CK2β、P16、HPV L-1 壳蛋白联合检测诊断宫颈癌的价值

杨淑萍，姜凌

（1.洛阳市妇女儿童医疗保健中心妇产科，河南 洛阳 471000；2.河南科技大学第一附属医院妇产科，河南 洛阳 471000）

部分地区的流行病学研究发现，宫颈癌的发病率可超过485/10 万人左右[1]。在合并有相关高危因素的人群中，宫颈癌的发病率可进一步的上升。临床上的观察分析研究发现，宫颈癌患者的5年生存率不足55%，其远期病死率也明显的上升[2]。对于宫颈癌的早期诊断具有重要的意义，其能够在疾病的诊疗及早期手术干预方面发挥作用。生物学指标的研究，可以为宫颈癌的诊断提供参考。蛋白激酶CK2β的表达，能够通过提高其蛋白激酶的激活程度,增加宫颈上皮细胞的异常增殖能力[3]；P16蛋白的表达上升，能够提高癌细胞内肿瘤信号通路的激活，促进下游多种病理性效应因子的上调，进而提高宫颈上皮细胞的异常裂变的风险[4]；人乳头瘤病毒壳蛋白（HPVL-1）的表达，能够通过诱导免疫反应，提高T 淋巴细胞的激活，增强其对于肿瘤细胞的免疫杀伤性作用，从而降低癌细胞的早期发生风险[5]。为了揭示CK2β、P16、HPV L-1的表达与宫颈癌的关系，从而为临床上宫颈癌的诊疗提供理论方面的参考，本次研究选取2015年1 月至2017年12 月我院确诊的80例宫颈癌患者作为研究对象，探讨了CK2β、P16、HPV L-1的表达及其诊断学价值，报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2015年1 月至2017年12 月我院确诊的80例宫颈癌患者作为研究对象（病例组）、选取80例宫颈瘤变患者作为对照组。

病例组，年龄38～65 岁，平均47.0±8.3 岁，病理学TNM 分期：Ⅰ期49例、Ⅱ期26例、Ⅲ期5例,分化程度：高分化17例、中分化44例、低分化19例；病灶直径≥4cm 38例、<4cm 42例。对照组，年龄33～58 岁，平均45.7±9.0 岁，CINⅠ期25例、CINⅡ期24例、CINⅢ期31例。两组患者的年龄比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。

纳入标准:⑴宫颈癌的诊断标准参考中华医学会制定的标准[6]；⑵经病理学检查确诊；⑶获取标本前患者未接受放化疗、免疫学治疗；⑷患者各项资料保存完整；⑸本研究经医学伦理委员会批准。

排除标准：⑴伴有其他部位恶性肿瘤；⑵转移性宫颈癌患者；⑶既往具有宫颈手术史；⑷资料缺失，无法进行统计分析

1.2 免疫组化检测方法 石蜡包埋，连续性切片厚度3um，60℃烤片60min，常规脱水后，采用EDTA进行抗原修复，加入10μl 蒸馏水，加入10%过氧化氢5il，室温下孵育30min,磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤3 次*3min,加入CK2β、P16、HPV L-1蛋白的单克隆抗体（1：1000 购自罗氏检测公司），37℃孵育60min，PBS洗涤3 次*3min，加 入HRP 标记的CK2β、P16、HPV L-1蛋白二抗（1：2000 购自罗氏公司），37℃孵育20min，PBS 洗涤3 次*3min，加入DAB 后，PBS 冲洗和复染，脱水后在显微镜下进行观察。

1.3 结果分析 免疫组化结果判定：CK2β 主要定位于细胞质、P16 主要定位于细胞浆及细胞核、HPV L-1蛋白的阳性着色表达于细胞核，呈黄色、棕黄色、褐色表达，⑴根据着色强度：0 分为无色、1分为淡黄色、2 分为棕黄色、3 分为褐色、黑色；⑵根据阳性细胞比例：阳性细胞数目所占比例≤10%为1 分、阳性细胞所占比例11%～50%为2 分、阳性细胞数51%～75%为3 分、阳性细胞数所占比例>75%为4 分，两种积分相乘总分<3 分为阴性、≧3分为阳性。总分<3 分：“-”表达；为3～5 分，“+”表达；为6～9 分，“++”表达；>9 分，“+++”表达。

1.4 统计学方法 本研究的数据收集后，采用SPSS16.0 进行整理、分析；采用对计量数据进行统计描述，两组间均数比较应用t 检验；计数资料比较应用χ2检验；P 值<0.05 有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的宫颈组织标本中的CK2β、P16、HPV L-1蛋白阳性率比较 病例组宫颈组织中的CK2β蛋白阳性表达率67.50%、P16 阳性表达率85.00%显著的高于对照组宫颈组织中的16.25%、42.50%，差异具有统计学意义（P<0.05）；病例组宫颈组织中的HPV L-1蛋白阳性表达率15.00%低于对照组宫颈组织中的36.25%，差异具有统计学意义（P<0.05）；见表1。

表1 宫颈组织标本中的CK2β、P16、HPV L-1蛋白阳性率比[n（%）]

