慢性与急性AFB1中毒小鼠血清生化及免疫指标比较

2021-10-12李蕊蕊陈媛媛

吉林畜牧兽医 2021年8期

高颖，李蕊蕊，陈媛媛

黑龙江八一农垦大学，黑龙江大庆 163319

黄曲霉毒素（AF）是主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的一种次级代谢产物，广泛存在于自然界中。AFB1的代谢与湿度、温度、氧化应激、生长基质、储存材料和阳光等密切相关。黄曲霉毒素毒性相当于氰化钾的10倍，砒霜的68倍，于1993年被划为一类致癌物，黄曲霉毒素可以引起免疫抑制、致癌、致畸、致突变性。猪摄食AFB1污染饲料会出现采食量减少、体重降低、肝和免疫功能受损，以及血清生化指标的改变，免疫系统由于AFT中毒而遭受严重破坏，细胞免疫应答延迟，促炎细胞因IL-6、IFN-γ和IL-10高表达。本试验以6周龄健康昆明小鼠为试验对象，观察比较慢性与急性AFB1中毒对小鼠的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂

AFB1标准品购自FERMENTEK公司，AFB1粉末用DMSO溶解为1 mg/mL的储备液备用。

1.2 试验动物及分组

6周龄健康雄性昆明小鼠40只，随机分为空白对照组、DMSO溶剂对照组、AFB1慢性中毒组、AFB1急性中毒组。慢性AFB1组和急性AFB1组小鼠分别经口灌服AFB1溶液（300 µg/kg，2 mg/kg），空白对照组和溶剂对照组分别经口灌服相同体积的生理盐水和DMSO溶液（300 µL/kg）。试验动物饲喂标准饲粮，自由采食饮水。急性AFB1组实验期1周，其它组小鼠试验期为8周。实验结束，小鼠禁食12 h以上。第2天经眼眶采血收集血液，颈部脱臼处死小鼠,血样用4 ℃离心机4 000 r/min 离心10 min收取上清液，血清用ELISA检测。解剖小鼠迅速取其肝脏,生理盐水冲洗并用滤纸吸干后，电子天平称量净重。

脏器指数=（脏器净重/宰前体重）×100%

1.3 炎性因子指标检测

用酶标仪测量血清中IL-1β，IL-2，IL-6，IL-8，IL-10，TNF-α，INF-γ的值。以上炎性因子指标均使用ELISA（朗顿，上海）试剂盒测定。用酶标仪在450 nm波长下读取各吸光度值，并根据所绘制的标准曲线来计算出相应的浓度值。

1.4 统计分析

试验所得数据结果以“平均值±标准差”形式表示。使用SPSS 22.0软件处理分析数据，以单因素方差分析各组显著性，p<0.05具有统计学意义。

2 结果

2.1 肝指数

肝指数指标比较见表1。

表1 各组小鼠肝指数变化比较

2.2 血清炎性因子指标

血清炎性因子指标比较见表2。

3 讨论

本试验毒素组小鼠肝脏指数高于对照组，说明慢性AFB1中毒会对动物肝脏造成损伤。此外剖检小鼠可见肝脏肿大，颜色变淡，表面有出血点。AFB1进入机体后在肝脏中代谢，有报道指出AFB1中毒大鼠肝脏会过量表达炎性因子，过量表达的炎性细胞因子又会进一步加重肝脏损伤。免疫反应是一个复杂的过程，免疫系统受许多炎性细胞因子的调控。AFB1急、慢性中毒均会引起肝脏炎症反应的发生，而慢性AFB1中毒导致的肝脏炎性损伤较急性AFB1中毒更加严重。