枯草芽孢杆菌对产蛋后期蛋鸡产蛋性能、血液生化指标及蛋品质的影响

王源昊， 马友彪， 王 晶， 武书庚， 张海军*， 齐广海， 何东亭， 高 俊

（1.中国农业科学院饲料研究所，农业农村部动物产品质量安全饲料源性因子风险评估实验室，农业农村部饲料生物技术重点开放实验室，北京100081；2.赢创（中国）投资有限公司，北京100600）

现代集约化养殖的畜禽面临着各种应激和环境胁迫问题，时常会出现机体抗氧化系统失衡、亚健康或发生疾病的情形。过去生产中常采用饲料中添加抗生素的方式来预防动物发生疾病和改善生产性能，由于抗生素的滥用对人类健康和环境有很大危害，因此绿色饲料添加剂的研发和应用成为当前动物营养与饲料领域的热点。

益生菌是饲用抗生素的良好替代品之一，其是一种来自动物肠道或环境中的有益微生物，能够提高动物抗应激能力，维持肠道菌群平衡，增强机体免疫，并提高生产性能（Peng等，2016；Bai等，2013），应用价值前景广阔。蛋鸡在产蛋高峰期结束后，随着日龄的增加，蛋鸡产蛋性能、蛋品质和机体免疫能力下降（Liu等，2013），下降的主要原因是长期积累的氧化应激所致（Liu等，2018），出现蛋白高度和哈氏单位下降，蛋清稀释现象，蛋黄颜色和哈氏单位直接与消费者爱好和货架期有关（Vlckov等，2019；Scheideler等，1994）。枯草芽孢杆菌在许多动物生产中广泛应用（Song等，2014），有研究发现，在饲粮中添加0.05%的活菌数为2×109cfu/g的枯草芽孢杆菌制剂可以降低蛋鸡料蛋比，并提高生产性能（潘宝海等，2015）。但其对产蛋后期蛋鸡生产性能、血液生化指标及蛋品质的研究较少。本试验旨在研究饲粮中添加枯草芽孢杆菌对产蛋后期蛋鸡产蛋性能、血液生化指标及蛋品质的影响，为枯草芽孢杆菌在产蛋后期蛋鸡中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验设计 试验采用单因子试验设计，选用396只69周龄海兰褐蛋鸡，随机分为对照组和试验组，每组6个重复，每个重复33只鸡，对照组饲喂基础饲粮，试验组饲喂在基础饲粮中添加500 mg/kg枯草芽孢杆菌制剂的饲粮，试验分为预试期1周和试验期8周，蛋鸡基础饲粮组成及营养水平见表1。试验使用半开放式鸡舍3层立体笼养，自然光照加人工补光，每天光照时间为16 h，光照强度20 lx，室内采用自然和横向负压相结合的方式通风。专人管理，自由采食和饮水，每日人工喂料2次（08：00和14：00），15：00捡蛋。每天打扫鸡舍卫生和清理鸡粪1次，每周带鸡消毒1次，常规免疫。

1.2 试验材料 试验用枯草芽孢杆菌制剂由赢创（中国）投资有限公司提供，其中枯草芽孢杆菌含量≥2×109cfu/g，载体为碳酸钙。

1.3 测定指标与方法

1.3.1 产蛋性能 试验期间，以重复为单位，每天记录产蛋数和蛋重，每周结料，称取并记录剩余料重。计算1～4周、5～8周和1～8周的产蛋率、平均蛋重、料蛋比和平均日采食量。

1.3.2 血浆生化及抗氧化指标 试验第4和第8周末，每个重复随机取1只鸡采血，采血前禁食12 h，自由饮水。翅下静脉采血于含抗凝剂的采血管中，室温静置，2500 r/min离心10 min，将上清液分装于1.5 mL离心管中，-20℃保存备用。用全自动生化分析仪进行血浆中谷丙转氨酶活性及肌酐、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、总蛋白、白蛋白、尿素氮、尿酸、甘油三酯、总胆固醇含量测定。球蛋白含量为计算值，计算公式如下：

