复方新会陈皮含片中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量测定

梁志云 昌水平 张 明 蒋三元

广东省江门市新会区中医院，广东 江门 529100

广陈皮是茶枝柑Citrusreticulata“Chachi”的干燥成熟果皮，以新会陈皮为道地药材，与其他产地的陈皮所含的成分存在差异，按陈皮的检测方法其质量无法达到法定要求，2020年版《中国药典》对广陈皮进行了修订，要求作橙皮苷、川陈皮素、橘皮素三种成分的含量测定[1]。现代药理研究[2]表明，新会陈皮的黄酮类成分有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗过敏等作用，其中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素是促进胃肠动力的活性物质，橙皮苷的抗氧化活性最强，川陈皮素能舒张支气管起到平喘的治疗效果，橘皮素具有很好的祛痰、理气作用。复方新会陈皮含片是以道地药材新会陈皮为主药的制剂，具有顺气化痰，祛风健胃的功效，用于风寒咳嗽、痰多呕逆。该含片制剂研制过程中，虽然做了橙皮苷的含量测定研究[3]，但并不能真正达到制剂质量控制的要求。因此，本文重新探讨了复方新会陈皮含片中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素三种成分的含量测定，更好地控制其含片的内在质量，对保证制剂在临床用药中的良好疗效有着重要意义。

1 仪器与试药

LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津)；XY4-180E超声波清洗机(上海析宇仪器有限公司)；AUW120D十万分之一电子分析天平(日本岛津)。橙皮苷对照品(批号：190802)，川陈皮素(批号：200322)，橘皮素(批号：190918)，均购于成都植标化纯生物技术有限公司。复方新会陈皮含片(批号：20190906，20191010，20191115，由江门市新会区中医院制备，规格：每片重0.8 g)；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-SP柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；检测波长：283 nm(0～15 min)、330 nm(15～40 min)；流速：1 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量：10 μL；梯度洗脱条件见表1。

表1 梯度洗脱条件

2.2 混合对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品5.78 mg、川陈皮素对照品7.84 mg、橘皮素对照品3.36 mg，分别置20 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。按8∶1∶1比例，依次精密吸取上述三种对照品溶液置同一个10 mL量瓶中，摇匀，制成混合对照品溶液，其浓度分别为橙皮苷289 μg·mL-1、川陈皮素39.2 μg·mL-1、橘皮素16.8 μg·mL-1。

2.3 供试品溶液的制备 取复方新会陈皮含片研磨成粉末，精密称取粉末约0.5 g，置10 mL量瓶中，加甲醇溶液至刻度，超声处理45 min，放冷，用甲醇补足减失的量，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 取缺少陈皮药材的阴性对照样品，同供试品“2.3供试品溶液的制备”项下操作，制备阴性对照溶液。

2.5 系统适应性试验考察 在上述色谱条件下，精密吸取2.2项下混合对照品溶液、2.3项下供试品溶液和2.4项下阴性对照溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，测定。结果表明，供试品的保留时间和峰型与混合对照品一致，且阴性对照无干扰。见图1。

1.橙皮苷；2.川陈皮素；3.橘皮素

2.6 线性关系 精密吸取混合对照品溶液1、5、10、15、20 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，计算其回归方程分别为：橙皮苷y=427363x-38147(r=0.9999)，川陈皮素y=155126x-13930(r=0.9999)，橘皮素y=86681x-19198(r=0.9997)。橙皮苷、川陈皮素、橘皮素分别在0.289～5.78 μg、0.0392～0.784 μg、0.0168～0.336 μg的线性范围内，与峰面积值呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验 精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液10 μL，在上述色谱条件下，连续进样6次，测定峰面积值并计算相对标准偏差。橙皮苷的RSD为0.68%，川陈皮素的RSD为1.27%，橘皮素的RSD为0.94%，表明精密度良好。

2.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 10 μL，在0、2、4、6、8、10、12、24 h进样，测定并记录峰面积值。试验结果表明供试品溶液在24 h内稳定，供试品中橙皮苷的RSD为1.06 %，川陈皮素的RSD为1.62%，橘皮素的RSD为0.81%。

2.9 重复性试验 精密称取复方新会陈皮含片0.5 g(批号：20191010)，共6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定并记录峰面积，计算三种成分的含量。橙皮苷的平均含量为9.4624 mg·g-1，RSD为0.73%；川陈皮素的平均含量为0.9249 mg·g-1，RSD为0.34%；橘皮素的平均含量为0.6088mg·g-1，RSD为0.21%。说明本方法重复性良好。

2.10 加样回收试验 取已知三种成分含量的复方新会陈皮含片(批号：20191010)，精密称取样品约0.25 g，共5份，分别置于10 mL量瓶中，加入一定量的对照品溶液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。注入高效液相色谱仪，进样测定并记录峰面积，计算橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量。结果见表2。

表2 复方新会陈皮含片的加样回收试验结果 (n=5)

2.11 样品含量测定 取三批复方新会陈皮含片样品，按“2.3”项下制备方法制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪，外标法计算样品中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量。结果见表3。

表3 复方新会陈皮含片的含量测定结果 (n=3)

3 讨论

广陈皮(新会陈皮)是广东十大道地中药材之一。对新会陈皮的橙皮苷、川陈皮素、橘皮素成分含量测定研究已有报道[4-7]，2020年版《中国药典》一部，陈皮项下对广陈皮橙皮苷、川陈皮素、橘皮素含量列为质量检测指标。复方新会陈皮含片中主药就是新会陈皮，以药粉直接入药，参照药典实验，结果按药典流动相梯度洗脱中，可能是复方制剂中成分较复杂的关系，川陈皮素峰与橘皮素峰之间分离度较差，杂峰影响较大，不能完全分离出指标成分峰，经多次调整流动相比例与分析时间，按表1梯度洗脱结果样品中三种成分峰基线分离度大于1.5，峰形良好，且保留时间适宜。

药典要求广陈皮中含橙皮苷不得少于2.0%，含川陈皮素和橘皮素的总量不得少于0.42%。复方新会陈皮含片实验用量的广陈皮折算，含橙皮苷约3.8%，含川陈皮素和橘皮素的总量约为0.53%，结果表明新会陈皮原材料质量良好。

本文建立的高效液相色谱法测定复方新会陈皮含片中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的含量方法，简便、准确，稳定性好，能较好的控制该制剂的内在质量，是有效的质量标准资料。