高尔基体蛋白-73和骨桥蛋白在肝癌肝硬化中的表达及对肝硬化分级辅助诊断的价值

赵艳，王宏鑫，郭丽娜，闫海洋，胡金朋，王振国

1.天津市和平区南营门街社区卫生服务中心，天津 300041；

2.武警特色医学中心急诊科，天津 300162；

3.天津医科大学第二医院肝胆胰外科，天津 300211

肝硬化是肝脏相关疾病和死亡的主要原因，各种慢性的疾病均可导致肝脏损害和肝细胞变性坏死[1]。由于机体的自我修复，正常的肝小叶结构被增生性纤维组织和再生的结节状假小叶所替代，这个过程不可逆，经过一系列的病理生理变化导致肝硬化的发生[2]。高尔基体蛋白73 (GP73)是一种高尔基体特异性膜蛋白，由正常肝脏中的胆管上皮细胞表达，在肝炎、肝硬化和肝癌中增加，并且还与肝纤维的发生相关[3]。肝星状细胞激活提供胞外基质中胶原蛋白的主要来源，并加速肝纤维化[4]。骨桥蛋白(OPN)是介导肝星状细胞活化的因子之一[5]。在生理状态下，OPN在肾和骨中表达，而在病理条件下，OPN 表达可以被归因于不同器官的炎症、肝纤维化和致癌作用[6]。本研究通过探讨GP73和OPN 对肝硬化Child-Pugh 分级诊断的意义，旨在为临床治疗及护理策略提供帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2017 年5 月至2020 年5 月武警特色医学中心接收的72 例肝癌肝硬化患者纳入研究(肝硬化组)，所有患者均经腹部超声、肝脏CT 或MRI等影像学检查。纳入标准：①年龄18～65岁；②初诊肝癌肝硬化，符合2019 年中华医学会肝病学分会提出的《肝硬化诊治指南》；③临床资料完整；④依从性良好，能配合治疗者。 排除标准：①年龄<18 岁或>65 岁；②合并其他器官严重疾病患者。对照组为本院近期40 例健康体检者，腹部超声检查正常，没有肝脏疾病的临床或生化证据。本研究符合《赫尔辛基宣言》的原则。

1.2 观察指标与检测方法所有受试者禁食、禁饮12 h 后采集空腹静脉血。血红蛋白(Hb)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)应用URIT-5250全自动血细胞分析仪测定；凝血酶原时间(PT)应用MDC3500全自动凝血仪及原装试剂测定；血清白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST) 和总胆红素(TBIL)应用全自动生化分析仪器(贝克曼库尔特AU5800)测定；甲胎蛋白(AFP)、GP73 和OPN (Abcam 公司)按照试剂说明书采用ELISA法检测。

1.3 Child-Pugh分级按评分值分级：A级5～6分，B级7～9分，C级≥10分，见表1。

表1 Child-Pugh 分级评分标准

1.4 统计学方法应用SPSS24.0 统计学软件进行数据统计分析。所有计量资料行正态分布检验后均符合或类似正态分布，以均数±标准差(±s)表示，组间采用独立样本t 检验；计数资料比较采用χ2检验。GP73、OPN 和各指标的相关性采用Spearman 相关法分析。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析法分析GP73、OPN 诊断肝癌肝硬化的灵敏度和特异性。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组受检者的临床特征比较两组受检者的性别和年龄比较差异均无统计学意义(P>0.05)。肝硬化组患者的ALT、AST、PT 、TBIL、AFP 、GP73、OPN水平明显高于对照组，而Hb、WBC、PLT、ALB水平明显低于对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组受检者的临床特征比较(±s)

表2 两组受检者的临床特征比较(±s)

观察项目年龄(岁)男/女(例)ALT (U/L)AST (U/L)Hb (g/L)WBC (×1012/L)PLT (×109/L)PT (s)ALB (g/L)TBIL (μmol/L)AFP (μg/mL)OPN (ng/mL)GP73 (ng/mL)肝硬化组(n=72)57.2±11.3 41/31 68.36 ± 17.1 57.26 ± 14.2 12.4 ± 1.7 5.3 ± 1.3 127.4 ± 32.8 16.85±3.64 34.24±9.65 63.97±15.65 13.71±3.43 128.85± 31.93 89.39±21.91对照组(n=40)54.2±12.3 23/17 22.9 ± 6.0 13.5 ± 4.2 14.1 ± 1.3 6.9 ± 1.2 310.3 ± 45.1 12.12±1.24 49.65±10.05 12.37±3.15 6.75±1.73 70.45± 19.02 26.43±6.81 t/χ2值1.304 0.003 16.24 19.00 5.491 6.421 24.65 7.952 7.979 7.125 12.00 10.56 17.67 P值>0.05>0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05

2.2 血清OPN、GP73 与肝功能重要指标的相关性血清OPN与AFP 、TBIL、PT以及Child-Pugh分级均呈正相关(P<0.05)，与ALB 呈负相关(P<0.05)；血清GP73 与AFP 、TBIL、PT 以及Child-Pugh 分级均呈正相关(P<0.05)，与ALB呈负相关(P<0.05)，见表3。

