叉头框转录因子M1和增殖细胞核抗原在食管癌组织中的表达及与放化疗预后相关性分析

马显平，张海斌

(1.陕西省核工业二一五医院肿瘤放疗科，陕西 咸阳 712000；2.铜川市人民医院普外胸外科，陕西 铜川 727000)

食管癌是我国常见恶性肿瘤，长期占恶性肿瘤死亡的前5位[1-2]。随着医学技术的发展，出现了一些新的治疗方法及新的治疗药物，但是食管癌患者5年生存率一直维持在20%左右[3]。放化疗为中晚期食管癌的主要治疗方法，但是除了治疗过程中的不良反应外，肿瘤局部未控率和复发率也一直比较高。因此，寻找影响食管癌病情与预后的分子标志物并对其机制进行深入研究，对于改善患者预后具有重要作用[4-5]。现代研究表明食管癌的发生是环境因素与宿主因素相互作用的结果，也是多阶段、多基因变化的过程。叉头框转录因子M1(Forkhead box protein M1，FOXM1)可通过与下游基因的启动子结合，从而调控下游基因转录，参与机体DNA损伤修复、细胞周期调控、染色质组装等多个过程[6-7]。增殖细胞原核抗(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是反映细胞增殖的主要生物指标之一，其表达水平与细胞增殖和转移水平密切相关[8-10]。本研究探讨FOXM1和PCNA在食管癌组织中的表达与放化疗预后的相关性，希望为明确食管癌的发生机制与改善放化疗预后提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年6月至2020年6月于本院行同期放化疗的86例食管癌患者作为研究对象。其中，男性46例，女性40例；平均年龄(59.38±9.47)岁；平均病灶最大直径(5.28±0.28)cm；淋巴结转移32例；组织学高分化28例，低分化22例，中分化36例；临床分期Ⅱ期42例，Ⅲ期28例，Ⅳ期16例。病例纳入标准：所有患者均行病理检查确诊为食管鳞状细胞癌，具有完整的病灶组织标本与癌旁组织本标(与癌灶距离≥5 cm)；年龄18～80岁；未合并其他恶性肿瘤；临床分期Ⅱ期及以上。排除标准：怀孕或母乳喂养期间妇女；对本研究放化疗药物过敏者；合并严重内科疾病者。患者签署了知情同意书。本院伦理委员会批准了本研究。

1.2 FOXM1和PCNA表达检测 取所有患者癌组织标本与癌旁组织标本，即刻置于液氮中-80 ℃保存。制成原位杂交标本，暴露特异性片段，0.1% Tritoon-100和0.1 mol/L PBS溶液孵育30 min，然后室温固定10 min。每张切片加入20 μl杂交液(FOXM1、PCNA杂交液)，42 ℃杂交过夜。使用DAB进行显色，苏木素复染细胞核，显微镜下观察。经Image Pro Plus 6.0软件分析，计数各视野总细胞数和阳性细胞数，计算标本的FOXM1和PCNA阳性标记指数。

1.3 放化疗方法 所有患者都采用相同的放化疗方案。放疗方案：使用瓦里安直线加速器，采用三维适形放疗技术。计划靶区给予剂量2 Gy/次，5次/周，共5周。完成后缩靶至计划肿瘤靶区，推量至60 Gy。化疗方案：放疗第1天为顺铂60 mg/m2，第1～4天为氟尿嘧啶500 mg/m2，4周后重复该化疗方案。

1.4 调查资料 调查所有患者的病理资料，包括性别、年龄、淋巴结转移、组织学分化、病灶最大直径、临床分期。同时随访到2020年12月1日，调查患者的生存与死亡情况。

1.5 统计学方法 采用SPSS 23.00统计学软件进行分析，计量资料用均数±标准差表示，行t检验或方差分析，相关性分析采用Pearson法，影响因素分析采用Logistic回归模型，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 食管癌组织与癌旁组织FOXM1和PCNA表达水平比较 见表1(图1)。食管癌组织FOXM1和PCNA表达水平高于癌旁组织(均P<0.05)。

