椿根皮化学成分及其体外抗肿瘤活性

2021-09-27周晓欢袁亚敏王璋琳黄建新刘亚丽

中成药 2021年7期

周晓欢，袁亚敏，余玺，王璋琳，李馨，黄建新，刘亚丽

（平顶山学院医学院，河南平顶山 467000）

椿根皮是苦木科臭椿属植物臭椿Ailanthus altissima（Mill.）Swingle 的干燥根皮［1］，主要分布于河南、湖北、海南、青海、江西等省，全年均可采收，其味苦涩性寒，具有清热燥湿、收敛止带、止泻止血的功效，用于湿热泻痢、赤白带下、久泻久痢、便血、崩漏等［2］，其主要化学成分包括木脂素、黄酮、三萜、生物碱、有机酸［3］，具有抑菌、抗肿瘤、抗氧化、提高免疫力、保护神经等活性［4⁃5］。本实验对椿根皮乙醇提取物进行分离，得到15 个化合物，均为首次从该植物中分离得到，其中1～2、4、8、13 为首次从臭椿属植物中分离得到，8、13 具有一定的体外抗肿瘤活性。

1 材料

APLX6.0 型高分辨质谱仪、DRX⁃800 型核磁共振波谱仪（TMS 内标）（德国Bruker 公司）；HQ1431 型电子天平（瑞士Buchi 公司）；KLG120F型超声清洗器、KT91P 型旋转蒸发器（巩义市予华仪器有限公司）；恒温电热水浴锅（广州菲罗门仪器厂）。Sephadex LH⁃20（美国GE Healthcare 公司）；柱色谱硅胶（100～200、300～400 目，青岛海洋化工厂）。ALP130 型暗箱式紫外分析仪（德国Merck 公司）；二甲基亚砜（DMSO，美国Fisher Scientific 公司）；顺铂（美国Macklin 公司）；噻唑蓝（MTT，美国Amresco 公司）。人结肠癌细胞株COLO205、人大肠癌细胞株PA319、人胰腺癌细胞株AsPc、人肺腺癌细胞株A549（中国科学院细胞库）。提取分离试剂均为分析纯。

椿根皮采自河南省平顶山市，由平顶山学院黄建新副教授鉴定为椿根皮Ailanthus altissima（Mill.）Swingle。

2 提取与分离

取干燥椿根皮43.6 kg，加入15 倍95%乙醇回流提取3 次，每次1.5 h，合并提取液，置于旋转蒸发仪中减压回收溶剂，得浸膏7.2 kg。将上述浸膏超声溶解于2 L 水中，依次用等体积石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚萃取物（174.6 g，Fr.A）、二氯甲烷萃取物（131.4 g，Fr.B）、乙酸乙酯萃取物（129.3 g，Fr.C）、正丁醇萃取物（137.2 g，Fr.D）。Fr.B 经硅胶柱，以石油醚⁃丙酮（90 ∶10～10 ∶90）梯度洗脱，薄层硅胶板检测后合并相似组分，得到11 个馏分（Fr.B1～Fr.B11）。

