右美托咪定调控急性痛风性关节炎模型大鼠血清炎性因子水平及滑膜功能效果研究

单兆亚，王 波

(1.陕西中医药大学附属医院麻醉科，陕西 咸阳 712000；2.宝鸡市中医医院麻醉科，陕西 宝鸡 721000)

急性痛风性关节炎是由于尿酸排泄障碍和嘌呤代谢紊乱，尿酸盐结晶在组织间沉积，导致人体血尿酸水平异常增高而形成的一种异质性疾病[1]。该病在临床上主要表现为慢性关节炎、高尿酸血症、痛风石沉积点，严重影响患者的身心健康。痛风具有一定的家族史，但是多数患者的病因未明。痛风发生的机制十分复杂，特别是多种细胞因子、炎性体和炎症细胞参与了该病的发生[2-3]。血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是痛风急性发作的重要致炎因子，可损坏滑膜细胞结构并使其崩解，能够引起组织细胞增生，激发机体内胶原酶的活性，触发炎症级联反应，最终导致痛风发生[4]。目前治疗痛风广泛使用的一类药物是非甾体抗炎药物，包括秋水仙碱、糖皮质激素类药物，虽然有一定效果，但是长期服用可能加速关节软骨病变，抑制软骨基质成分蛋白多糖合成，停药后病情易复发[5]。右美托咪定(Dexmedetomidine，DEX)为一种α2肾上腺受体激动剂，对α2肾上腺受体结合力非常强，可缓解机体痛觉过敏，下调脊髓切片和培养传入神经元中伤害刺激诱发的P 物质和降钙素基因相关肽的表达，从而抑制外周炎症因子的释放[6-7]。本研究探讨右美托咪定调控急性痛风性关节炎模型大鼠血清炎性因子水平及滑膜功能的效果，以明确右美托咪定的作用价值与机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料 成年雄性SD大鼠，平均体重(200±20)g，购于北京斯贝福生物技术有限公司。大鼠饲养在及时更换垫料、恒温、恒湿、通风良好的SPF级动物房中，供以充足的食物和水，每天接受12 h光照。本研究获得动物伦理委员会批准。右美托咪定(国药准字H20090248)、尿酸钠购于Sigma公司，酶联免疫检测试剂盒购于南京建成生物科技有限公司。

1.2 急性痛风性关节炎大鼠模型制备 采用改良Coderre法建立痛风模型，大鼠腹腔注射4%水合氯醛麻醉，取踝关节背侧为穿刺点，用无菌注射器至胫骨肌腱内侧向踝关节腔内注射100 μl 浓度为2.5 mg/100 ml微晶尿酸钠混悬液。造模成功标准：造模关节较健侧关节皮温升高，踝关节均出现不同程度红肿，行走缓慢，骨性标志消失，足爪卷曲，三足步态。

1.3 动物分组与处理 将造模成功的36只大鼠平分为模型组、秋水仙碱组与右美托咪定组，分别给予1 mg/kg 0.9%氯化钠溶液、1 mg/kg秋水仙碱与1 mg/kg盐酸右美托咪定灌胃，1次/d，连用14 d。

1.4 观察指标 ①在治疗第7、14天比较三组大鼠足跖容积。②在治疗第7、14天比较三组大鼠踝关节肿胀度。③在治疗第14天处死大鼠，分离右侧踝关节滑膜组织，固定后进行石蜡包埋及组织切片，DAB显色，苏木素复染，脱水封片后，于显微镜下观察三组大鼠滑膜组织病理形态变化。同时，取滑膜组织研磨后采用酶联免疫法检测UA和CRP含量并进行比较。④在治疗第14天处死大鼠，采集腹主动脉血液，每只2～3 ml血置于促凝管，静置2 h后以1000 r/min离心15 min，取上层血清采用酶联免疫法检测IL-1β和TNF-α含量并进行比较。

1.5 统计学方法 应用SPSS 20.00统计学软件进行分析，计量资料采用均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析，两两对比采用t检验，检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 三组大鼠不同时间点足跖容积比较 见表1。秋水仙碱组与右美托咪定组治疗第7、14天足跖容积低于模型组，且右美托咪定组低于秋水仙碱组(均P<0.05)。

表1 三组大鼠不同时间点足跖容积比较(ml)

2.2 三组大鼠不同时间点踝关节肿胀度比较 见表2。秋水仙碱组与右美托咪定组治疗第7、14天踝关节肿胀度低于模型组，且右美托咪定组低于秋水仙碱组(均P<0.05)。

表2 三组大鼠不同时间点踝关节肿胀度比较(%)