2.2 宫颈组织标本中的CK2β、P16、HPV L-1蛋白阳性表达鉴别诊断宫颈癌的价值 以病理学结果作为金标准，CK2β、P16、HPV L-1 鉴别诊断宫颈癌的灵敏度为、特异度为、漏诊率为、误诊率为结果见表4；CK2β、P16、HPV L-1联合检测鉴别诊断宫颈癌的灵敏度为96.25%、特异度为63.75%、漏诊率为3.75%、误诊率为36.25%；见表2、表3、表4。

表2 CK2β、P16、HPV L-1蛋白阳性表达鉴别诊断宫颈癌与病理学结果比较

表3 CK2β、P16、HPV L-1蛋白联合检测鉴别诊断宫颈癌与病理学结果比较

表4 CK2β、P16、HPV L-1蛋白单独及联合检测鉴别诊断宫颈癌的价值

3 讨论

宫颈高危型HPV 病毒感染、多次人工流产或者过早性生活，均能够促进宫颈癌的发生，在合并有HPV16、HPV18 亚型病毒感染的患者中，宫颈癌的发病率可进一步的上升[7]。长期的临床观察发现,宫颈癌患者远期致残率可超过35%以上,同时宫颈癌患者的无瘤生存时间不足36 个月[8,9]。现阶段缺乏对于宫颈癌诊断的生物学标志物指标,虽然阴道镜下活检或者宫颈诊断性锥形切除术,能够在宫颈癌的诊断过程中发挥作用。但相关检查均属于有创检查，耗时较长，检查费用相对较高，患者的接受程度差异较大。而本次研究通过对于宫颈癌患者病灶组织中CK2β、P16、HPV L-1的表达分析研究，一方面能够深入揭示宫颈癌的病情进展机理，另一方面能够为临床上宫颈癌的诊疗提供新的参考性指标。

CK2β 是蛋白激酶相关因子，其能够通过提高细胞周期依赖性蛋白激酶的释放速度,增加癌细胞早期发生过程中的转录调控异常风险。基础方面的研究显示，CK2β 能够通过结合癌细胞膜表面糖蛋白，提高癌细胞的浸润和粘附能力，增加癌细胞突破基底膜组织的风险；P16 作为肿瘤相关蛋白，其对于癌细胞转录上游启动子的激活，能够促进癌细胞核DNA 增殖速度的提示[10]。同时P16蛋白上调能够诱导下NF-KB的激活，增加多种肿瘤信号同的激活风险[11]；HPV L-1 是HPV 病毒壳表面蛋白，其能够特异性诱导T 淋巴细胞的激活，增加抗原提呈细胞的激活程度，从而诱导机体免疫反应[12]。部分研究者探讨了P16蛋白在宫颈癌患者中的表达情况，认为在宫颈癌患者中，P16蛋白的表达阳性率明显上升[13]，但缺乏对于CK2β、HPV L-1的表达分析研究。

本次研究通过免疫组化探讨了CK2β、P16、HPV L-1在宫颈癌病灶组织中的表达，发现在病例组患者中，CK2β、P16的表达阳性率明显的上升，高于对照组宫颈病变患者，HPV L-1的表达阳性率明显下降，低于对照组宫颈病变患者，统计学差异较为显著，提示了CK2β、P16、HPV L-1的异常表达均能够影响到宫颈癌的发生过程。分析其具体的原因，考虑由于CK2β、P16、HPV L-1的下列几个方面的改变有关[14]：⑴CK2β的表达上升，能够提高宫颈柱状上皮细胞鳞状上皮化的风险，导致上皮细胞异常分裂的调控异常；⑵P16蛋白的表达上升，能够促进癌细胞内MAPK 或者NF-KB通路的激活，增加了柱状上皮细胞周期调控异常的风险；⑶HPV L-1的表达下降,失去了其对于CD4+T 淋巴细胞免疫反应的诱导作用，促进了免疫逃逸的发生。陈晓露等[15]研究者也发现，在宫颈癌患者中，CK2β蛋白的表达阳性率上升30%以上，在具有宫旁组织浸润或者盆腔内脏器转移的患者中，CK2β蛋白的表达阳性率可进一步的上升。诊断学方面的分析可见，以最终的病理学诊断作为金标准，可以发现CK2β、P16、HPV L-1在单独诊断宫颈癌的过程中均具有一定的参考价值，但其中HPV L-1的诊断灵敏度相对较低，这主要由于HPV L-1蛋白的检出敏感性较低有关，而CK2β、P16 虽然能够在宫颈癌的诊断过程中发挥作用，但其仍然存在明显漏诊或者误诊的风险。通过联合CK2β、P16、HPV L-1 进行诊断，可以显著提高宫颈癌的诊断效能，临床上对于拒绝行阴道镜或者宫颈锥切活检的患者，必要时可以通过联合CK2β、P16、HPV L-1，进而辅助诊断宫颈癌。

综上所述，在宫颈癌患者中，CK2β、P16的表达明显上升，而HPV L-1的表达明显下降，同时CK2β、P16、HPV L-1在联合诊断宫颈癌的过程中具有一定的参考价值。