Fr.B2 经硅胶柱，以石油醚⁃乙酸乙酯（70 ∶30～30 ∶70）梯度洗脱，薄层硅胶板检测后，合并相似组分，得到8 个馏分（Fr.B2⁃1～Fr.B2⁃8）。Fr.B2⁃4 经硅胶柱，以石油醚⁃丙酮（60 ∶40）洗脱，得化合物1（24 mg）；Fr.B2⁃6 经硅胶柱，以石油醚⁃二氯甲烷（40 ∶60）洗脱，得化合物5（19 mg）、6（31 mg）；Fr.B2⁃7 经结晶、重结晶，得化合物4（27 mg）。Fr.B4 经硅胶柱，以石油醚⁃乙酸乙酯（60 ∶40～20 ∶80）梯度洗脱，薄层硅胶板检测后合并相似组分，得到13 个馏分（Fr.B4⁃1～Fr.B4⁃13）。Fr.B4⁃2 经硅胶柱，以石油醚⁃丙酮（50 ∶50）洗脱，得化合物2（26 mg）；Fr.B4⁃7经Sephadex LH⁃20 分离，以甲醇洗脱，得化合物14（23 mg）。Fr.B7 经硅胶柱，以石油醚⁃乙酸乙酯（30 ∶70～10 ∶90）梯度洗脱，薄层硅胶板检测后合并相似组分，得到10 个馏分（Fr.B7⁃1～Fr.B7⁃10）。Fr.B7⁃3 经硅胶柱，以石油醚⁃丙酮（50 ∶50）洗脱，得化合物15（33 mg）；Fr.B7⁃5经结晶、重结晶，得化合物3（21 mg）；Fr.B7⁃9经Sephadex LH⁃20 分离，以甲醇洗脱，得化合物8（29 mg）。Fr.C 经硅胶柱，以二氯甲烷⁃丙酮（90 ∶10～10 ∶90）梯度洗脱，薄层硅胶板检测后合并相似组分，得到13 个馏分（Fr.C1～Fr.C13）。Fr.C3 经硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷⁃乙酸乙酯（80 ∶20～20 ∶80）梯度洗脱，薄层硅胶板检测后合并相似组分，得到7 个馏分（Fr.C3⁃1～Fr.C3⁃7）。Fr.C3⁃2 经硅胶柱，以二氯甲烷⁃丙酮（50 ∶50）洗脱，得化合物9（27 mg）；Fr.C3⁃5 经硅胶柱，以二氯甲烷⁃乙酸乙酯（60 ∶40）洗脱，得化合物13（29 mg）；Fr.C3⁃7 经结晶、重结晶，得化合物11（18 mg）。取Fr.C5 经硅胶柱，以二氯甲烷⁃乙酸乙酯（70 ∶30～30 ∶70）梯度洗脱，薄层硅胶板检测后合并相似组分，得到6 个馏分（Fr.C5⁃1～Fr.C5⁃6）。Fr.C5⁃3 经硅胶柱，以二氯甲烷⁃丙酮（50 ∶50）洗脱，得化合物7（35 mg）；Fr.C5⁃5 经硅胶柱，以二氯甲烷⁃乙酸乙酯（40 ∶60）洗脱，得化合物10（31 mg）；Fr.C3⁃7 经Sephadex LH⁃20 分离，以甲醇洗脱，得化合物12（21 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末（丙酮）。ESI⁃MSm／z：296.8 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：6.91（1H，d，J＝12.0 Hz，H⁃5′），6.71（1H，dd，J＝12.0，2.2 Hz，H⁃6′），6.59（1H，d，J＝2.2 Hz，H⁃2′），6.28（1H，t，J＝2.2 Hz，H⁃4），6.19（2H，d，J＝2.2 Hz，H⁃2，6），2.76（4H，m，H⁃α，α′），3.81（3H，s，3′⁃OCH3），3.73（3H，s，3⁃OCH3）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：145.1（C⁃1），107.1（C⁃2），161.2（C⁃3），100.2（C⁃4），157.1（C⁃5），107.6（C⁃6），134.1（C⁃1′），110.7（C⁃2′），145.2（C⁃3′），144.1（C⁃4′），113.6（C⁃5′），120.7（C⁃6′），37.5（C⁃α），36.8（C⁃α′），54.9（3⁃OCH3），56.1（3′⁃OCH3）。以上数据与文献［6］基本一致，故鉴定为gigantol。

