一氧化氮合酶1转接蛋白基因多态性与冠心病病人PCI术后需要再次血运重建的关系

任晓园，王慧峰，张 强，郝 佳

目前，经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention，PCI)在治疗冠心病方面扮演着重要角色，使很大一部分冠心病病人受益[1]，然而随着PCI术的普及、随访次数的增加及血管内超声技术的应用等因素使PCI术后需再次血运重建这一并发症暴露出来。研究发现临床上有一部分冠心病病人PCI术后虽然严格按照指南进行双联抗血小板及降脂治疗，但仍会在术后6～12个月，尤其是在6～9个月进行冠状动脉再次血运重建[2]。其机制复杂且目前尚不明确，国内外研究认为主要是由于PCI术植入支架损伤血管导致平滑肌细胞过度增殖、迁移所致[3-4]。此外，临床上只有部分病人会发生冠状动脉再次血运重建，可能是由于遗传因素造成的个体差异所导致。目前，国内外对于一氧化氮合酶1转接蛋白(NOS1AP)的研究大多集中于猝死、QT间期延长、冠心病易感性、精神分裂症、胰岛素抵抗等方面[5-8]。本研究基于一氧化氮(NO)参与冠心病发生发展的研究基础上，探讨NOS1AP基因多态性与冠心病病人PCI术后需要再次血运重建关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年6月—2019年6月在我院行PCI术，术后12～18个月来我院复查的200例冠心病病人，根据冠状动脉造影(CAG)复查结果，其中32例需要进行冠状动脉再次血运重建的病人纳入血运重建组，其余168例为对照组。纳入标准：①前次PCI成功完成，无支架贴壁不良；②临床资料较完整，有可溯源性；③前次PCI结束后12～18个月来我院复查CAG的病人；④再次血运重建包括靶病变、非靶病变、靶病变和非靶病变同时需要血运重建。排除标准：①首次PCI失败改行冠状动脉旁路移植术(CABG)的病人；②再次血运重建为医源性短期分次血运重建的病人；③严重肝肾功能不全，近6个月内发生脑出血或脑梗死的病人。

1.2 检测方法 采用Ex-DNA通用型核酸提取试剂盒、使用天隆NP968磁珠核酸提取仪(西安天隆科技有限公司)从病人外周血中提取DNA，采用Sanger测序法、使用Applied Biosystems 3730测序仪(美国Thermal Cycler公司)检测病人NOS1AP基因rs12742393、rs12084280、rs10918859位点的基因型。聚合酶链式反应(PCR)引物由通用生物系统(安徽)有限公司合成，引物序列见表1。PCR反应体系(20 μL)包括DNA模板2.0 μL，2×GoldStar MasterMix 10.0 μL(康为世纪生物科技有限公司)，灭菌双蒸水7.0 μL，正向、反向引物各0.5 μL(10 μmol/L)。PCR反应条件：95 ℃预变性5 min，95 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35个循环，72 ℃再延伸5 min。PCR产物采用虾碱酶法纯化，经BDT扩增，沉淀洗涤后，高度去离子甲酰胺(HIDI)变性上机测序。使用Chromas软件对测序结果进行分析。

表1 基因位点检测引物序列信息

2 结 果

2.1 两组临床资料比较 两组病人年龄、性别、体质指数(BMI)、吸烟、饮酒、高血压、支架直径、支架长度比较差异均无统计学意义(P>0.05)，血运重建组糖尿病史占比、前次植入支架数量、多支病变占比均高于对照组(P<0.05)。详见表2。

表2 两组临床资料比较

2.2 两组血液生化指标比较 血运重建组空腹血糖、糖化血红蛋白、血尿酸、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平高于对照组，总胆红素水平低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，而两组间总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血尿素、血肌酐、左室射血分数(LVEF)比较差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表3。

表3 两组血液生化指标比较(±s)

2.3 两组病人基因型与等位基因频率比较 3个NOS1AP基因位点测序结果见图1，两组病人NOS1AP3个基因位点基因型及基因频率比较，rs10918859基因型、等位基因比较差异均有统计学意义(P<0.05)，rs12084280、rs12742393基因型、等位基因比较差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表4。

