不同方法检测女性生殖道病原微生物感染的临床价值

刘长爱

（天津市东丽区东丽医院妇科，天津 300300）

女性生殖道病原微生物（pathogenic microorganism）感染是临床妇科较常见的疾病类型，具有复发率高、混合感染等特点，严重影响患者生活质量[1]。研究表明[2，3]，解脲支原体（UU）、沙眼衣原体（CT）、生殖支原体（MG）是非淋菌性尿道炎（NGU）最常见的病原体，其中UU 的感染率为11%～26%，CT 为11%～50%，MG 为6%～50%。UU 是泌尿生殖道的常见微生物之一，据报道[4]，我国人群中UU 的感染率日趋上升，由于反复感染以及抗生素滥用等原因，使之成为发病率较高的性传播疾病之一。UU 感染后，患者多无明显症状，也易造成漏诊。病原体分离培养法是其检测的“金标准”，然而分离培养操作复杂，所需时间较长，且敏感度易受标本采集方式等影响，因此对临床常规检测和流行病学筛查带来一定的困难；加之培养法取样采用拭子样本，该取样方式给病患带来一定的痛苦，且结果判定具有一定的主观性，易引起假阳性和假阴性[5]。随着分子生物学诊断技术的发展，核酸恒温扩增检测技术（SAT）、培养法、乳胶法作为新一代的检测技术已经广泛的应用于病原体检测、血液病毒筛查、环境微生物检测等领域，具有广阔的应用前景。基于此，本研究分别通过SAT、培养法、乳胶法对生殖道病原微生物感染女性进行检测，分析不同方法的临床应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019 年12 月-2020 年12 月天津市东丽区东丽医院收治的200 例疑似生殖道病原微生物感染女性作为研究组，纳入标准：临床症状均表现为分泌物增加、异味、外阴搔痒、灼痛、性交痛等，部分患者存在腰酸、小腹坠胀等症状。排除标准：合并认知障碍、严重脏器功能障碍、恶性肿瘤者。另选取200 名正常女性体检者作为对照组。研究组年龄18～55 岁，平均年龄（40.14±6.58）岁；对照组年龄18～56 岁，平均年龄（40.46±6.14）岁。两组年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本次研究经医院伦理委员会批准，研究对象均自愿参与研究并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 固体培养法 将采集的样本浸于液体培养基中，充洗脱分泌物后，再从液体培养基中吸取3 滴，每滴20 μl 的培养液，分别接种于固体A7 琼脂平板的3 个不同位置上，待培养液渗透干后，翻转A7 平板，接种面朝上，放置于35 ℃5%～10% CO2的孵箱中，经48～72 h 观察结果。

1.2.2 液体培养法 将采集的标本插入培养液中，挤压旋转3 次，将培养液置于37 ℃温箱中培养48 h后观察结果，若培养液变为红色并清亮透明即为阳性，不变色即为阴性。若培养液变红并伴有浑浊，则将培养液接种于10 mg/dl 血平皿中，按照临床检验操作规程对微生物进行分离培养和鉴定。

1.2.3 乳胶法 将采集的标本插入生理盐水中，挤压旋转3 次，即为待测样本。测试时，将待测样本滴入检测卡加样孔内，阳性标本在测试区（T）内会出现一条红色条带。阴性样本由于不含检测目的抗原，在测试区（T）内不能形成夹心复合物，故没有红色条带出现。

1.2.4 SAT 法 拭子标本取出后放入1 ml 生理盐水充分浸泡后贴壁挤干，取0.5 ml 与等体积的样本保存液混合，即为待测样本。使用MagX 全自动核酸提取仪进行实验。首先，病原体被裂解释放出核酸，与核酸提取液中的相应磁性颗粒特异度结合，利用磁珠吸附纯化UU、CT、NG 和MG 的靶标RNA。加入42 ℃预热的SAT 酶液，于PCR 仪上扩增40 个循环，荧光标记的优化探针与RNA 拷贝特异性结合，产生的荧光由仪器进行检测。结果判断：dt 表示样本曲线与阈值线交点的循环数，dt≤35 的标本判为阳性。

1.3 观察指标 ①比较两组UU、CT、淋病奈瑟菌（NG）和MG 的分布状况；②比较液体培养法和SAT法检测UU 阳性率以及SAT 敏感度、特异度；③比较乳胶法和SAT 法检测CT 阳性率以及SAT 敏感度、特异度。

1.4 统计学方法 通过SPSS 22.0 统计软件进行数据分析，计量资料以（）表示，采用t检验；计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组生殖道病原微生物感染阳性率比较 固体培养检测显示，研究组生殖道病原微生物阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组生殖道病原微生物感染阳性率比较[n（%）]

