乳腺癌超声造影征象与高尔基磷酸化蛋白3表达的关系

塔娜 王霞 李文娟 张爱红

超声检查是诊断乳腺癌的重要技术。超声造影的时间-强度曲线可减少超声造影定性分析带来的误差[1-3]。高尔基磷酸化蛋白3(golgi phosphoprotein 3，GOLPH3)属于高尔基体复合物相关蛋白，与多种肿瘤的预后相关[4-5]。本研究观察乳腺癌超声造影的特征及GOLPH3的表达情况，评估两者之间的关系。

对象与方法

一、对象

2014年1月～2015年4月我院收治乳腺癌病人107例，年龄39～73岁，平均年龄(60.18±7.28)岁。病理分型为浸润性导管癌。临床分期：Ⅰ期48例，Ⅱ期30例，Ⅲ期29例。纳入标准：(1)病理检查确诊为乳腺癌；(2)无乳腺其他疾病；(3)知情同意。排除标准：合并其他部位肿瘤或远处转移；精神疾病。

二、方法

1.超声造影检测：选择Philips iU22多普勒彩色超声仪，探头型号EUP-L74M作为超声诊断仪器，选用频率为5～12 MHZ的线阵型高频的探头。首先评估肿块边界、形状、纵横比、内部回声、后放回声、钙化及血流等。随后采用L9-3宽频线阵探头，调至造影模式，静脉弹丸式注射常规配置的SonoVue超声造影剂。造影过程观察连续动态图像2 min，全程图像存于硬盘。分析病灶的造影图像：选择病灶区与周围正常乳腺组织为感兴趣区，得到时间强度曲线，分析到达时间、增强时间，减低时间，曲线下面积等参数。

2.乳腺癌组织中GOLPH3的表达及判断：使用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法检测GOLPH3表达。免疫组化试剂盒(上海吉满生物有限公司)，兔抗人GOLPH3 多克隆抗体(德国ChromoTek公司)，鼠抗兔单克隆二抗(上海吉满公司)。GOLPH3阳性位于细胞膜上，黄褐色定义为阳性，分别选择10个视野，计算1000个细胞阳性比例：<10%(-)；10%～49%(+)；50%～89%(++)；≥90%(+++)[4]。

3 随访：所有病人均随访60个月，失访1例，失访率0.93%。本研究以术后病理明确为起始日期至死亡日期或随访终止日期定义为总生存事件(OS)。随访方式主要以电话、门诊复查方式。

三、统计学分析

结果

1. 乳腺癌组织中GOLPH3不同表达与病理特征的关系 ：107例乳腺癌组织，GOLPH3表达阳性87例，阳性率81.21%。其中(+)13例，(++)25例，(+++)49例。见图1。GOLPH3不同表达强度间年龄、肿瘤大小无明显差异(P=0.431,0.238)，淋巴结转移、临床分期比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 乳腺癌组织中GOLPH3不同表达强度与临床病理特征的关系

A:阴性；B:弱阳性；C:中等阳性；D:强阳性

2.超声造影特征：乳腺癌超声造影显示病灶低增强21例(19.6%)，等增强22例(20.6%)，高增强64例(59.8%) ； 病灶早增强68例(63.6%)，同步增强22例(20.5%)，晚增强17例(15.9%)；病灶早消退35例(32.7%)，同步消退28例(26.2%)，晚消退44例(41.1%)。见图2、3。

A:造影剂进入丰富，肿块呈整体性增强；B:乳腺癌组织和周围乳腺组织的时间-强度曲线分析。与癌组织相比，周围乳腺组织具有强回声增强和快速输出的特点。与周围乳腺组织相比，乳腺癌组织曲线缓慢下降(黄色曲线)

乳腺癌周围正常乳腺组织超声造影显示组织低增强76例(71.0%)，等增强18例(16.8%)，高增强13例(12.2%) ； 早增强9例(8.4%)，同步增强13例(12.2%)，晚增强85例(79.4%)；早消退26例(24.3%)，同步消退45例(42.1%)，晚消退36例(33.6%)。

3.GOLPH3阳性与阴性乳腺癌超声造影定量分析参数比较见表2。与GOLPH3阴性乳腺癌比较，GOLPH3阳性乳腺癌的始增时间、达峰时间、峰值加速时间降低，始增速度、增强速率增加，差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 GOLPH3阳性与阴性乳腺癌超声造影定量分析参数比较

4.乳腺癌GOLPH3表达水平及超声造影参数与病人预后的关系：不同GOLPH3表达水平及超声造影参数乳腺癌病人的5年生存率差别具有统计学意义(P<0.05)。见图4。

A:超声造彩图，可见放射状増强、造影后范围扩大；B:时间-强度曲线图，曲线下面积为1 252.257 dB·S，峰值强度为22.674 dB

图4 乳腺癌GOLPH3表达水平及超声造影参数与病人预后的关系

讨论

超声造影可以及时获取局部组织的血流情况，观察造影区解剖和代谢等情况，从而增强细微特征的分辨和血流信号的灵敏度，清晰准确的观察肿瘤微血管灌注的特征，从而通过定量参数评估肿瘤的超声特征[6-8]。乳腺癌超声造影表现为快进、有粗大血管供血、不均匀强化等。本研究结果表明，与周围组织比较，乳腺癌组织的超声造影各参数均有明显差异。其原因可能为：肿瘤组织血管较多且管壁通透性高，易形成动静脉瘘；同时肿瘤向周边侵袭的过程中会分泌VEGF，刺激血管大量生成，但这些血管扭曲，粗细不均，表现为动静脉瘘等特征，导致造影剂快速进入并快速退出的现象，在造影图像上表现为快速高增强，快进快退征象。同时我们分析了乳腺癌组织的超声造影各参数与预后的关系，结果显示，超声造影参数与乳腺癌病人的5年生存率有关。不同超声参数代表了不同的肿瘤血管浸润，影响肿瘤转移，影响预后。

GOLPH3属于高尔基体复合物相关蛋白，是一种癌基因，与肿瘤进展密切相关[9]。多中心研究表明，GOLPH3能促进肿瘤细胞的增殖、侵袭能力[10-11]。有学者发现，结直肠癌组织GOLPH3 高表达，与疾病的进展密切相关[12]。另外研究表明，非小细胞肺癌组织GOLPH3 高表达提示病人预后不佳[13]。另有学者发现，在舌癌、胃癌、神经胶质瘤、前列腺癌及妇科多种恶性肿瘤等中GOLPH3同样高表达[14-15]。本研究表明，GOLPH3在乳腺癌组织中高表达，提示预后不良，与文献报道一致[16]。目前超声造影参数与GOLPH3蛋白的相关性尚不清楚，本研究结果表明，GOLPH3阳性与阴性乳腺癌病人的超声造影参数显著差异，与乳腺癌的预后有关，这提示乳腺癌组织的超声参数与预后因子GOLPH3有关。可能是GOLPH3通过调节DNA损伤后的多种机制，促进肿瘤的侵袭、转移，在超声造影特征上表现为始增时间、达峰时间、峰值加速时间降低，始增速度、增强速率增加。

本次研究尚存在一定的局限性，未对病人的临床病理参数与免疫指标进行分析，同时未能对病人进行随访，分析超声参数与生存的关系。