乳腺癌组织中Pokemon、TYK2表达与临床病理参数及P53的关系分析

刘平贤，张浩，李伟汉，宋春峰

（河南省南阳市中心医院乳腺分泌腺外科，河南 南阳 473009）

乳腺癌（Breast cancer,BC）是人类最早知晓具有高度异质性的癌症之一，从临床病理学、临床生物学、治疗反应等均存在很大程度不同，BC的异质性究其根本在于分子水平上存在的多样性和异质性[1]。目前，BC的病死率随着现代诊疗技术不断进步下有所下降，患者总生存时间有所延长，但BC的复发、转移风险仍较大[2]。临床上治疗BC 以手术、手术+术前新辅助化疗或术后化疗、放疗为主，大部分患者对化疗敏感度较高，但也有部分患者对化疗的敏感度不高，化疗效果受到限制，且当下尚无评价化疗敏感性、预测化疗效果的有效指标[3]。Ki-67 为核增殖的标志物，反映肿瘤细胞增殖活性[4]。Her-2 属于跨膜糖蛋白原癌基因，与肿瘤细胞生长、增殖、分化有关。周晓芳等[5]研究发现Ki-67表达与ER、PR 呈负相关,与Her-2 正相关,上述指标变化对BC 有一定的预测价值。与其他肿瘤相比，BC在分子生物学、病理组织学方面异质性较强，Ki-67、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体-2（Her-2）不仅对BC 治疗有指导作用，而且可作为患者预测疗效及预后判断[5-7]。最近发现POK 红髓生成因子（Pokemon）直接抑制关键糖酵解基因的表达，其缺失可诱导糖酵解，促进肿瘤的进展，酪氨酸激酶2（TYK2）参与人类癌症的肿瘤免疫监视，可通过激活MCL1表达促进间变性大细胞淋巴瘤细胞，肿瘤蛋白P53（P53）是由抑癌基因表达生成，具有抑制肿瘤细胞恶性增殖、促进肿瘤转移[8,9]。但目前关于POK、TYK2与病理参数及P53的相关性研究尚少。基于此，本研究主要分析POK、TYK2、P53在BC患者癌组织中的表达，以及POK、TYK2与ER、PR 等病理特征指标及P53的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院2019年1 月-2020年12月收治的BC患者78例。患者年龄平均（45.89±3.47）岁；其中绝经前45例，绝经后33例。

1.2 诊断标准 参照ASCO的《乳腺癌临床实践指南》。纳入标准：⑴经影像学检查、穿刺活检病理确诊为乳腺癌；⑵年龄18～70 岁，均为女性；⑶术前均未远处转移，术前接受新辅助化疗；⑷预期生存时间超过半年；⑸均配合完成相关检查，资料完整；⑹受试者知情，自愿签署知情同意书。

排除标准：⑴伴有自身免疫性疾病、血液功能障碍者；⑵伴有其他类型恶性肿瘤者；⑶不符合纳入标准者；⑷妊娠期或哺乳期妇女；⑸相关资料不全者。

1.2 研究方法 收集并整理78例BC患者临床病理资料，包括年龄（＜50 岁与≥50 岁）、月经情况（绝经前与绝经后）、肿瘤直径（≤2cm与＞2cm）、ER状态（阳性与阴性）、PR 状态（阳性与阴性）、HER-2 状态（阳性与阴性）、Ki-67表达（≥14%与＜14%）、三阴性乳腺癌（是与否）、淋巴结转移（是与否）等。

1.3 观察指标 采用免疫组化法进行Pokemon、TYK2、P53 测定。石蜡切片进行脱蜡、复水，用内源性过氧化物酶阻断液室温孵育20min,之后PBS 清洗3 次；加入0.01mol 枸椽酸缓冲液（PH=6.0）进行抗原修复，之后加入一抗Cox1（ARG23725，Arigo Biologicals）和Cox4（GB11250，Servicebio），4℃过夜，PBS 清洗3 次；滴加生物素标记的二抗，37℃孵育30min，PBS 清洗3 次；滴加辣根过氧化物酶标记链酶卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS 清洗3次；DAB 进行加强，之后流水冲洗终止；脱水，中性树脂封片。显微镜（DM3000，Leica）观察阳性细胞。

1.4 统计学方法 将所采集数据输入2013Excel表建立证候量表数据库。将所有资料导入计算机，采用SPSS20.0 软件进行统计分析。计数资料以频数表和百分率表示，行χ2检验；计量资料以（）表示，行t 检验；P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌组织Pokemon、TYK2、P53表达情况 免疫组化结果显示，乳腺癌组织内Pokemon、TYK2、P53 均呈棕黄色颗粒分布，Pokemon 阳性表达率为87.18%（68/78），TYK2 阳性表 达率为79.49%（62/78），P53 阳性表 达率为71.79%（56/78），均明显高于癌旁正常组织，具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 乳腺癌组织Pokemon、TYK2、P53表达[n（%）]