图1 3个NOS1AP基因位点测序结果

表4 两组病人各基因型与等位基因频率比较

2.4 冠状动脉再次血运重建的Logistic回归分析 Logistic回归分析显示，糖尿病史、空腹血糖、血尿酸、LDL-C、前次支架植入数量、多支病变、NOS1AP基因位点rs10918859 G/A是冠状动脉再次血运重建的影响因素(P<0.05)。详见表5。

表5 冠状动脉再次血运重建的Logistic回归分析

3 讨 论

PCI术后需要再次血运重建是目前国内外心血管方面研究的重点及难点，早期识别再狭窄及寻找再次血运重建的预测因素对于冠心病病人预后显得尤为重要，关于这类的研究也有很多，但尚无统一标准。本研究结果显示，血尿酸、糖尿病史、空腹血糖、LDL-C、多支病变、植入支架数量、NOS1AP基因位点rs10918859多态性是冠状动脉再次血运重建的危险因素。

目前，国内外多项研究证实2型糖尿病是PCI术后再狭窄的独立危险因素[9-10]，高血糖水平对内皮细胞毒性很大且使血液黏滞度高，造成PCI术后内皮细胞修复功能障碍，且糖基化终末产物会使动脉粥样硬化加速再狭窄的形成。本研究证实高尿酸血症是再次血运重建的独立危险因素，与文献报道一致[11-12]。Freedman等[13]认为血尿酸与冠心病发病相关。PCI术后合并高尿酸血症时大量血尿酸结晶附着于损伤的血管壁上影响内膜修复。赵存瑞等[14-15]认为LDL-C是冠状动脉再次血运重建的重要预测因子，与本研究结果一致，而且既往已有研究指出PCI术后严格强化给予他汀类药物降脂治疗尤其是降低LDL-C，可以有效降低再次冠状动脉血运重建的发生率[16]。支架本身因素也会导致支架内再狭窄的发生。既往也有研究表明多支病变尤其是合并前降支病变、支架植入数量多、支架直径小、病变血管长的病人发生再次血运重建的概率增加[17]。以上因素均增加了冠状动脉再次PCI的风险。

NOS1AP的编码基因位于人类染色体的第1号，长度为299 kb，编码NOS1AP蛋白，NOS1AP可以通过作用于神经元型一氧化氮合酶(nNOS)结合区来调节nNOS的活性[18]，nNOS可以催化生成NO。有研究表明，敲除nNOS编码基因可能导致小鼠血管内皮功能受损[19]。蛋白质组学研究发现，NOS1AP 基因 rs12143842 位点在我国汉族人群中的遗传变异与特发性室性心动过速的风险相关[20]；美国学者认为NOS1AP(rs12084280，rs10918859)位点的基因多态性为冠心病病人发生心源性猝死的遗传学依据[6]。以上相关因素均说明NOS1AP基因多态性与冠心病的发生发展密切相关。本研究探讨了以上NOS1AP3个基因位点与冠状动脉再次血运重建的相关性，最后证实仅有rs10918859多态性是冠心病PCI术后需要再次血运重建的独立危险因素，提示其可作为冠心病PCI术后是否会再次需要血运重建的预测因素。Aouizerat等[21]研究发现，NOS1AP多个位点与美国人群冠心病患病风险相关，而国内有研究证实在汉族人群中仅有rs10918859位点基因多态性与冠心病风险相关[22]，具有种族差异性，本研究结果是否也与种族差异性有关，需要进一步研究。关于对NOS1AP基因多态性与冠状动脉血运重建的关系仍有待进一步探索，推测其可能是由于NOS1AP基因变异导致NO生成减少，影响了NO参与的病理生理过程。本研究样本数量小且为单中心研究，存在一定局限性，NOS1AP基因多态性是否能预测冠状动脉再次血运重建的风险，在以后的研究中应该扩大样本量并进行多中心研究，为冠状动脉再次血运重建提供预测手段。