2.2 液体培养法与SAT 法检测UU 结果比较 SAT法检测UU 阳性59 例，阳性率为47.20%；液体培养法检测UU 阳性50 例，阳性率为40.00%；二者阳性率比较，差异无统计学意义（χ2=1.318，P=0.251）。以液体培养法为参考标准，SAT 敏感度为94.00%，特异度为84.00%，见表2。

表2 液体培养法与SAT 检测UU 结果比较（n）

2.3 乳胶法和SAT 检测CT 结果比较 乳胶法检测CT 阳性1 例，阳性率为3.70%；SAT 法检测CT 阳性2 例，阳性率为7.41%，差异无统计学意义（χ2=0.353，P=0.552）。以乳胶法为参考标准，SAT 敏感度为100.00%，特异度为96.15%，见表3。

表3 SAT 检测CT 敏感度与特异度（n）

3 讨论

目前检测女性生殖道病原微生物感染的方法以白带常规检测、生化检测等为主，方法单一，且难以准确反映出形态学、功能学等情况，临床医师无法对患者的阴道微生态进行评价，极易发生误诊、漏诊等现象[6]。因此，临床中需要采用多样化的检测方式，对阴道分泌物进行全面分析，使临床医师能够充分了解生殖道微生态情况，明确致病因素，从而为临床治疗提供参考。

UU 是生殖道中较常见的共生微生物，其感染可能引发一系列疾病，如非淋菌性尿道炎、宫颈炎、慢性前列腺炎、附睾炎以及不孕不育等[7]。CT 属于胞内寄生的微生物，感染后可引发盆腔炎、宫颈炎、宫内感染等多种疾病[8，9]。但研究发现[10，11]，约80%的CT 感染女性并未出现特异性临床症状，往往会造成误诊、漏诊，延误最佳的治疗时机，因此有效的实验室检测结果对临床诊断至关重要。NG 感染可能引发宫颈炎、尿道炎等疾病，且随着疾病的发展，还可能导致盆腔炎、输卵管炎等，甚至扩散至全身，导致炎症反应，后果严重[12，13]。MG 不仅会增加尿道炎、宫颈炎的发病风险，并且近60%的子宫内膜炎患者的宫颈黏液中能够检测出MG，说明MG 感染与子宫内膜炎和复发性盆腔炎密切相关。目前临床中对于MG 的检测仅能采用核酸扩增实验的方式，但该方法需要几个月的培养时间，且敏感度有限[14，15]。本研究结果显示，研究组生殖道病原微生物阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），且UU 是女性生殖道检出率最高的微生物，提示UU 和女性生殖道病原微生物感染存在着密切的关系。值得注意的是，本研究中CT 或MG 阳性的患者中仅1 例为UU阴性，其余均为并发感染，提示不同病原体感染之间可能存在着一定的关联性。

随着分子诊断技术的发展，病原体检测方法需要满足准确、高效和灵敏等要求。RNA 检测技术因其特异、灵敏的优势已广泛用于生殖道病原体的检测。RNA 检测技术包括SAT 和转录介导扩增（TMA)，这两种检测方法的扩增原理完全相同[16]。由于病原体细胞中的RNA 存在多个拷贝，故RNA 检测技术相较于以DNA 有更高的准确度，更重要的是只有活的病原体中存在完整RNA 片段，故能排除治愈后已死亡病原体对检测结果的影响[17]。RNA 具有易降解、不稳定的特性，使得该法交叉污染可能性更小，可以有效减少假阳性的产生，大大提高了检测结果的可靠性，有助于临床诊断的准确度和对疗效的监测。此外，RNA 检测结果还可以用于临床疗效监测，符合精准医疗的要求，是目前生殖道病原体检测的首选方法[14]。本研究中SAT 法和液体培养法检测UU 结果比较，差异无统计学意义（P＞0.05），但SAT法阳性率更高，敏感度更强。SAT 法与乳胶法检测CT 结果比较，差异无统计学意义（P＞0.05），但前者阳性率以及敏感度更高。基于SAT 法可以以尿液检测的优势，兼具检测时间短、假阳性率低等优势，尤其当受检者正处于感染初期，病原体数量较少，DNA含量少，而RNA 较多，SAT 法对该类患者的检测具有独特的优势，故该技术更适合作为体检检测方法进行人群筛选。然而由于SAT 法敏感度强，容易被环境中的病原体或异物污染，故对实验室条件的要求更多，成本更高。此外，培养法可直接进行药敏试验，有助于指导临床用药，该法更适合作为筛选后的确诊方法。

综上所述，女性生殖道病原微生物感染中以UU 最为常见，其次分别为CT、MG。目前临床中常用的SAT 法、液体培养法、乳胶法在检测方面均有一定的应用价值，其中SAT 法对病原微生物感染的检出率更高，可作为临床首选的检测方案之一。