2.2 乳腺癌组织Pokemon、TYK2与P53 相关性情况 BC患者癌组织Pokemon、TYK2与P53水平呈正相关关系，具有统计学意义（r=0.328，P=0.003；r=0.239，P=0.035）。见表2。

表2 乳腺癌组织Pokemon、TYK2与P53 相关性

2.3 不同临床病理参数患者的乳腺癌组织Pokemon、TYK2表达情况 不同年龄、月经情况及肿瘤大小患者的乳腺癌组织Pokemon、TYK2表达比较差异不明显，不具有统计学意义（P＞0.05）；不同ER状态、PR 状态、HER-2 状态、Ki-67表达、三阴性乳腺癌及淋巴结转移患者的乳腺癌组织Pokemon、TYK2表达比较差异明显，具有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 不同临床病理参数患者的乳腺癌组织Pokemon、TYK2表达[n（%）]

3 讨论

乳腺癌是全球第二常见的癌症，每年约有170万新病例，它占所有女性侵袭性肿瘤的20%以上，占女性所有癌症的16%[10]。临床乳腺癌的分子分型与患者预后和治疗密切相关，根据雌激素受体ER、孕激素受体PR及人表皮生长因子受体HER2表达情况，可将乳腺癌分为4 个分子亚型:即Luminal、HER2 阳性、基底样（basal-like breast carcinoma,BLBC）和正常乳腺样3。前三种亚型分别与根据免疫组化特点所分的ER 阳性和/或PR 阳性、HER2 阳性和三阴性乳腺癌均阴性,Triple negative breast cancer,TNBC）相对应，具有相似的临床经过和预后，当然近年来有研究指出它们在评估新辅助化疗方面还是存在一定的优劣差异。尽管临床在诊断方法和治疗技术方面取得了巨大进展，但患者的长期生存率仍然不令人满意，对BC患者进行更准确的风险评估、优化治疗及探究BC 预后标志物和治疗靶点至关重要。

Pokemon，也称为FBI、ZBTB7A、LRF和OCZF，是转录因子POZ/BTB和POK 家族的成员之一POK 转录因子是重要的生长调节剂[11]。Pokemon 可通过抑制肿瘤ARF的转录而发挥原癌蛋白的功能，Pokemon在未成熟的小鼠T和B 淋巴谱系中的表达导致侵袭性淋巴瘤[12]。Pokemon 还可以通过激活SRY 盒9 依赖的致癌途径，促进PTEN 凋亡，并促进前列腺癌细胞的增殖、存活和侵袭[13]。TYK2是JAK（just another kinase 或janus kinase）是非受体酪氨 酸激酶 家族成 员 (JAK1、JAK2、JAK3和TYK2)之一,其结构不含SH2、SH3,C段具有两个相连的激酶区，JAKs 从N 端到C 端共有四个功能域，分别是FERM 同源域、非典型Src-同源性2 结构域、负调节激酶活性的激酶样或假激酶同源性2结构域和酪氨酸激酶结构域。主要通过JAK-STAT信号途径,激活STAT (STAT1-4、STAT5A、STA T5B、STAT6),促进细胞因子与受体结合,使STAT 二聚体化,与JAK 相互靠近、磷酸化,使受体上的酪氨酸残基磷酸化,STAT与受体分离,转位到核内,结合到DNA 序列,从而调控基因表达,促进肿瘤增值[14]。

本研究结果显示，Pokemon在乳腺癌组织中呈阳性高表达（87.18%），TYK2在乳腺癌组织中呈阳性高表达（79.49%），P53在乳腺癌组织中呈阳性高表达（71.79%），提示Pokemon、TYK2 可作为BC 潜在的肿瘤标志物，P53 参与了BC的发病及发展，且Spearman 相关分析显示，Pokemon、TYK2和P53在BC 总体样本中的表达具有正相关性，可以推测Pokemon、TYK2 可能是上游关键基因，对P53 具有正向调节作用。这与周蕾[15]等人研究结果相符合。

此外，本研究还发现，Pokemon、TYK2 阳性表达与ER 状态、PR 状态、HER-2 状态、Ki-67表达、三阴性乳腺癌及淋巴结转移关系密切，提示Pokemon、TYK2 能够作为预测BC 转移及预后的生物标志物。这与孙释然[16]等人研究结果相符合。

综上所述，BC患者的Pokemon、TYK2、P53 异常表达率较高，且Pokemon、TYK2和P53 呈正相关，Pokemon、TYK2、P53表达与ER阴性、PR 阴性、Ki-67 高表达、Her-2 阳性正相关。检测BC患者中的Pokemon、TYK2、P53表达水平对预测及预后具有一定临床指导价值。