葛根提取物对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用

陈苑红 陈国权

广东省佛山市顺德区第三人民医院(北滘医院)，广东 佛山 528000

急性肝损伤是临床上常见的肝脏疾病，许多因素如化学物质、感染、缺血、药物及酒精等均会造成急性肝脏损伤，引发肝功能的不全[1]。临床上，急性肝损伤患者有着血清转氨酶的升高、胆红素升高等表现。长期肝损伤则会导致肝纤维化、肝硬化、肝癌甚至肝衰竭，严重危害人类的身体健康。目前临床上主要使用核苷类似物、维生素类以及保肝降酶等药物进行对症治疗，可供选着的针对性药物较少，并且在治疗过程往往伴随着一定的不良反应的发生[2]。因此，目前仍需寻找安全有效的治疗药物。

葛根是豆科植物野葛或甘葛藤干燥的根，具有透疹、解肌退热、升阳止泻、生津止渴等功效。临床上主要用于阴虚消渴、麻疹不透、脾虚泄泻等疾病的治疗。现代研究[3-4]发现，葛根具有降血压、降血糖、保护心肌缺血再灌注损伤、抗肿瘤、抗脂质过氧化等药理作用，并在保护肝脏方面也具有一定作用。为了进一步研究葛根的肝脏保护作用，研究采用CCl4诱导急性肝损伤模型，探讨葛根对化学毒性物诱导的急性肝损伤的保护研究。

1 材料

1.1 实验动物 昆明小鼠60只，雄性，SPF级，体质量18～22 g，购自广东省医学动物实验中心，许可证号：SCXK(粤)2013-0002。

1.2 药品与试剂 葛根提取物(葛根总黄酮≥60%，批号20180412，西安赛邦生物技术有限公司)，联苯双酯滴丸(批号：17070103，北京协和药厂)，分析纯四氯化碳(批号：201407，天津市富宇细化工有限公司)，丙氨酸氨基转移酶试剂盒(ALT，批号：20180506)、天门冬氨酸氨基转移酶试剂盒(AST，批号：20180516)，总胆汁酸试剂盒(TBA，批号：20180412)、总胆红素试剂盒(TBIL，批号：20180604)、碱性磷酸酶试剂盒(ALP，批号：20180203)，γ-谷氨酰转移酶试剂盒(γ-GT，批号：20180405)、总超氧化物歧化酶试剂盒(SOD，批号：20180522)、丙二醛试剂盒(MDA，批号：20180325)、总抗氧化能力试剂盒(T-AOC，批号：20180221)、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒子(GSH-Px，批号：20180425)等均购自南京建成生物工程研究所。白介素-1β(IL-1β，批号：EK0394)、白介素-6(IL-6，批号：EK0411)、转化生长因子-β(TGF-β，批号：EK0515)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α，批号：EK0527)检测试剂盒等均购自博士德生物工程有限公司。

1.3 仪器 全波长酶标仪(Thermo Fisher Scientific公司)，紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，HH-S8数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂)，台式高速离心机(长沙湘智离心机仪器有限公司)。

2 方法

2.1 分组、给药及模型制备 小鼠适应性喂养1周后进行实验，随机分成正常对照组、模型组、葛根提取物高、中、低剂量组、联苯双酯组，每组10只。采取灌胃给药，正常对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水。参考文献剂量[5-6]，葛根提取物高、中、低剂量组给药剂量为400、200、100 mg/kg，联苯双酯组给药剂量为100 mg/kg。每天一次，连续进行14 d。末次给药2 h后，除正常对照组外，其余各组小鼠按10 mL/kg的剂量腹腔注射0.2% CCl4橄榄油溶液，正常对照组注射等体积橄榄油。造模24 h后，小鼠后眼眶静脉丛取血，颈椎脱臼处死，剥离肝脏。

2.2 指标检测 血液室温静置1 h后，3000 r/min离心10 min，分离血清，按试剂盒检测方法分别检测血清中ALT、AST、TBA、TBIL、ALP、γ-GT的含量；取同部位肝组织，加入预冷后的生理盐水，冰上进行匀浆，3500r/min离心10 min，吸取上清液，按试剂盒的检测方法分别检测肝组织中的SOD、MDA、T-AOC、GSH-Px、IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α的含量。

