UPLC⁃MS／MS法同时测定女金胶囊中10种成分

梁 艳，张 峰

（1.河南应用技术职业学院，河南 郑州450040； 2.开封市食品药品检验所，河南 开封 475001）

女金胶囊是由当归、白芍、川芎等23 味药材组成的复方制剂，具有益气养血、理气活血、止痛的功效［1］，方中药材主要成分阿魏酸、芍药苷、桂皮醛、橙皮苷有抗炎、抗氧化等作用［2］，毛蕊花糖苷有抗血栓、抗肿瘤等作用［3］，欧前胡素、延胡索乙素有镇痛作用［4］，其活性均与女金胶囊临床作用密不可分。前期报道采用HPLC 法测定女金胶囊中芍药苷、橙皮苷、黄芩苷、丹皮酚含量［5⁃7］，但尚未涉及其君药当归、川芎中的主要成分阿魏酸。另外，欧前胡素、延胡索乙素、毛蕊花糖苷由于含量太低，无法采用传统HPLC 法及紫外检测器进行定量。

UPLC⁃MS／MS 法与HPLC 法相比，具有专属性强、分析时间短、灵敏度高的优势，而且通过不同化合物的特征母离子与其子离子的对应关系可解决复杂样品准确定性定量问题。因此，本实验首次建立UPLC⁃MS／MS 法同时测定女金胶囊中益母草碱、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、延胡索乙素、橙皮苷、黄芩苷、桂皮醛、甘草酸、欧前胡素的含量，以期为该制剂质量评价提供参考。

1 材料

ACQUITY UPLC H⁃Class Plus Xevo TQ⁃S Micro三重四级杆液质联用仪（美国Waters 公司），配置Mass Lynx 数据处理系统、ESI 离子源；New Classic电子天平（十万分之一，瑞士Mettler⁃Toledo 公司）；KQ⁃250ES 超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；JH⁃A 超纯水机（江辉环保科技有限公 司）。女金胶囊（批号 200712、200816、200912）购自药店。阿魏酸（110773⁃201614，纯度99.0%）、毛蕊花糖苷（111530⁃201914，纯度95.2%）、芍药苷（110736⁃201035，纯度96.5%）、盐酸益母草碱（11823⁃201704，纯度94.3%）、甘草酸铵（110731⁃202021，纯度96.2%）、橙皮苷（110721⁃201617，纯度96.1%）、欧前胡素（110826⁃201415，纯度99.7%）、延胡索乙素（110726⁃201819，纯度99.8%）、桂皮醛（110710⁃201821，纯度99.6%）、黄芩苷（110715⁃201016，纯度93.3%）对照品均购自中国食品药品检定研究院。甲醇、甲酸、乙腈为色谱纯（美国Fisher Scientific 公司）；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 分析条件

2.1.1 色谱Phenomenex Kinetex C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，2.6 μm）；流动相0.1% 甲酸（A）⁃乙腈（B），梯度洗脱（0～0.5 min，10%B；0.5～2 min，90%～70%B；2～8 min，70%～20%B；8～8.2 min，20%～90%B；8.2～10 min，10%B）；体积流量0.40 mL／min；柱温35 ℃；进样量2 μL。

2.1.2 质谱 ESI 离子源；MRM 模式，正负离子切换扫描；毛细管电压3.1 kV；锥孔电压40 V；源区温度148 ℃；干燥气温度480 ℃，体积流量950 L／h；雾化器压力250 kPa；雾化气N2；碰撞气Ar。其他质谱参数见表1。

表1 各成分质谱参数Tab.1 MS parameters for various constituents

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取盐酸益母草碱、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、延胡索乙素、桂皮醛、甘草酸铵、欧前胡素、橙皮苷、黄芩苷对照品适量，用溶剂A（量取50%乙腈2 L，加入2.0 mL甲酸，混合均匀）超声溶解稀释，作为对照品溶液①，各成分质量浓度分别为0.051 10、0.810 4、0.050 55、0.010 02、0.020 28、1.521、1.533、0.406 4、0.404 4、0.203 4 g／L。精密量取5 mL，置于20 mL 量瓶中，溶剂A 稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液②。

2.2.2 供试品溶液 取胶囊20 粒，倾去内容物，混匀，取约0.2 g，精密称定，置于250 mL 烧瓶中，加入70%乙醇约100 mL，80 ℃水浴加热回流提取70 min，放冷，滤过，滤液过滤至250 mL 量瓶中，50 mL 70% 乙醇洗涤残渣，再加入甲酸约0.25 mL 至量瓶中，70%乙醇稀释至刻度，即得。

