-甲酸缓冲溶液，甲醇为B 为洗脱液，0-1min，10%B，1-6min，10%B-90%B，6-14min，90%B，0.2ml/min，10 μL。质谱条件为电喷雾离子化源、正离子检测，全离子扫描，选择反应监测扫描模式，毛细血管350℃，雾化气30.00L/min，加热辅助气8.00L/min，吹扫气2.00L/min。

1.3 体外代谢与样品处理过程配置MDPV 样品浓度，加入蒸馏水溶液调整样品浓度为50.0μg/ml，制成标准品溶液，获取适量标准品溶液于试管，再加2.0mg/ml 蛋白质溶液的SD 大鼠肝微粒体S9组分KCl-PBS 缓冲溶液，剂量为200μL，混匀，再试管置于水浴锅内进行孵育处理，再予以适量的NADPH KCl-PBS溶液，获取MDPV 孵育体系，MDPV（5.0 μ g/ml）、NADPH（1.0mmol/L）、肝微粒体蛋白质（1.0mmol/L）。将其置于水浴锅孵育，加乙腈，混匀，冰浴，离心，14000r/min，过有机滤膜，采用LC-MS 检测。

2 结果

2.1 构建MDPV 及代谢物的LC-MS 方法优化实验条件下MDPV分析的LC-MS 图谱，见图1。

2.2 MDPV 以及其代谢物的LC-MS 分析色谱图MDPV 以及其代谢物的LC-MS 分析色谱图。见图2。

图2 MDPV 以及其代谢物的LC-MS 分析色谱图

2.3 大鼠肝微粒体S9 组分中MDPV 浓度孵育时间变化趋势随着大鼠孵育时间的增加，MDPV 浓度逐渐下降，孵育时间至120min时，MDPV 浓度无明显变化，由此，最终确定孵育最佳时间为120min。见图3。

图3 大鼠肝微粒体S9 组分中MDPV 浓度孵育时间变化趋势

2.3 MDPV 代谢物的MSn图谱化合物M2色谱保留时间9.64min，m/z 为264.3，经过二级串联质谱分析，m/z 为193.0，经过三级串联质谱分析，m/z 为175.0。见图4。

图4 MDPV 代谢物的MSn图谱

3 讨论

本次研究采用多级串联质谱法，确定MDPV 及其代谢物，与MDPV 样品色谱保留时间以及各级色谱行为，最终鉴定为MDPV。二级串联质谱m/z 为207.0，对于MDPV 在一致条件下获取的准分子离子以及二级串联质谱，三级串联质谱基峰离子具有一致性，表明二者存在相似骨架结构，因为MDPV 的化学结构与MDMA相似，MDMA 在体外代谢产物主要为HMMA，而HMMA 与MDMA 质谱基峰离子相差2Da，由此，进一步推测该化合物为MDPA 的代谢物去亚甲基-甲基化产物1-（4-羟基-3-甲氧基）苯基-2-吡咯戊酮。化合物M2m/z 为264.3，对于MDPV 基峰降低12Da，经过二级串联质谱分析，得到m/z193.0，经过三级串联质谱分析，获取碎片离子m/z175.0，推测M2 化合物为MDPV 的去亚甲基产物1-（3,4-二羟基）苯基-2-吡咯戊酮。本次研究鉴定结果与肖惠贞等人研究具有一致性[3]。化合物M3 和M4m/z 相同，对于MDPV 增加了16Da，三级质谱碎片分别为191.1、258.2，色谱保留的时间也存在差异，进一步推测M3 和M4 为同分异构体[4]。

本次研究所构建的体系成本小，设备要求低，另外可以在较短时间检测代谢产物，便于提取、分离、纯化等，本研究采用LC-MS 分析药物代谢产物，一定程度为代谢动力学、病毒学等提供参考。