化合物2：无色油状物（甲醇）。ESI⁃MSm／z：257.3 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：5.69（1H，s，H⁃9），2.77（1H，d，J＝12.0 Hz，H⁃12），2.68（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃12），2.39（1H，td，J＝12.2，8.2 Hz，H⁃1），2.31（1H，dd，J＝12.0 Hz，8.2 Hz，H⁃6），2.09～2.14（1H，m，H⁃1），2.07（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H⁃7），1.87～1.97（1H，m，H⁃3），1.79～1.81（1H，m，H⁃4），1.69（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H⁃6），1.51～1.57（1H，m，H⁃2），1.49（1H，dq，J＝12.0，8.2 Hz，H⁃3），1.19～1.24（1H，m，H⁃2），1.13（3H，s，H⁃13），1.07（3H，s，H⁃14），0.91（3H，d，J＝8.2 Hz，H⁃15）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：32.8（C⁃1），30.1（C⁃2），29.7（C⁃3），38.1（C⁃4），39.4（C⁃5），39.1（C⁃6），50.2（C⁃7），197.4（C⁃8），121.6（C⁃9），172.8（C⁃10），55.7（C⁃11），55.8（C⁃12），16.9（C⁃13），20.8（C⁃14），17.9（C⁃15）。以上数据与文献［7］基本一致，故鉴定为7α⁃H⁃9（10）⁃ene⁃11，12⁃epoxy⁃8⁃oxoeremophilane。

化合物3：黄色粉末（甲醇）。ESI⁃MSm／z：338.6 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：12.14（1H，s，5⁃OH），7.08（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃2′），6.94（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃5′），6.85（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H⁃6′），5.97（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃8），5.86（1H，d，J＝12.0 Hz，H⁃6），5.48（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H⁃2），3.94（3H，s，7⁃OCH3），3.76（3H，s，4′⁃OCH3），3.24（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H⁃3a），2.75（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H⁃3b）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：104.2（C⁃1），78.3（C⁃2），44.1（C⁃3），199.2（C⁃4），158.4（C⁃5），96.1（C⁃6），168.2（C⁃7），93.7（C⁃8），162.3（C⁃9），102.9（C⁃10），130.2（C⁃1′），113.2（C⁃2′），146.4（C⁃3′），147.6（C⁃4′），114.3（C⁃5′），117.6（C⁃6′），55.9（4′⁃OCH3），56.8（7⁃OCH3）。以上数据与文献［8］基本一致，故鉴定为5，3′⁃dihydroxy⁃7，4′⁃dime⁃thoxyflavanone。

化合物4：无色油状物（甲醇）。ESI⁃MSm／z：257.2 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：5.69（1H，s，H⁃9），2.58（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃12），2.47（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃12），2.41（1H，dd，J＝12.0，2.2 Hz，H⁃7），2.39（1H，t，J＝12.0 Hz，H⁃1），2.06～2.09（1H，m，H⁃1），2.04（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H⁃6），1.87～1.93（1H，m，H⁃2），1.76～1.85（1H，m，H⁃4），1.54～1.59（1H，m，H⁃3），1.46～1.51（1H，m，H⁃3），1.43（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H⁃6），1.39（3H，s，H⁃13），1.18～1.27（1H，m，H⁃2），1.06（3H，s，H⁃14），0.93（3H，d，J＝12.0 Hz，H⁃15）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：32.8（C⁃1），30.1（C⁃2），29.7（C⁃3），39.1（C⁃4），42.5（C⁃5），33.8（C⁃6），48.2（C⁃7），197.1（C⁃8），123.4（C⁃9），171.8（C⁃10），55.9（C⁃11），50.6（C⁃12），20.8（C⁃13），21.3（C⁃14），15.9（C⁃15）。以上数据与文献［9］基本一致，故鉴定为7β⁃H⁃9（10）⁃ene⁃11，12⁃epoxy⁃8⁃oxoeremophilane。

化合物5：无色油状物（甲醇）。ESI⁃MSm／z：270.8 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：6.94（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃5），6.68（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃6），6.63（1H，s，H⁃2），6.08（1H，m，H⁃3′），4.41（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H⁃9α），4.02（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H⁃9β），3.41（1H，m，H⁃8），2.30（3H，s，H⁃7），2.03（3H，d，J＝12.0 Hz，H⁃4′），1.87（3H，s，H⁃5′），1.39（3H，d，J＝12.0 Hz，H⁃10）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：139.9（C⁃1），117.6（C⁃2），153.8（C⁃3），128.1（C⁃4），124.6（C⁃5），120.8（C⁃6），20.7（C⁃7），31.9（C⁃8），70.2（C⁃9），17.1（C⁃10），170.2（C⁃1′），126.8（C⁃2′），140.1（C⁃3′），15.7（C⁃4′），21.3（C⁃5′）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为9⁃angeloyloxythymol。