球蛋白含量=总蛋白含量-白蛋白含量。

采用试剂盒测量血浆抗氧化指标，包括血浆中谷胱甘肽过氧化物酶活性、丙二醛含量和总抗氧化能力。

1.3.3 蛋品质 试验第4周和第8周末，每个重复随机选取3枚鸡蛋在24 h内测定蛋品质，分别使用分析天平称量蛋壳重，用蛋形指数测定仪测定蛋形指数，用蛋壳强度分析仪测定蛋壳强度，用蛋壳厚度测定仪测定蛋壳厚度，用蛋品质自动分析仪测定蛋白高度、蛋黄颜色和哈氏单位。

1.4 统计分析 原始数据经Excle 2019处理后采用SPSS 24.0统计软件进行统计分析，采用独立样本T检验的方法进行分析，结果以“平均值±标准差”表示，以P<0.05作为差异显著性判断标准。

2 结果与分析

2.1 枯草芽孢杆菌对产蛋后期蛋鸡产蛋性能的影响 由表2可知，饲粮中添加枯草芽孢杆菌对产蛋后期蛋鸡的产蛋率、平均蛋重、料蛋比和平均日采食量无显著影响（P>0.05）。

表2 枯草芽孢杆菌对产蛋后期蛋鸡产蛋性能的影响

2.2 枯草芽孢杆菌对产蛋后期蛋鸡血液生化和抗氧化指标的影响 由表3可知，饲粮中添加枯草芽孢杆菌对产蛋后期蛋鸡血浆中谷丙转氨酶活性、肌酐、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、总蛋白、球蛋白、白蛋白/球蛋白、尿素氮、尿酸、甘油三酯和总胆固醇含量无显著影响（P>0.05），但第4周末，试验组球蛋白含量提高了8.40%，白蛋白/球蛋白降低了13.75%，第8周末试验组白蛋白含量增加了8.52%，有提高白蛋白含量的趋势（P=0.089）。

表3 枯草芽孢杆菌对产蛋后期蛋鸡血液生化指标的影响

由表4可知，饲粮中添加枯草芽孢杆菌对蛋鸡血浆中丙二醛含量和总抗氧化能力无显著影响（P>0.05），第8周末，试验组血浆谷胱甘肽过氧化物酶活性提高了5.80%，有提高趋势（P=0.081）。

表4 枯草芽孢杆菌对产蛋后期蛋鸡血浆抗氧化指标的影响

2.3 枯草芽孢杆菌对产蛋后期蛋鸡蛋品质的影响 由表5可知，枯草芽孢杆菌对蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋壳重均无显著影响（P>0.05），第4周末，试验组蛋黄颜色和哈氏单位分别提高了12.32%和8.35%（P<0.05），蛋白高度增加了15.59%，有提高蛋白高度的趋势（P=0.054）。

表5 枯草芽孢杆菌对产蛋后期蛋鸡蛋品质的影响

3 讨论

枯草芽孢杆菌制剂对蛋鸡产蛋性能的研究报道并不一致，Upadhaya等（2019）研究发现，在饲粮中添加0.05%枯草芽孢杆菌制剂饲喂20周，可以显著提高产蛋率，降低采食量；而Forte等（2015）研究表明，在饲粮中添加0.05%枯草芽孢杆菌PB6饲喂20周，对蛋鸡产蛋性能无显著影响，与本试验研究结果一致。本试验中枯草芽孢杆菌对产蛋性能影响不大，可能与饲喂时间较短有关。另外，不同的枯草芽孢杆菌菌株的作用效果不同，其活菌制剂的有效含量、添加剂量和试验周期都会影响试验结果。枯草芽孢杆菌调控产蛋后期蛋鸡生产性能方面的研究尚不充分。Yang等（2020）研究发现，饲粮中添加枯草芽孢杆菌可以改善老化蛋鸡的生产性能、盲肠细菌组成、鸡蛋质量和小肠形态，Alicja等（2015）研究发现，饲粮中添加枯草芽孢杆菌对蛋鸡产蛋性能无显著影响，但可通过改善肠道环境促进营养物质消化和吸收效率，提高蛋鸡体增重。所以本试验需要进一步探究枯草芽孢杆菌对蛋鸡肠道健康和微生物组成的影响，并延长试验时间。