2.2.3 阴性样品溶液 参照文献［1］ 报道的处方，取除当归、白芍、川芎、熟地黄、甘草、肉桂、益母草、牡丹皮、醋延胡索、白芷、黄芩、陈皮以外的其他13 味药材，按“2.2.2”项下方法制备，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性考察 取对照品、供试品、阴性样品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，结果见图1。由此可知，各成分的分离度和峰形良好，阴性无干扰。

图1 各成分MRM 色谱图Fig.1 MRM chromatograms of various constituents

2.3.2 线性关系考察 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液②，用溶剂A 按适当比例稀释成系列质量浓度，在“2.1”项色谱条件下进样测定。以峰面积为纵坐标（Y），各对照品质量浓度为横坐标（X）进行回归，并分别以S／N ＝10、S／N ＝3 为定量限、检测限，结果见表2，可知各成分在各自范围内线性关系良好。

表2 各成分线性关系Tab.2 Linear relationships of various constituents

2.3.3 精密度试验 取“2.2.1”项下对照品溶液②，在“2.1”项色谱条件下进样测定7 次，测得益母草碱、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、延胡索乙素、橙皮苷、黄芩苷、桂皮醛、甘草酸、欧前胡素峰面积RSD 分别为2.73%、2.52%、2.30%、3.51%、2.90%、2.84%、2.42%、2.72%、2.03%、3.81%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 重复性试验 取胶囊（批号200712）6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得益母草碱、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、延胡索乙素、橙皮苷、黄芩苷、桂皮醛、甘草酸、欧前胡素峰面积RSD 分别为 2.32%、2.45%、3.33%、3.65%、2.93%、2.62%、2.11%、2.57%、2.20%、3.01%，表明该方法重复性良好。

2.3.5 稳定性试验 取“2.3.4”项下供试品溶液，于0、2、4、8、12、20、24 h 在“2.1”项色谱条件下进样测定，测得益母草碱、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、延胡索乙素、橙皮苷、黄芩苷、桂皮醛、甘草酸、欧前胡素峰面积RSD 分别为2.55%、2.12%、2.88%、3.58%、2.93%、2.62%、3.36%、2.57%、2.67%、3.01%，表 明溶液在24 h 内稳定性良好。

2.3.6 加样回收率试验 精密称取各成分含量已知的胶囊9 份，每份约0.1 g，置于250 mL 烧瓶中，精密量取“2.2.1”项下对照品溶液②0.5、1、1.5 mL，每个质量浓度3 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，益母草碱、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、延胡索乙素、橙皮苷、黄芩苷、桂皮醛、甘草酸、欧前胡素平均加样回收率分别为98.80%、96.61%、98.05%、97.32%、99.34%、98.95%、97.83%、97.55%、99.43%、99.94%，RSD 分别为2.30%、1.76%、2.29%、2.74%、2.30%、2.28%、2.55%、2.73%、2.30%、2.44%。

2.3.7 样品含量测定 取3 批胶囊（编号S1～S3），每批2 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算含量，结果见表3。

表3 各成分含量测定结果（mg／g， n＝2）Tab.3 Results of content determination of various constituents（mg／g， n＝2）

3 讨论与结论

查阅文献［8⁃10］，本实验曾采用70%乙醇超声提取，但发现桂皮醛、欧前胡素提取效率不高，故选择回流提取。再考察了提取溶剂50% 乙醇、70%乙醇、乙醇，80 ℃水浴加热回流30、45、60、75 min，发现用70% 乙醇提取时效率最高，提取60 min后各成分含量不再增加；提取75 min 时，芍药苷、桂皮醛、欧前胡素含量稍有下降。最终确定，提取方法为80 ℃水浴中用70%乙醇加热回流60 min。

本实验比较了甲醇⁃水、乙腈⁃水、甲酸⁃水等洗脱系统［11⁃16］，发现以0.1%甲酸⁃乙腈为流动相时各成分峰形、分离度均符合要求，同时考虑到溶剂效应的存在，采用流动相来稀释样品。由于毛蕊花糖苷含量较低，为保证其灵敏度，对其保留时间±0.5 min范围内的驻留时间进行手动分配和分段扫描，同时为了防止保留时间接近的待测组分互相干扰，又采用了正负离子切换扫描方式，采集模式选择MRM，可保证方法专属性。

综上所述，本实验首次采用UPLC⁃MS／MS 法同时测定女金胶囊中的10 种成分，发现该方法具备专属性强、速度快、灵敏度高、节省溶剂的特点，可为提高该制剂的质量标准提供参考。