化合物6：白色粉末（甲醇）。ESI⁃MSm／z：159.2 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：8.01（2H，d，J＝12.0 Hz，H⁃2，6），6.96（1H，d，J＝12.0 Hz，H⁃3，5），2.63（3H，s，H⁃8）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：130.1（C⁃1），129.3（C⁃2），116.2（C⁃3），159.3（C⁃4），116.2（C⁃5），129.3（C⁃6），200.3（C⁃7），27.1（C⁃8）。以上数据与文献［11］基本一致，故鉴定为对羟基苯乙酮。

化合物7：黄色油状物（丙酮）。ESI⁃MSm／z：264.7 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：8.03（1H，d，J＝12.0 Hz，H⁃5），6.28（1H，d，J＝12.0，8.2 Hz，H⁃6），6.62（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃8），6.41（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃1），6.31（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃3），2.57（4H，s，H⁃9，10），3.76（3H，s，4⁃OCH3）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：107.9（C⁃1），158.1（C⁃2），100.3（C⁃3），162.4（C⁃4），129.7（C⁃5），114.8（C⁃6），155.7（C⁃7），114.2（C⁃8），32.3（C⁃9），30.7（C⁃10），139.8（C⁃1a），117.2（C⁃4a），125.8（C⁃5a），147.2（C⁃8a），56.1（4⁃OCH3）。以上数据与文献［12］基本一致，故鉴定为coelonin。

化合物8：白色晶体（丙酮）。ESI⁃MSm／z：219.3 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：13.97（1H，s，⁃OH），5.94（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃4），5.87（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃7），3.91（3H，s，6⁃OCH3），3.79（3H，s，5⁃OCH3），2.58（3H，s，2⁃OCH3）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：202.8（C⁃1），105.8（C⁃2），168.3（C⁃3），94.2（C⁃4），165.7（C⁃5），163.2（C⁃6），91.3（C⁃7），32.9（2⁃OCH3），56.1（5，6⁃OCH3）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为crototropone。

化合物9：白色粉末（丙酮）。ESI⁃MSm／z：460.8 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：7.61（1H，s，H⁃3），6.08（1H，J＝8.2 Hz，H⁃1），5.81（1H，s，H⁃1′），5.59（1H，d，J＝2.2 Hz，H⁃7），4.63（1H，s，H⁃6），3.82（3H，s，⁃OCH3），3.29～3.81（5H，H⁃2′～6′），3.18（1H，s，H⁃9），1.76（3H，s，H⁃10）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：93.8（C⁃1），155.2（C⁃3），109.3（C⁃4），72.9（C⁃5），76.8（C⁃6），126.9（C⁃7），142.7（C⁃8），55.1（C⁃9），15.2（C⁃10），169.1（C⁃11），99.2（C⁃1′），71.8（C⁃2′），75.7（C⁃3′），70.2（C⁃4′），74.8（C⁃5′），61.3（C⁃6′），52.3（⁃OCH3）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为7，8⁃dehydropenstemoside。

化合物10：白色粉末（丙酮）。ESI⁃MSm／z：426.9 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：5.62（1H，d，J＝2.2 Hz，H⁃6），4.71（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃1′），4.48（1H，d，J＝2.2 Hz，H⁃7），3.76（3H，s，⁃OCH3），1.32（3H，s，⁃OCH3）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：94.2（C⁃1），154.1（C⁃3），110.8（C⁃4），128.3（C⁃5），141.7（C⁃6），76.4（C⁃7），73.2（C⁃8），51.6（C⁃9），15.1（C⁃10），167.1（C⁃11），99.2（C⁃1′），71.8（C⁃2′），75.8（C⁃3′），69.8（C⁃4′），78.2（C⁃5′），60.7（C⁃6′），49.6（⁃OCH3）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为gentioside。