3 结果

3.1 各给药组小鼠血清中ALT、AST含量变化 与正常对照组比较，造模后，模型组小鼠血清中ALT、AST含量显著性增高(P<0.01)；与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠血清中ALT、AST含量显著性降低(P<0.05或0.01)。结果见表1。

表1 各给药组小鼠血清中ALT、AST含量变化

3.2 各给药组小鼠血清中TBA、TBIL含量变化 与正常对照组比较，模型组小鼠血清中TBA、TBIL含量显著性增高(P<0.01)；与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠血清中TBA、TBIL含量显著性降低(P<0.05或0.01)。结果见表2。

表2 各给药组小鼠血清中TBA、TBIL含量变

3.3 各给药组小鼠血清中ALP、γ-GT含量变化 与正常对照组比较，模型组小鼠血清中ALP、γ-GT含量显著性增高(P<0.01)；与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠血清中ALP、γ-GT含量显著性降低(P<0.05或0.01)。结果见表3。

表3 各给药组小鼠血清中ALP、γ-GT含量变化

3.4 各给药组小鼠肝组织中SOD、MDA含量变化 与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织中SOD含量显著性降低(P<0.01)，MDA含量显著性增高(P<0.01)；与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中SOD含量显著性升高(P<0.05或0.01)，MDA含量显著性降低(P<0.05或0.01)。结果见表4。

表4 各给药组小鼠肝组织中SOD、MDA含量变化

3.5 各给药组小鼠肝组织中T-AOC、GSH-Px含量变化 与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织中T-AOC和GSH-Px显著性减低(P<0.01)；与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中T-AOC和GSH-Px显著性升高(P<0.05或0.01)。结果见表5。

表5 各给药组小鼠肝组织中T-AOC、GSH-Px含量变化

3.6 各给药组小鼠肝组织中IL-1β、IL-6含量变化 与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织中IL-1β和IL-6含量显著性升高(P<0.01)；与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中IL-1β和IL-6含量显著性降低(P<0.05)。结果见表6。

表6 各给药组小鼠肝组织中IL-1β、IL-6含量变化

3.7 各给药组小鼠肝组织TGF-β、TNF-α含量变化 与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织中TGF-β和TNF-α含量显著性升高(P<0.01)；与模型组比较，葛根提取物高、中、低剂量组和联苯双酯组小鼠肝组织中TGF-β和TNF-α含量显著性降低(P<0.05或0.01)。结果见表7。

表7 各给药组小鼠肝组织TGF-β、TNF-α含量变化

4 讨论

正常情况下，ALT和AST主要存在肝细胞当中，当肝细胞受损或者发生变性坏死时，二者就会释放入血，引起血液中含量升高。此外，当肝脏发生损伤或者病变时，血液中TBA、TBIL、ALP、γ-GT含量也会显著升高。因此，ALT、AST、TBA、TBIL、ALP和γ-GT均是反映肝细胞损伤程度，评价肝功能的重要指标[7-8]。实验结果显示，葛根提取物能够降低血清中升高的ALT、AST、TBA、TBIL、ALP和γ-GT的含量。提示葛根提取物具有保肝作用。

脂质过氧化反应、炎症反应是急性肝损伤发生的重要机制之一[9-10]。抗脂质过氧化，减轻炎症反应能有效的缓解肝损伤。SOD和GSH-Px是体内抗氧化系统中重要的两种抗氧化酶，起到保护细胞膜结构和功能完整的作用，其含量的多少反映了体内抗氧化能力的高低。MDA作为脂质过氧化的最终产物之一，容易导致细胞的变性坏死，其含量高低可以反映体内过氧化损伤程度。实验结果显示，葛根提取物能提高肝组织中T-AOC、SOD、GSH-Px含量，降低MDA含量，提示葛根提取物具有较好的抗脂质过氧化作用。IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β是体内重要的细胞因子，正常情况下，其含量处于较低水平。当体内受到危险因素攻击时，其表达升高，则会引发炎症反应，引起肝细胞的坏死，诱导肝实质细胞凋亡。实验结果显示，葛根提取物能降低肝组织升高的IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α含量，提示葛根提取物具有抗炎作用。

综上，葛根提取物对CCl4致小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用，其机制可能与抗脂质过氧化、抗炎相关。