2.3 三组大鼠滑膜组织病理形态比较 见图1。模型组滑膜细胞增生，弥漫性炎症细胞浸润，毛细血管充血扩张，间质疏松水肿。秋水仙碱组滑膜组织间无明显炎症细胞渗出，水肿减轻，毛细血管无明显充血，结构基本完整。右美托咪定组滑膜组织间无明显炎症渗出，毛细血管充血不明显，组织水肿减轻，纤维组织排列趋于正常。

2.4 三组大鼠滑膜组织UA和CRP含量比较 见表3。治疗第14天，秋水仙碱组与右美托咪定组滑膜组织UA和CRP含量低于模型组，且右美托咪定组低于秋水仙碱组(均P<0.05)。

表3 三组大鼠滑膜组织UA和CRP含量比较

2.5 三组大鼠血清IL-1β和TNF-α含量比较 见表4。治疗第14天，秋水仙碱组与右美托咪定组血清IL-1β和TNF-α含量低于模型组，且右美托咪定组低于秋水仙碱组(均P<0.05)。

表4 三组大鼠血清IL-1β和TNF-α含量比较(pg/ml)

A：模型组 B：秋水仙碱组 C：右美托咪定组

3 讨 论

急性痛风性关节炎是一种慢性迁延性风湿病，高尿酸血症是该病发作的重要前提之一。该病男性多发于中年，女性多发病于绝经以后，主要首发于第1跖趾关节，起病急骤、咬噬样疼痛为典型临床症状，严重影响患者的生活质量和工作状态[8]。本研究参考Coderre的造模方法建立了痛风大鼠模型，各组出现病变关节尿酸盐沉积，光镜下可见关节腔内有大量炎性渗出物，局部红肿明显，滑膜表层水肿、充血，说明造模成功。

秋水仙素为急性痛风性关节炎的主要治疗药物，能够干扰细胞的有丝分裂过程，扰乱微管的形成过程，抑制纺锤体的形成，影响细胞的变形和移动能力，从而达到抗炎的目的[9-10]。本研究显示秋水仙碱组与右美托咪定组治疗第7、14天足跖容积和踝关节肿胀度低于模型组，且右美托咪定组低于秋水仙碱组。从机制上分析，右美托咪定属α2肾上腺素受体激动剂，可作用于脊髓灰质后角，阻碍伤害性传入纤维汇聚，致使突触后膜超极化，同时启动自然非动眼睡眠状态，从而发挥治疗急性痛风性关节炎的作用，降低足跖容积与踝关节肿胀度[11-12]。

急性痛风性关节炎机体伴随有嘌呤代谢紊乱与尿酸排泄障碍，特别是血尿酸持续升高，在一定程度上可析出尿酸盐结晶，激发巨噬细胞活性，沉积于关节组织，继而推动氧化应激反应的发生，促进白细胞大量释放并聚集，导致局部血管扩张和渗透性增加[13-14]。本研究显示秋水仙碱组与右美托咪定组治疗第14天滑膜组织UA和CRP含量均低于模型组，且右美托咪定组低于秋水仙碱组。从机制上分析，右美托咪定有显著的镇痛作用，可以降低单关节炎大鼠致炎侧脊髓背角核因子-κB(NF-κB)和p65蛋白的表达，抑制关节炎诱发的胶质细胞活化，改变胶质细胞代谢、形态以及功能，从而抑制UA和CRP的释放[15]。

急性痛风性关节炎是以关节滑膜炎和骨与软骨破坏为特征的全身性疾病，也是尿酸钠盐在关节及关节周围组织以结晶形式沉积引起的炎症反应[16-18]。在这一过程中，巨噬细胞、淋巴细胞等可分泌大量的IL-1β和TNF-α，激活血管内皮细胞表达内皮细胞选择素的表达，从而刺激中性粒细胞募集至晶体沉积部位，促进胶原酶和其他中性蛋白酶的产生，导致软骨吸收和骨破坏[19]。本研究显示秋水仙碱组与右美托咪定组治疗第14天血清IL-1β和TNF-α含量低于模型组，且右美托咪定组低于秋水仙碱组。从机制上分析，右美托咪定具有镇痛和抗炎作用，可促进软骨基质成分蛋白多糖的合成，消耗机体内的氧自由基，进一步缓解大鼠踝关节肿胀，从而抑制IL-1β和TNF-α的表达[20]。

综上所述，右美托咪定能够降低急性痛风性关节炎模型大鼠足跖容积与踝关节肿胀度，抑制UA和CRP的释放，也可抑制IL-1β和TNF-α的表达。