化合物11：黄色结晶（丙酮）。ESI⁃MSm／z：323.4 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：13.24（1H，s，5⁃OH），8.05（d，J＝12.0 Hz，1H），7.71（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃6′），7.63（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃2′），7.32（1H，d，J＝12.0 Hz，H⁃5′），6.76（1H，s，H⁃3），6.49（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃8），6.18（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃6），3.94（3H，s，3′⁃OCH3）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：164.5（C⁃2），104.2（C⁃3），182.4（C⁃4），158.1（C⁃5），99.3（C⁃6），163.8（C⁃7），93.6（C⁃8），160.8（C⁃9），102.7（C⁃10），119.2（C⁃1′），108.4（C⁃2′），148.2（C⁃3′），147.9（C⁃4′），116.1（C⁃5′），122.4（C⁃6′），56.1（3′⁃OCH3）。以上数据与文献［15］基本一致，故鉴定为金圣草黄素。

化合物12：白色粉末（丙酮）。ESI⁃MSm／z：553.2 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：7.61（2H，d，J＝8.2 Hz，H⁃7′，7″），7.13（2H，m，H⁃2，2′），6.87（2H，m，H⁃6′，6″），6.65（2H，m，H⁃5′，5″），6.18（2H，d，J＝8.2 Hz，H⁃8′，8″），5.71（1H，m，H⁃5），4.97（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H⁃4），4.40（1H，m，H⁃3），3.81（3H，s，⁃OCH3）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：74.9（C⁃1），37.1（C⁃2），65.8（C⁃3），69.2（C⁃4），69.2（C⁃5），40.7（C⁃6），177.1（C⁃7），169.2（C⁃9），128.1（C⁃1′），115.3（C⁃2′），47.2（C⁃3′），150.1（C⁃4′），17.2（C⁃5′），122.8（C⁃6′），148.1（C⁃7′），114.6（C⁃8′），128.4（C⁃1″），116.1（C⁃2″），47.2（C⁃3″），150.3（C⁃4″），117.2（C⁃5″），122.8（C⁃6″），148.1（C⁃7″），114.9（C⁃8″），169.2（C⁃9″），54.6（⁃OCH3）。以上数据与文献［16］基本一致，故鉴定为4，5⁃二咖啡酰基奎宁酸甲酯。

化合物13：白色油状物（丙酮）。ESI⁃MSm／z：331.4 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：6.81（1H，s，H⁃5），5.09（1H，m，H⁃3），4.62（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃4），4.07～4.23（1H，m，H⁃10），4.01（3H，s，6⁃OCH3），3.79（3H，s，7⁃OCH3），2.59～2.65（1H，m，H⁃9β），1.97（1H，ddd，J＝12.0，8.2，2.2 Hz，H⁃9a），1.71（1H，m，H⁃11a），1.58（1H，m，H⁃11b），1.40（2H，m，H⁃2～12），1.01（3H，t，J＝8.2 Hz，H3⁃13）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：170.2（C⁃1），82.7（C⁃3），76.1（C⁃4），105.8（C⁃5），159.7（C⁃6），138.7（C⁃7），156.8（C⁃8），39.7（C⁃9），80.1（C⁃10），40.3（C⁃11），21.4（C⁃12），15.1（C⁃13），134.2（C⁃4a），102.7（C⁃8a），50.3（7⁃OCH3），57.0（6⁃OCH3）。以上数据与文献［16］基本一致，故鉴定为monocerin。

