原发性肝癌组织中FAM96A表达及意义

李国涛 朱豫萌 张 盼 张国强

原发性肝癌的发病率较高，在具有肝硬化或者病毒感染的患者中，原发性肝癌的发病率可持续上升[1]。临床上原发性肝癌的发生，能够导致患者整体病死率的提高，增加了原发性肝癌患者远期病情恶化的风险[2]。96序列相似的家庭成员A(FAM96A)是肿瘤相关调控基因，其能够通过抑制肿瘤细胞癌基因的激活，降低癌细胞内下游效应因子的释放速度，最终影响到肿瘤细胞的增殖过程[3]。部分研究者探讨了FAM96A在消化系统恶性肿瘤患者中的表达情况，认为在消化系统恶性肿瘤中，FAM96A的表达浓度明显下降[4-5]，但缺乏对于FAM96A的表达与肝癌患者临床预后的关系研究。为了揭示FAM96A的表达与肝癌患者临床预后的病情关系，从而为临床上原发性肝癌的诊疗提供参考，本次研究选取2017年2月至2019年3月我院保存的原发性肝癌组织标本87例，探讨了FAM96A的表达情况，报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2017年2月至2019年3月我院保存的原发性肝癌组织标本87例，同时选取癌旁组织(距癌边缘>2 cm)作为对照，纳入标准：①均经病理学确诊；②临床资料保存完整；③术前未行放化疗等治疗；④患者及家属知情同意。排除标准：①合并有其他系统恶性肿瘤；②有内分泌疾病、免疫系统疾病、HIV感染。

1.2 实验方法

搜集的标本组织采用液氮保存，采用蛋白提取试剂盒进行蛋白提取，BCA法调整蛋白浓度，提取的蛋白与SDS缓冲液混合10 min，SDS-PAGE电泳分离检测蛋白，醋酸纤维膜进行蛋白的转移，清洗膜后采用5%的血清蛋白进行封闭，TBST清洗3次，每次5 min，加入一抗(鼠抗人 浓度：1∶1000)5 ml，4 ℃冰箱过夜，TBST清洗3次，每次5 min，加入二抗(羊抗鼠 浓度：1∶2000)3 ml，TBST清洗3次，每次5 min，加入DAB显影液(北京索莱宝科技有限公司)，以GADPH蛋白为内参，采用GSG2000核酸/蛋白凝胶图像分析管理软件扫描分析蛋白条带。

1.3 随访方法

采用电话随访的方式进行出院后随访，其中随访时间节点为2020年5月，共有3例患者失访，24例死亡，60例存活。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 原发性肝癌和癌旁组织FAM96A蛋白表达比较

原发性肝癌组织FAM96A蛋白相对表达量明显低于癌旁组织，差异比较有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 原发性肝癌和癌旁组织FAM96A蛋白表达比较

2.2 FAM96A蛋白表达与肝癌临床病理特征的关系

肿瘤直径≥5 cm、有门静脉癌栓、Ⅲ～Ⅳ期患者FAM96A蛋白相对表达量明显低于肿瘤直径<5 cm、无门静脉癌栓，Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，见表2。

表2 FAM96A蛋白表达与临床病理关系

2.3 FAM96A蛋白表达与患者预后的关系

截止2020年5月，共有患者24例死亡，60例存活；死亡患者FAM96A蛋白相对表达量(0.610±0.100)明显低于存活患者(0.709±0.097)(P<0.05)。

3 讨论

在长期肝脏上皮细胞损伤的过程中，部分癌细胞的早期形成，能够诱导癌信号通路的激活，最终增加早期原位癌或者浸润癌的发生风险[6]。在高龄、长期吸烟或者过度饮酒的人群中，原发性肝癌的基础发病率或者远期病死率均可显著上升[7]。临床上的观察发现，原发性肝癌患者的无瘤生存时间不超过40个月，其远期无进展生存期也明显的缩短[8-9]。而通过对于原发性肝癌临床预后的评估，能够在肝癌患者的早期治疗方案的制定或者出院后随访方面发挥作用。甲胎蛋白能够在原发性肝癌的诊疗及预后评估中发挥作用，但单纯依靠甲胎蛋白评估肝癌患者临床预后的灵敏度及可靠性仍然存在一定的局限。影像学检查能够在原发性肝癌的诊疗中发挥作用，但CT或者肝脏超声检查对于肝癌患者临床转归评估的符合率较低。本次研究通过对于肝癌患者体内肿瘤调控因子或者肿瘤相关蛋白的分析，旨在为临床上原发性肝癌的预后评估提供新的参考依据。

FAM96A主要存在于细胞质及细胞核周边，其蛋白结构上包含有多个丝氨酸及巯基结构。FAM96A是转录调控相关序列因子，其能够通过结合转录上游启动子，降低癌基因的激活程度，最终抑制肿瘤细胞的过度增殖。FAM96A作为肿瘤癌细胞周期的调控因子，其能够通过干预癌细胞周期G1/S期的比例，降低癌细胞自我增殖的活性，从而降低肿瘤细胞复发的风险[10]。相关临床方面的研究已经证实，FAM96A能够在肝癌的早期发生过程中发挥作用[11]，但缺乏对于FAM96A的表达与肝癌临床病理特征及临床预后的分析。

本次研究发现，在原发性肝癌患者病灶组织中，FAM96A蛋白的表达浓度水平明显低于癌旁组织，统计学差异明显，表明FAM96A蛋白的表达缺失能够显著影响到肝癌的病情进展。之所以存在FAM96A蛋白的低表达，主要由于肝癌细胞内癌细胞肿瘤微环境的改变，降低了正常上皮细胞对于FAM96A的分泌，抑制了FAM96A对于早期肿瘤发生的保护作用。有其他研究者也认为，在肝癌患者病灶组织中，FAM96A蛋白的表达浓度可随着患者肿瘤转移的发生而下降，而具有腹腔淋巴结转移或者肺部转移的患者中，FAM96A蛋白的表达浓度可持续下降，并能够显著影响到肝癌患的临床结局[12]。在探讨FAM96A蛋白的表达与肝癌患者临床病理特征的关系过程中，可以发现在临床分期较晚或者合并门静脉转移、肿瘤较大的患者中，FAM96A蛋白的表达浓度较低，提示FAM96A的表达缺失能够显著影响到肝癌患者临床病理特征的进展。FAM96A的表达下降，失去了其对于肝癌上皮细胞生物学特征的稳定作用，导致癌细胞浸润能力的上升，促进了肿瘤细胞浸润深度和范围的增加，从而提高了临床分期；而FAM96A对于肿瘤门静脉血栓或者肿瘤大小的影响，主要在于其能够影响到肿瘤细胞粘附能力，促进了其对于邻近正常组织及门静脉内皮组织的粘附。在不同临床预后的患者中，可以发现在死亡组患者中，FAM96A蛋白的表达阳性率明显低于存活组，统计学差异显著，表明FAM96A的低表达能够影响到肝癌患者的临床预后。这主要由于FAM96A的表达下降，影响到了肝癌细胞远期复发的风险，从而影响到了临床结局[13-15]。临床上可以通过检测FAM96A蛋白水平，进而协助评估肝癌的临床预后。

原发性肝癌组织FAM96A表达下调，与肿瘤直径、门静脉癌栓和TNM分期有一定关系，同时可能与患者预后有关，值得进一步研究。