血液生化指标反映了畜禽体内物质代谢变化和组织机能状态，主要表现在机体营养代谢、应激和健康状况等方面（Kalmendal等，2012）。血浆中谷丙转氨酶活性是反映肝脏功能受损的重要指标，当肝脏正常功能受到损害时，血液中谷丙转氨酶活性升高（Hatab等，2016；Lin等，2004），本试验所用枯草芽孢杆菌对血浆中谷丙转氨酶活性无显著影响，说明其作为蛋鸡饲料添加剂是安全的。血液中总蛋白由白蛋白和球蛋白组成，白蛋白/球蛋白是衡量机体免疫水平的重要指标。Panda等（2008）研究表明，血液中较高的蛋白浓度可能有助于产生抗体，从而导致更高的免疫应答，白蛋白含量的增加，可以提高机体免疫能力，有促进肝脏细胞修复再生和解毒的作用。郭军蕊等（2017）研究发现，饲粮中添加枯草芽孢杆菌可以提高白蛋白含量，增强蛋鸡免疫力。本研究结果与之相似，枯草芽孢杆菌组白蛋白含量高于对照组，表明枯草芽孢杆菌可能提高了机体免疫性能，对肝脏具有一定保护作用。

谷胱甘肽过氧化物是机体普遍存在的抗氧化酶，是细胞对抗氧化最重要的防御机制，可使细胞免受氧化应激（Noctor等，2002）。Zhang等（2017）研究发现，饲粮中添加枯草芽孢杆菌可以通过提高机体谷胱甘肽过氧化物酶活性，增强机体抗氧化能力。本研究中结果与之相似，发现枯草芽孢杆菌有提高血浆谷胱甘肽过氧化物酶活性的趋势，表明饲粮中添加500 mg/kg的枯草芽孢杆菌制剂有提高蛋鸡抗氧化性能的作用，这与Chen等（2019）在蛋鸡上的研究结果一致。本试验枯草芽孢杆菌组的总抗氧化能力与对照组相比提高8.75%，这可能与枯草芽孢杆菌在肠道中能够产生具有清除自由基的多糖和提高抗氧化基因的表达有关（Stadtman等，2006），进而发挥了抗氧化作用。

蛋鸡在产蛋后期，由于体内活化性氧化物产生过多和抗氧化功能减弱，导致体内氧化还原系统失调和生殖系统功能降低，蛋白质合成和转运能力降低，使蛋黄颜色变浅，哈氏单位下降，蛋清稀化（Silversides等，2001），所以通过营养措施改善产蛋后期蛋鸡的蛋品质显得尤为重要。哈氏单位和蛋白高度是衡量蛋清品质、鸡蛋新鲜程度和分级的重要指标。Neijat等（2019）研究发现，枯草芽孢杆菌可以提高哈氏单位和蛋白高度，改善鸡蛋品质，提高鸡蛋蛋清品质。本研究结果与之一致，发现枯草芽孢杆菌显著提高了哈氏单位，有提高蛋白高度的趋势，表明产蛋后期蛋鸡饲粮中添加500 mg/kg的枯草芽孢杆菌制剂可以使蛋清变浓稠，改善鸡蛋内在品质。哈氏单位可反映鸡蛋中蛋白质的品质，本试验中哈氏单位和蛋白高度的提高，可能是因为枯草芽孢杆菌提高了血浆中谷胱甘肽过氧化物酶活性，进而提高白蛋白含量。有研究表明谷胱甘肽过氧化物酶能够抑制炎症反应（Kansane等，2013；Sirajudeen等，2011），改善膨大部组织功能，促进蛋白质合成和运输（Wang等，2018）。蛋黄的颜色主要由饲料中类胡萝卜素含量决定，其经过动物的消化和吸收，经血液运输至输卵管并最终沉积到蛋黄，使蛋黄颜色加深（Ahmadi等，2011）。本研究发现，枯草芽孢杆菌能显著加深蛋黄颜色，表明提高了产蛋后期蛋鸡对类胡萝卜素的吸收能力。此外，枯草芽孢杆菌可能通过提高机体抗氧化能力，抑制了类胡萝卜素氧化分解，促进了蛋鸡体内色素沉淀，加深蛋黄颜色。枯草芽孢杆菌对鸡蛋内在品质的提升机制尚需进一步试验研究。

4 结论

产蛋后期蛋鸡饲粮中添加0.05%枯草芽孢杆菌制剂对产蛋性能无显著影响，有提高血浆抗氧化性能的趋势，能够加深蛋黄颜色，提高蛋清浓稠度，有利于蛋品质的改善。