化合物14：白色粉末（丙酮）。ESI⁃MSm／z：400.2 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：5.24（1H，s，H⁃14），3.97（1H，t，J＝12.0 Hz，H⁃15），3.85（1H，t，J＝12.0 Hz，H⁃16a），3.81（1H，m，H⁃2），3.72（1H，t，J＝12.0 Hz，H⁃16b），3.61（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃19a），3.19（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃19b），1.37（3H，s，H⁃22），1.28（3H，s，H⁃23），1.09（3H，s，H⁃18），0.87（3H，s，H⁃17），0.81（3H，s，H⁃20）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：50.1（C⁃1），65.2（C⁃2），44.1（C⁃3），39.7（C⁃4），55.1（C⁃5），22.4（C⁃6），36.1（C⁃7），138.4（C⁃8），50.2（C⁃9），41.7（C⁃10），20.3（C⁃11），33.1（C⁃12），35.9（C⁃13），127.6（C⁃14），79.4（C⁃15），63.9（C⁃16），24.1（C⁃17），25.9（C⁃18），64.7（C⁃19），17.3（C⁃20），110.2（C⁃21），26.1（C⁃22），25.3（C⁃23）。以上数据与文献［17］基本一致，故鉴定为isopropylidenkirenol。

化合物15：无色油状物（甲醇）。ESI⁃MSm／z：200.7 ［M ＋Na］＋。1H⁃NMR（DMSO⁃d6，600 MHz）δ：7.71（1H，d，J＝12.0 Hz，H⁃6），6.91（1H，s，H⁃3），6.69（1H，d，J＝12.0 Hz，H⁃5），2.49（3H，s，H⁃10），2.41（3H，s，4⁃OCH3）；13C⁃NMR（DMSO⁃d6，150 MHz）δ：112.8（C⁃1），163.8（C⁃2），119.2（C⁃3），149.7（C⁃4），120.7（C⁃5），131.9（C⁃6），196.1（C⁃8），200.1（C⁃9），27.3（C⁃10），21.9（4⁃OCH3）。以上数据与文献［18］基本一致，故鉴定为1⁃（2⁃hydroxy⁃4⁃methylphe⁃nyl）propan⁃1，2⁃dione。

4 体外抗肿瘤活性筛选

采用MTT 法［19⁃20］测试化合物1～15、椿根皮粗提物对人结肠癌细胞株COLO205、人大肠癌细胞株PA319、人胰腺癌细胞株AsPc、人肺腺癌细胞株A549 的体外抑制作用，以顺铂为阳性对照药。取对数生长期的COLO205、PA319、AsPc、A549细胞株，胰酶消化，稀释成浓度3×105／mL 的单细胞悬液，各浓度均设置3 个复孔，以每孔100 μL置于96 孔板中，在37.0 ℃培养箱内培养24 h，分别加入各浓度化合物1～15、椿根皮粗提物（质量浓度为45 μg／mL）、顺铂，培养24 h，每孔加入10 μL MTT 试剂染色，孵育5.0 h，弃去上层培养液，每孔加入100 μL DMSO，轻轻摇动均匀，用酶标仪检测510 nm 波长下的吸光度，计算细胞抑制率，采用SPSS 22.0 软件对所得数据进行分析，计算各化合物的IC50值。结果表明，化合物8 对AsPc 细胞株、化合物13 对COLO205 和AsPc 细胞株均具有较强的体外抑制作用，椿根皮粗提物对COLO205、PA319、AsPc、A549 细胞具较强的体外抑制作用，其中体外抑制PA319、A549 活性优于顺铂，见表1。

表1 体外抗肿瘤实验IC50值（μmol／L，， n＝3）Tab.1 IC50 values in antitumor activity in vitro tests（μmol／L，， n＝3）

5 讨论

椿根皮为民间常用药，在抗肿瘤方剂中多有出现，但关于其单体化合物活性的报道较少，仅Yan等［21］从中分离的外消旋苯丙烷具有抗肿瘤活性。课题组前期对椿根皮抗肿瘤活性进行筛选，发现其对COLO205、PA319、AsPc、A549 细胞具较强的体外抑制作用。为了进一步探求椿根皮中抗肿瘤活性可能的单体化合物，本研究从中分离得到15 个化合物，均为首次发现，其中1～2、4、8、13 为首次从该属植物中分得。再采用 COLO205、PA319、AsPc、A549 细胞株对所得化合物进行体外抗肿瘤活性筛选，结果8、13 具有不同程度的抗肿瘤活性。本研究丰富了椿根皮化学成分的物质基础，可为相关抗肿瘤新药的研发提供参考。