不同剂量ABO血型血液相容性体外血型血清学变化研究

王巍东，王晶晶，申家辉， 李志强

(1.新乡医学院第三附属医院 输血科，河南 新乡 453003；2.新乡医学院第一附属医院 肿瘤科，河南 卫辉 453100；3.上海市第六人民医院 输血科，上海 200233)

ABO同型血液制剂供应缺乏，无法确定患者血型的情况下，患者因大出血致失血性休克病情危重急，且不立即输血会危及患者生命时，应本着抢救生命为第一原则，可以实施相容性血液制剂输注[1-3]。然而，不同剂量ABO血型相容性输注后再次进行红细胞ABO血型鉴定及血液交叉匹配试验等血型血清学试验的研究国内外报道甚少。因此，为了进一步了解不同剂量ABO血型相容性输注后再次进行红细胞ABO血型鉴定及血液交叉匹配试验的安全性，本研究进行了不同剂量ABO血型相容性输注后体外实验研究。

1 材料与方法

1.1 血标本采集患者血标本由上海市第六人民医院提供抗凝全血A、B、AB型血各100份。献血者血标本由上海市血液中心提供A、B、O、AB型悬浮红细胞及全血各6单位。

1.2 试剂和仪器抗-A、抗-B血型定型试剂(上海血液生物医药有限责任公司，批号20180611)，ABO血型反定型细胞(上海血液生物医药有限责任公司，批号20181126)，聚凝胺介质试剂(珠海贝索生物技术有限公司，批号113101)，ABO血型/正反定型和RhD血型检测卡(BIO-RAD Card，批号50093.49.05)。日本久保田公司的KUBOTA KA-2200红细胞洗涤离心机，37 ℃空气孵育箱和专用离心机。

1.3 分组按50 kg的个体，血容量8%的标准计算，共4 000 mL，血标本等比例缩减为4 mL(1 000∶1)。体外模拟患者血容量4 000 mL，失血量为1 000 mL，残留血容量3 000 mL。补充1 000 mL O型悬浮红细胞，设定为3∶1红细胞组；补充1 000 mL O型全血，设定为3∶1全血组。体外模拟患者血容量4 000 mL，失血量为2 000 mL，残留血容量2 000 mL，补充2 000 mL O型悬浮红细胞设定为1∶1红细胞组；补充2 000 mL O型全血设定为1∶1全血组。体外模拟患者血容量4 000 mL，失血量为3 000 mL，残留血容量1 000 mL，补充3 000 mL O型悬浮红细胞设定为1∶3红细胞组；补充3 000 mL O型全血设定为1∶3全血组。

1.4 方法分别将混合血液置于37 ℃孵箱1 h，每15 min混匀1次。应用试管法及卡式法进行红细胞ABO血型正反定型，与输注血液进行聚凝胺法血液交叉匹配试验，按标准操作规程与判读结果进行实验[3]。

1.5 评判标准按照凝集强度进行评分：阴性为0分，±为1分，1+为2分，2+为3分，3+为4分，4+为5分。

2 结果

2.1 A、B、AB型患者输注O型红细胞后卡式法正定型抗A或抗B混合凝集A、B、AB型患者输注O型悬浮红细胞及全血后微柱凝胶卡式法正定型会出现混合型凝集现象，随O型悬浮红细胞及全血输注比例增加其微柱凝胶卡式法正定型混合凝集强度逐渐减弱(P<0.05)。见表1。

表1 A、B、AB型患者输注O型红细胞后卡式法正定型抗A或抗B混合凝集情况

2.2 模拟输注O型全血后进行ABO血型卡式法反定型鉴定试验A、B、AB型血液与O型全血混合后，再次进行ABO血型微柱凝胶法反定型会出现与血型不一致的凝集现象；且随O型全血混合比例增加，其微柱凝胶法反定型凝集强度逐渐增强，二者呈正相关(P<0.05)。见表2。

