1%谷维菌素可溶液剂的高效液相色谱分析方法

王龙，卞传飞，刘浪，高美珠，吴天琦，李保同

(江西农业大学 国土资源与环境学院，江西 南昌 330045)

植物生长调节剂是模仿了植物激素的生长调节作用而人工合成的化合物，在蔬菜、水果、粮食等方面广泛应用[1-4]，现已成为作物高产、稳产和优质高效的重要工艺[5-10]。谷维菌素是一种植物生长调节剂，有使用剂量低、高药效的特征，可降低株高、增粗茎基部、降低重心，从而增加产量。本文建立了高效液相色谱测量1%谷维菌素可溶液剂中有效成分含量的方法，精确度好，经济实惠，结果可靠，适用于定量分析谷维菌素。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

谷维菌素标准品(≥98%，江西农业大学理学院)；1%谷维菌素可溶液剂(东北农业大学)；乙腈、磷酸均为色谱纯。

安捷伦1260型Ⅱ代液相色谱仪；Poroshell 120 EC-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，4-Micron)；EX224ZH电子天平。

1.2 溶液配制

1.2.1 标准溶液配制 用电子天平准确称取谷维菌素标准品0.010 0 g，于100 mL容量瓶中，加入 10 mL 乙腈，进行溶解，再用超声波水浴助溶，冷却至室温、溶液清澈透明后，用乙腈定容至刻度线，摇匀，配制成100 mg/L的溶液，放置冰箱冷藏备用。

1.2.2 试样溶液配制 用电子天平精准称量1%谷维菌素可溶液剂1.000 0 g，于100 mL容量瓶中，加入10 mL乙腈，进行溶解，再用超声波水浴助溶，冷却至室温、溶液清澈透明后，用乙腈定容至刻度线，摇匀，配制成100 mg/L的溶液，放置冰箱冷藏备用。

1.3 实验方法

可变波长检测器(VWD)，检测波长261 nm；流动相为C2H3N∶1%磷酸水=20∶80(体积比v/v)，流速0.35 mL/min，柱温30 ℃，进样量10 μL。

等待仪器泵的压力和基线趋于稳定后，移取1份标准溶液，通过0.22 μm有机滤膜再注入进样瓶，然后上机检测，在重复跑完几组标准品后，观察相邻2组的峰面积，待峰面积变化幅度低于1.5%时，按照标→试→试→标样溶液的顺序进样，进行上述操作。测定结果见图1、图2。

图1 谷维菌素标样液相色谱图

图2 1%谷维菌素可溶液剂液相色谱图

根据谷维菌素标准品溶液和1%谷维菌素可溶液剂的峰面积(分别取平均值)，利用以下公式计算试样溶液中谷维菌素的含量(W2，%)：

式中A1、A2——分别为标样峰面积和试样峰面积；

M1、M2——分别为标样的质量和试样的质量，g；

W1——标样中谷维菌素的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

取一定量的100 mg/L的谷维菌素标准溶液，进行紫外扫描，得到吸收光谱，见图3。

由图3可知，谷维菌素在261 nm附近吸收波长最大。因此，选择261 nm为检测波长。

图3 谷维菌素标准溶液紫外吸收色谱图

2.2 流动相的确定

为了选择合适的流动相，反复测试了甲醇/水、乙腈/水、甲醇/0.1%磷酸水、甲醇/0.1%甲酸水、乙腈/0.1%磷酸水和乙腈/0.1%甲酸水体系的不同比例，以及测试了柱温对峰面积以及保留时间的影响。经测试发现，柱温对其影响较小，不对其进行单独讨论；而不同的流速对出峰时间的影响为：流速越小，保留时间越久；采用乙腈作为有机相，峰面积更大、峰更高、杂峰更少；乙腈/水的峰型中会出现拖尾以及峰型不对称的现象，所以将水相更换为磷酸水或者甲酸水；而相对于甲酸水，磷酸水的峰型普遍对称。因而选择乙腈/0.1%磷酸水作为流动相，并对其体积比进行优化，发现乙腈比例越少，峰型越完美，而乙腈的多少对于峰面积的影响较小。出于保留时间、峰型和经济考虑，最终决定色谱条件为：体积比为20∶80的乙腈和0.1%磷酸水作为流动相，流速为0.35 mL/min，柱温30 ℃。

2.3 线性相关性的测定

制备质量浓度梯度为0.01，0.1，1，10，25，50，100 mg/L的谷维菌素标准液，根据上述液相条件进行检测，利用外标法(峰面积)进行定量分析。以谷维菌素标液的质量浓度作为x横坐轴，谷维菌素标准溶液的色谱峰面积作为y纵坐轴，做标准曲线图(图4)。

图4 谷维菌素标准曲线

将数据拟合，得线性回归方程为y=92.186x-24.665，R2=0.999 8，表明在0.01～100 mg/L浓度范围内，峰面积与质量浓度具有良好的拟合度。

2.4 方法精密度的测定

按照上述液相条件，从同一100 mg/L谷维菌素可溶液剂试样中吸取5份等量样品，等仪器基线平稳后连续测定，通过计算得到1%谷维菌素可溶液剂的结果标准偏差和变异系数都为0.25%(见表1)，变异系数符合国际农药分析协作委员会(CIPAC)的要求(<1.17%)，证明此方法精密度高。

表1 1%谷维菌可溶液剂精密度测定

2.5 方法准确度的测定

称取5份相同质量分数的1%谷维菌素可溶液剂试样于容量瓶中，分别加入不同质量的谷维菌素标准品，混合定容之后摇匀，待仪器基线平稳后，再上机进行检测，结果见表2。

表2 1%谷维菌素可溶液剂准确度测定结果

由表2可知，该条件下谷维菌素的回收率在99.44%～101.45%之间。

3 结论

以Poroshell 120 EC-C18反相色谱柱作为分离柱，采用可变波长检测器(VWD)，检测波长为 261 nm，以乙腈/0.1%磷酸水(体积比20∶80)作为流动相，流速为0.35 mL/min，建立了一种检测1%谷维菌素可溶液剂的有效成分的高效液相色谱分析方法。该方法操作简易，分离效果良好，经济实惠，具有良好的拟合度，且精密度和准确度高，适用于1%谷维菌素可溶液剂的定量检测。