硅藻土在口蹄疫病毒澄清中的应用

冯泽泰

（新疆农业大学，新疆 乌鲁木齐 830052）

深层过滤工艺在生物制品的工业化生产中得到了广泛的应用。硅藻土是重要的深层过滤成分。利用硅藻土疏松、多孔的特性，既能有效拦截大颗粒，还可以有效吸附小颗粒杂质。从而提高过滤效果，有效降低下游的纯化、灭活压力。

由最佳一致逼近理论可知，该函数具有三个偏差点，即区间的两端点xri-1与xri及区间内某一点.令xzri为区间[xri-1,xri]内幅度相对误差绝对值最大的一点，易知此点误差函数的一阶导数为0.其中，εri为每个区间上幅度相对误差最大值.基于最佳一致逼近理论并结合平方根函数的性质，得出4个方程：

1 材料

500L生物反应器（江苏绿杨），1000L生物反应器（江苏绿杨），2000L病毒收集罐（江苏绿杨），层叠式深层过滤器（美国PALL），四柱塞隔膜泵（德国Quattroflow）层叠式深层过滤单元（瑞士菲托），硅藻土（赛力特C1000），1000L循环罐（江苏绿杨），UV1900紫外分光光度计（上海佑科），口蹄病种毒（新疆天康生物制药悬浮二车间提供），BHK细胞（新疆天康生物制药悬浮二车间提供）。

2 病毒培养

将BHK生产用种细胞在500L细胞反应器内进行培养后，放大到1000L反应器内继续培养。待细胞密度达到400万～500万个/mL后，罐体降温至4℃，停止搅拌、停止供氧。待细胞沉至罐底后，将上层细胞培养液排出，加入病毒维持液。恢复搅拌和供养。将生产用的种毒加入反应器内。培养18～24h后，停止供氧，反应器内的搅拌开至最大。

3 病毒澄清

将深层过滤单元按照要求装入层叠式过滤器内，用流通蒸汽灭菌。将硅藻土置于pH7.6的高盐缓冲液中，蒸汽灭菌备用。待病毒收获后，气动柱塞隔膜泵，调整泵速和压力，使硅藻土均匀涂于深层过滤单元表面。将收获毒液转入深层过滤器内，反复循环，直至病毒收获液变的完全清澈。柱塞隔膜泵降低速度，用pH7.6的稀释液冲洗深层过滤单元，尽量减少毒液的浪费。取样检测澄清度和146S后，向毒液内加入灭活剂，按照灭活规程进行灭活。灭活结束，取样检测146S、总氮、灭活效果。

4 结论与讨论

连续对OHM/02株5批毒液20150328、20150401、20150403、20150407、20150410重复采用相同的硅藻土过滤工艺，检测结果（见表1）。

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表1 采用硅藻土澄清O型口蹄疫病毒的检测结果

连续对AKT-III株五批毒液20150428、20150501、2015 0503、20150507、20150510重复采用相同的硅藻土过滤工艺，检测结果（见表2）。

表2 采用硅藻土澄清AKT-III株口蹄疫病毒的检测结果

根据表1和表2的检测结果显示，采用了硅藻土的澄清工艺，口蹄疫病毒的灭活效果未受影响，病毒收率未发生明显改变。必要时，可以选择硅藻土深层过滤工艺澄清口蹄疫病毒。