ESAT-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ在结核性脑膜炎辅助诊断中的意义

周静，肖立新

（1.江西省赣州市第五人民医院结核科，江西赣州 341000；2.兴国县结核病防治所结核科，江西赣州 342400）

结核病具有传染性的特点，主要是因人体免疫功能减弱而感染结核分枝杆菌所致，一旦侵入人体脑膜组织，则会诱发结核性脑膜炎，严重影响人们的身体健康[1]。脑脊液留取具有一定的难度且细胞偏少，不利于临床早期诊断结核性脑膜炎。因此，探寻一种快捷、方便、准确辅助诊断结核性脑膜炎的方式，为临床及时有效治疗结核性脑膜炎患者具有重要意义[2]。结核性脑膜炎与免疫应答相关，机体易在结核分枝杆菌刺激情况下释放ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ等免疫应答因子[3]。基于此，本研究探究结核性脑膜炎患者脑脊液细胞因子检测情况，旨在为临床辅助诊断结核性脑膜炎提供参考依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料选取2018年12月至2020年6月本院接收的114疑似颅神经疾病患者作为研究对象，根据临床诊断结果分为研究组（结核性脑膜炎患者，n=57）和常规组（非结核性脑膜炎患者，n=57）。研究组男30例，女27例；年龄21～69岁，平均（39.6±10.8）岁。常规组男31例，女26例；年龄21～70岁，平均（39.9±11.3）岁。两组患者临床资料比较差异无统计学意义，具有可比性。所有患者均对本研究知情同意，并自愿签署知情同意书。本研究已通过医院伦理委员会审核批准。

1.2 方法将保存于-80℃环境下的脑脊液标本取出，复温，采用ELISA酶联免疫吸附试验检测脑脊液细胞因子水平，包括ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ。取100μL待测样本加入试剂盒的微孔中，在水浴箱中进行孵育，温度为36℃，时间为90 min，弃上清后清洗5次。再选取100μL生物素化抗体工作液（已经提前稀释配置好），在水浴箱中进行孵育，温度为36℃，时间为60 min，清洁板5次；加入100μL酶浓缩工作液，在36℃环境下进行30 min孵育，清洁板5次后再添加TMB显色进行15 min孵育，最后给予终止液，在波长450 nm下，通过酶标仪测定A值（吸光度），以S（样本A值）/N（阴性对照A值），其中＞2.0为阳性，同时，详细记录各项检测指标水平。

1.3 观察指标比较两组脑脊液细胞因子（ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ）水平。

1.4 统计学方法采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析，计量资料以“±s”表示，比较采用t检验，计数资料组间率（%）比较采用χ2检验，相关性分析采用Pearson相关性分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组脑脊液细胞因子水平比较研究组ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ水平均明显高于常规组（P＜0.05），见表1。

表1 两组脑脊液细胞因子水平比较（±s，pg/mL）Table 1 Comparison of cerebrospinal fluid cytokine levels between the two groups(±s,pg/mL)

表1 两组脑脊液细胞因子水平比较（±s，pg/mL）Table 1 Comparison of cerebrospinal fluid cytokine levels between the two groups(±s,pg/mL)

注：ESAT-6，早期分泌靶抗原6；IL-10，白细胞介素-10；TNF-α，肿瘤坏死因子-α；IFN-γ，干扰素-γ

组别研究组常规组t值P值病例57 57 ESAT-6 266.6±34.5 7.7±1.5 22.450＜0.05 IL-10 17.7±8.6 14.6±7.9 16.785＜0.05 TNF-α 90.3±44.6 11.3±5.1 20.638＜0.05 IFN-γ 100.3±49.6 33.2±16.6 23.977＜0.05

2.2 观察组患者脑脊液细胞因子相关性分析相关性分析显示，IFN-γ与ESAT-6呈正相关（r=0.96，P＜0.05）。IL-10与ESAT-6、TNF-α、IFN-γ无明显相关性；TNF-α与ESAT-6、IFN-γ无明显相关性；ESAT-6与TNF-α明显无明显相关性。

2.3 单一指标检测与联合检测诊断效能比较4项指标联合检测敏感度、阴性预测值、阳性预测值均高于单一指标检测（P＜0.05）；单一指标检测与联合检测特异度比较差异无统计学意义，见表2。

表2 单一指标检测与联合检测诊断效能比较（%）Table 2 Comparison of diagnostic efficiency between single index detection and combined detection(%)

3 讨论

结核性脑膜炎发生后，会激活CD4+、巨噬细胞、星形细胞而分泌出大量的细胞因子，如干扰素、白介素等[4]。早期感染结核分枝杆菌后，会刺激人体产生高度特异性的ESAT-6，而ESAT-6仅分布于致病性结核杆菌中，因此，避免了卡介苗、非致病性结核杆菌检测结果的影响。有研究发现，结核分枝杆菌在罗氏培养基上分泌的ESAT-6水平偏低，但结核分枝杆菌被巨噬细胞吞噬后，ESAT-6水平呈升高趋势。说明脑脊液细胞因子ESAT-6过高时，细胞已被结核分枝杆菌入侵且已形成致病性较高的状态[5]。在结核性脑膜炎患者群体中，脑脊液中存在较少的结核分枝杆菌，鉴于ESAT-6指标特殊性，有望成为临床辅助诊断结核性脑膜炎患者最重要、最主要的检测指标。本研究结果表明，研究组ESAT-6为（266.6±34.5）pg/mL，明显高于常规组的（7.7±1.5）pg/mL（P＜0.05）。表明临床辅助诊断结核性脑膜炎过程中ESAT-6具有较高的应用价值。

IL-10因子能在抗结核过程中抑制巨噬细胞的表达，并抑制刺激因子，一定程度上降低细胞免疫功能，进而延缓结核性脑膜炎病理变化。赵玉等[6]研究表明，结核性脑膜炎患者ESAT-6、IL-10水平明显高于健康体检者。本研究结果表明，研究组脑脊液细胞因子IL-10水平显著高于常规组（P＜0.05）。提示IL-10因子在结核性脑膜炎患者机体中呈高表达状态。人体感染结核分枝杆菌后，会对巨噬细胞产生刺激，进而释放TNF-α因子，增强巨噬细胞杀伤结核分枝杆菌的能力[7]。在免疫应答反应过程中，IFN-γ具有双重作用，不仅可促使免疫应答，且还能充分发挥调节免疫作用。IFN-γ在结核性脑膜炎患者呈高表达，提示脑膜巨噬细胞对结核分枝杆菌清除能力增强[8]。本研究结果表明，研究组TNF-α、IFN-γ明显高于常规组（P＜0.05）。表明结核性脑膜炎患者具有较高的TNF-α、IFN-γ水平，临床可考虑将其作为早期诊断结核性脑膜炎患者感染的主要指标。相关性分析表明，仅有IFN-γ与ESAT-6呈正相关（P＜0.05），其他指标无明显相关性，分析原因为，作为T淋巴细胞的ESAT-6靶抗原，可在一定程度上诱导巨噬细胞并刺激生成干扰素γ[9]。此外，本研究中4种检测指标联合检测敏感度、阴性阳性预测值、阳性预测值均高于单一指标检测（P＜0.05）。说明联合检测对于临床早期辅助确诊结核性脑膜炎的应用价值更高。

结核性脑膜炎患者脑脊液细胞因子表达水平较高，ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ联合检测具有敏感度较高，有助于临床辅助诊断，值得临床推广运用。