表2 A、B、AB型患者输注O型全血后卡式法反定型A细胞或B细胞凝集情况

2.3 模拟输注O型全血后与ABO同型全血交叉匹配试验A型血液与O型全血混合后，再与A型全血、B型血液与O型全血混合后再与B型全血进行交叉匹配试验时，主次侧均出现凝集现象，且随混合比例增加，凝集强度逐渐增强，呈正相关(P<0.05)。见表3。

表3 全血组A、B、AB型患者输注O型全血后再输注同型全血聚凝胺法交叉匹配试验结果

3 讨论

文献报道，影响O型红细胞输注安全性主要涉及红细胞中残留血浆量和ABO抗体效价两个方面，二者是决定O型红细胞相容性输注是否会引起溶血性输血反应的主要因素[5]。1例O型红细胞输注给A型患者而导致的急性溶血性输血反应，其原因是红细胞中残留血浆较多(55 mL)，且其血清抗-A抗体效价高达1 024[6]。我国国家标准《全血及成分血质量要求》和《全血及成分血质量检测指南》中没有明确规定悬浮红细胞中血浆残留量，但要求血细胞比容应为0.50～0.65[7-8]，推测其血浆残留量应控制在10～15 mL。Lefebre等[9]发现，红细胞中残留血浆输入患者体内后，可导致患者血液出现短暂的直接抗人球蛋白试验阳性，以及轻微溶血。

本文研究结果显示，A、B、AB型患者输注O型悬浮红细胞及全血后微柱凝胶卡式法正定型会出现混合型凝集现象，随O型悬浮红细胞及全血输注比例增加其微柱凝胶卡式法正定型混合凝集强度逐渐减弱。表明O型悬浮红细胞及全血输注量越大，对患者ABO血型正定型影响也越大。在使用微柱凝胶卡式法进行血型鉴定时，倘若正定型出现混合凝集现象应可询问患者或/和家属排除患者输注过O型红细胞及全血情况后，再考虑患者抗原减弱。通常情况下，可将患者血液通过毛细管离心法将自身红细胞和输入红细胞分离后，再进行红细胞定型。本文研究结果显示，A、B、AB型患者输注O型全血后微柱凝胶卡式法反定型会出现与患者血型不一致的凝集现象，随O型全血输注比例增加其微柱凝胶卡式法反定型凝集强度逐渐增强，说明不同比例输注全血有显著性差异，即输注量越大，凝集强度越强，对患者血型反定型影响越大。另外，A型患者再输注A型全血、B型患者再输注B型全血后进行血液交叉匹配试验主次侧均可出现凝集现象，且随输注比例增加凝集强度逐渐增强。AB型患者再输注AB型全血时进行血液交叉匹配试验，主侧出现凝集现象，且随输注比例增加凝集强度逐渐增强，次侧在3∶1组未出现凝集现象，随输注比例增加到1∶1甚至1∶3时凝集强度逐渐增强，但差异无统计学意义，究其原因，AB型血浆内不含抗A抗B无法与A、B抗原结合，所以在输入量<1 000 mL时未出现凝集，但是当输入量>1 000 mL时次侧聚凝胺法交叉配血出现部分AB型供血者血浆与患者红细胞凝集，这可能为患者输注大量O型血浆引起直接抗人球蛋白试验阳性所致[9]。

A、B、AB型患者输注O型悬浮红细胞后鉴定患者血型正定型难度增加，但临床主要通过观察血液交叉匹配实验结果判定供患血液是否匹配，本实验数据未对其产生影响，所以理论上输注O型悬浮红细胞是安全的。然而作者在2019版血站技术操作规范[10]中并未找到有关红细胞残余血浆量的规定，所以在临床紧急输血时，应输注O型洗涤红细胞以减少血浆的输入[11]。患者输注O型全血对患者ABO血型正反定型及血液交叉匹配均产生影响，所以不推荐对非O型患者输注O型全血。值得关注的是，当O型全血输入量<1 000 mL时，部分患者的血液交叉匹配实验为阴性，部分为弱阳性(可能为抗球蛋白阳性影响实验所致)，因本实验条件所限，不能实际观察患者真正输入全血后体内所产生的一系列变化，所以是否可以对所有非O型患者输注≤1 000 mL的O型全血有待进一步研究。