表1 食管癌组织与癌旁组织FOXM1和PCNA表达水平比较

A：癌组织FOXM1；B：癌旁组织FOXM1；C：癌组织PCNA；D：癌旁组织PCNA

2.2 不同临床病理特征食管癌患者FOXM1和PCNA表达水平比较 见表2。在食管癌患者中，不同组织学分化、临床分期、淋巴结转移、病灶直径患者的FOXM1和PCNA表达水平对比差异均有统计学意义(均P<0.05)。

表2 不同临床病理特征食管癌患者FOXM1和PCNA表达水平比较

2.3 食管癌患者放化疗预后与FOXM1和PCNA表达水平相关性分析 所有患者经过放化疗疗治后，随访到2020年12月1日，86例患者死亡21例，病死率为24.4%。Pearson分析显示，食管癌患者放化疗预后与FOXM1和PCNA表达水平具有相关性(r=0.542、0.443，均P<0.05)。

2.4 食管癌患者放化疗预后影响因素分析 见表3。Logistic回归模型显示，FOXM1和PCNA表达水平均为影响食管癌患者放化疗预后的重要因素(均P<0.05)。

表3 食管癌患者放化疗预后影响因素分析

3 讨 论

我国是食管癌高发区，主要集中在太行山区，呈同心圆向外分布。该病的病因包括食物霉菌污染、微量营养素缺乏、遗传因素等，但具体的发病机制还不明确。为探讨FOXM1和PCNA在食管癌组织中的表达及与放化疗预后的相关性，本研究选取86例食管癌患者展开研究。目前食管癌主要的治疗手段为手术切除治疗、化疗、放疗等，但是预后依然比较差[11-13]。随着肿瘤分子生物学研究的不断深入，积极进行分子靶点分析已成为食管癌的研究热点。

本研究显示，食管癌组织FOXM1和PCNA表达水平都高于癌旁组织；不同组织学分化、临床分期、淋巴结转移、病灶直径食管癌患者的FOXM1和PCNA表达水平对比差异都有统计学意义。从机制上分析，FOXM1是FOX 转录因子家族成员之一，可参与调节细胞凋亡、代谢、增殖与分化，在恶性肿瘤细胞中呈现高表达。FOXM1能够促进血管生成，为肿瘤的增殖提供大量养分，从而促进肿瘤转移[14]。李佩琴等[15]发现，FOXM1在食管鳞癌中存在异常表达，经研究证实FOXM1与食管鳞癌细胞分化程度、临床分期、淋巴结转移以及预后有很大联系，能为食管鳞癌的诊治提供依据，与本研究结果基本一致。PCNA是一种相对分子量为3.6×104的酸性核蛋白，存在于细胞核内不同部位，其合成与表达与细胞增殖状态密切相关。PCNA也是细胞核内合成DNA所必需的一种核蛋白，是反映细胞增殖的主要生物指标之一，可参与调节DNA复制。现代研究[16-17]显示，PCNA在多种恶性肿瘤呈现高表达，可通过对多种基因的转录调控实现G2/M和G1/S转换，推动有丝分裂的进行，可通过调节上皮间质转化影响肿瘤细胞的迁移。

食管鳞癌主要从基底细胞过度增生、不典型增生进而发展为原位癌，进一步发展为浸润型食管鳞状细胞癌[18]。食管癌患者行根治性同期放化疗后容易出现各种不良反应，且没有从根本上提高患者的预后生存率。本研究中，所有患者经过放化疗治疗后，随访到2020年12月1日，86例患者中死亡21例，病死率为24.4%；Pearson分析显示，食管癌患者放化疗预后与FOXM1、PCNA表达水平具有相关性；Logistic回归模型显示，FOXM1、PCNA表达水平都为影响食管癌患者放化疗预后的重要因素。从机制上分析，FOXM1可通过转录激活多种信号通路，作用于食管上皮的相关基因，引起食管上皮细胞癌变[19]；PCNA可在食管上皮癌变不同阶段中起重要作用，其高表达可视为恶性肿瘤的危险预后因素[20]。

综上所述，FOXM1和PCNA在食管癌组织中呈现高表达，与患者的病理特征存在相关性，也是影响患者放化疗预后的重要影响因素。然而，本研究没有进行1年或者多年生存率分析，且纳入患者数量比较少，将在后续研究中加以完善。