表3 OPN、GP73与肝功能重要指标的关系

2.3 血清AFP、OPN 和GP73 表达水平与肿瘤大小的关系按照肿瘤大小分组，直径≥3 cm 组39 例，直径<3 cm 组33 例。与直径<3 cm 组相比，AFP、OPN与GP73 血清表达水平明显升高，差异具有统计学意义(P<0.05)，见图1。

图1 血清肿瘤标志物与肿瘤大小的关系

2.4 血清AFP、OPN 和GP73 诊断肝癌肝硬化的效能AFP 的ROC 曲线下面积为0.802 (95% CI：0.715～0.889)，当界值确定为10.0 μg/L 时，AFP 诊断肝癌肝硬化的灵敏度为73.6%，特异性为85.0%；OPN 的ROC 曲线下面积为0.832 (95%CI：0.757～0.907)，当诊断界值确定为108.0 μg/L 时，OPN 诊断肝癌肝硬化的灵敏度为73.6%，特异性为87.5%；GP73 的ROC 曲线下面积为0.870 (95%CI：0.798～0.943)，当诊断界值确定为54.0 μg/L 时，GP73 诊断肝癌肝硬化的灵敏度为79.2%，特异性为85.0%，见图2A。AFP 和OPN联合检测的ROC 曲线下面积为0.901 (95%CI：0.844～0.959)，联合诊断的灵敏度为89.7%，特异性为74.5%；AFP 和GF73 联合检测的ROC 曲线下面积为0.941 (95%CI：0.899～0.984)，联合诊断的灵敏度为91.7%，特异性为75.0%；OPN 和GF73 联合检测的ROC 曲线下面积为0.950 (95% CI：0.913～0.988)，联合诊断的灵敏度为92.9%，特异性为77.5%；AFP 、OPN 和AFP 联合检测的ROC 曲线下面积为0.952 (95%CI：0.915～0.989)，联合诊断的灵敏度为97.3%，特异性为71.5%，见图2B。

图2 血清肿瘤标志物对肝癌肝硬化诊断的ROC曲线

3 讨论

在过去几年中许多蛋白被视为替代AFP 诊断肝癌的潜在生物标志物，单独使用或与AFP 结合使用以提高其诊断的准确性。其中一些标志物越来越多地用于患者的常规检查，例如凝集素结合甲胎蛋白(AFP-L3)和脱-γ-羧基凝血酶原(DCP)。同时，还有其他几个新标记仍在研究中，包括Dickkopf-1 (DKK1)、OPN、GP73、Glypican-3 (GPC3)，以及不同的microRNAs (miRs)[6-7]。本研究的目的是评估血清GP73、OPN蛋白水平用于肝癌肝硬化诊断的可能性，并比较它们单独使用或与AFP联合诊断的准确性。

本研究发现，肝硬化组患者的GP73、OPN 水平与对照组相比显著升高，GP73、OPN 与肝癌肝硬化指标(AFP、TBIL、PT和ALB )具有相关性。通过ROC曲线分析GP73、OPN 对肝癌肝硬化的诊断，发现其灵敏度、特异性与AFP 基本一致。此外，本研究还发现GP73、OPN与AFP 的联合诊断显著提高了肝癌肝硬化诊断的灵敏度、特异性、AUC曲线下面积和95% CI。因此，GP73、OPN 可能是除AFP 外的良好诊断标志物，这一发现与VONGSUVANH等[8]的报道一致。

GP73在胆管上皮细胞和肝细胞中均有表达，其升高水平与肝损伤、肝纤维化程度有关[9]。本研究的结果发现血清GP73 水平在肝硬化组显著升高，与先前的研究一致[10]。有研究表明，GP73在预测肝癌肝硬化方面与AFP 相比表现出更好的敏感性和特异性，还有研究表明GP73 与AFP 联合使用，可以提高肝癌诊断的特异性和敏感性[11-12]。这些结果可能是支持GP73作为肝癌肝硬化诊断的血清生物标志物的重要依据。

自从首次发现肝脏中OPN表达增加以来，OPN在肝纤维化和肝硬化进程中的病理作用逐渐被越来越多的证据证实[13]。实验表明，作为胞外基质蛋白网络的因子之一，OPN不仅对肝纤维化的发生起到促进作用，还与多种癌症有关[14]。在一项亚洲人群的队列研究中得出血清OPN的乙肝肝癌的检出率高达93%[15]。因此，OPN 检测对于肝炎和肝硬化患者筛查肝癌也十分重要。与本研究一致的是，WEI等[16]的研究表明，OPN诊断早期肝癌患者的有效率明显高于AFP，同时检测可进一步提高诊断率。这些结果可能是支持OPN作为肝癌肝硬化诊断的血清生物标志物的重要依据。

除此之外，本研究结果还表明OPN、GP73 与Child-pugh分级密切相关。肝癌患者的血清OPN、GP73水平明显高于肝炎、肝硬化的患者，这不仅与Child-pugh分级相关，还与肝癌肝内转移和复发相关[17]。AFP、OPN、GP73 对肝癌肝硬化的诊断价值相似，联合诊断显示出更高的敏感性和特异性，可以作为Child-pugh分级的参考指标。然而，本研究只是初步探索，应该在更大的研究中得到证实。

综上所述，GP73、OPN 可作为新的肝癌肝硬化辅助诊断的血清学标志物，单独或与AFP联用不仅有助于早期肝癌的检出，还有利于肝癌肝硬化的分级，为临床治疗和分期护理策略提供参考。