血管紧张素原基因多态性与高尿酸血症易感性的关系分析

梁灼源 韦锋 欧阳楚君 冯明亮 郭静静 卢瑞荣

[摘要]目的探討血管紧张素原（AGT）基因 M235T 位点多态性与高尿酸血症（HUA）易感性的关系。方法以2018年5月至2020年4月江门市中心医院风湿免疫科312例 HUA 患者为高尿酸血症组，并以同期286例原发性痛风患者为痛风组，357例正常人群为正常组。比较三组的 AGT 基因 M235T 位点多态性，分析 AGT 基因 M235T 位点多态性与 HUA、痛风发生的关系;根据 HUA 治疗效果将高尿酸血症组分为有效组及无效组，比较两组的AGT基因 M235T位点多态性，分析AGT基因 M235T位点多态性与 HUA 治疗效果的关系。结果高尿酸血症组、痛风组和正常组的 MM、MT、TT 实际频数与理论频数比较，差异均无统计学意义（P >0.05）;高尿酸血症组、痛风组的 AGT 基因 M235T 位点 MT、TT 检出率高于正常组（ P <0.05）;二元 logistic 回归分析显示，AGT 基因 M235T 位点 MT、TT 型是 HUA 及痛风发生的危险因素， MM 型为保护因素（ P <0.05）。有效组的 AGT 基因 M235T 位点 MM 型检出率高于无效组（ P <0.05）;二元 logistic 回归分析显示， AGT 基因 M235T 位点多态性不是影响 HUA 治疗效果的相关因素（ P >0.05）。结论 AGT 基因 M235T 位点多态性是影响 HUA 及痛风发生的危险因素，但与 HUA 治疗效果无关。

[关键词]血管紧张素原基因;基因多态性;高尿酸血症;痛风;易感性

[中图分类号] R692.9;R589.7  [文献标识码] A   [文章编号]2095-0616（2021）23-0195-04

Analysis  of the relationship between angiotensinogen gene polymorphism and susceptibility of hyperuricemiaLIANG  Zhuoyuan    WEI  Feng    OUYANG  Chujun    FENG  Mingliang    GUO  JingjingLU  Ruirong

Department of Rheumatology and Immunology， Jiangmen Central Hospital， Guangdong， Jiangmen 529000， China

[Abstract] Objective To explore the relationship between the M235T polymorphism of the angiotensinogen （AGT） gene and the susceptibility of hyperuricemia （HUA）. Methods A total of 312 HUA patients admitted to the Department of Rheumatology and Immunology of Jiangmen Central Hospital from May 2018 to April 2020 were selected as the hyperuricemia group， and 286 patients with primary gout in the same period were selected as the gout group， and 357 normal people were regarded as the normal group. The M235T polymorphism of the AGT gene was compared among the three groups， and the relationship between the M235T polymorphism of the AGT gene and the occurrence of HUA and gout was analyzed. According to the HUA treatment effect， the hyperuricemia group was divided into the effective group and the ineffective group， the M235T polymorphism of the AGT gene was compared between the two groups， and the relationship between the M235T polymorphism of the AGT gene and HUA treatment effect was analyzed. Results There were no statistically significant differences between the actual frequency and theoretical frequency of MM， MT and TT genotypes among the hyperuricemia group， the gout group and the normal group （P >0.05）. The detection rates of MT and TT genotypes of AGT M235T in the hyperuricemia group and gout group were higher than those in the normal group （P <0.05）. Binary logistic regression analysis showed that MT and TT genotypes of AGT M235T were risk factors for the occurrence of HUA and gout， and MM genotype was a protective factor （P <0.05）. The detection rate of the MM genotype of AGT M235T in the effective group was higher than that in the ineffective group （P <0.05）. Binary logistic regression analysis showed that the M235T polymorphism of the AGT gene was not a related factor affecting HUA treatment effect （P >0.05）. Conclusion The M235T polymorphism of the AGT gene is a risk factor affecting the occurrence of HUA and gout， but it did not affect the effect of HUA treatment.

[Key words] Angiotensinogen gene; Gene polymorphism; Hyperuricemia; Gout; Susceptibility

高尿酸血症（HUA）是嘌呤代谢紊乱所致疾病，多因肾脏及肠道排泄障碍或尿酸生成过多所致，患者会出现痛风性急性关节炎、痛风石沉积等症状，严重影响其日常生活[1]。既往研究指出， HUA 发生除了与患者日常饮食、高血压、机体代谢紊乱等有关外，还与遗传易感性相关[2]。血管紧张素原（AGT）基因可通过调控血管紧张素Ⅰ、Ⅱ合成，以影响肾素-血管紧张素系统的激活，进而导致肾脏功能异常[3]。笔者认为，AGT 基因多态性或可通过影响肾脏功能来抑制血尿酸的排泄，但目前有关其与 HUA 易感性的研究尚处于探索阶段。故本研究旨在探究 AGT 基因 M235T 位点多态性与 HUA 易感性的关系，为该疾病的防治提供参考。

1资料与方法

1.1一般资料

以2018年5月至2020年4月江门市中心医院的312例 HUA 患者为高尿酸血症组，HUA 的诊断标准参照《中国高尿酸血症相关疾病诊疗多学科专家共识》[4]，血尿酸≥420 Ummol/L。并以同期286例原发性痛风患者为痛风组，痛风的诊断标准参照《中国高尿酸血症相关疾病诊疗多学科专家共识》，357例正常人群为正常组。高尿酸血症组中，男183例，女129例;年龄29～57岁，平均（45.68±6.32）岁;体重指数18.9～26.1 kg/m2，平均（22.25±1.38）kg/m2;合并基础疾病：高血压105例、糖尿病80例、冠心病65例、两种及以上62例;吸烟史75例。痛风组中，男171例，女115例;年龄34～60岁，平均（46.05±7.17）岁;体重指数17.6～26.8 kg/m2，平均（22.09±1.52）kg/m2;合并基础疾病：高血压91例、糖尿病72例、冠心病58例、两种及以上65例;吸烟史63例。正常组中男195例，女162例;年龄31～59例，平均（45.19±6.13）岁;体重指数18.2～27.2 kg/m2，平均（22.60±1.68）kg/m2;吸烟史86例。三组一般资料比较，差异无统计学意义（ P >0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2纳入及排除标准

纳入标准：①经实验室检查确诊，符合相关疾病诊断标准;②患者均知晓本研究目的，且已签署入组同意书。

排除标准：①恶性肿瘤者;②肿瘤、肾脏疾病等导致的继发性痛风者;③入组前3个月内有服用过使血尿酸升高药物者;④严重全身系统性疾病患者;⑤存在苯溴马隆治疗禁忌证者;⑥合并严重肾功能不全及肾结石者;⑦合并糖尿病患者;⑧合并高脂血症患者。

1.3方法

1.3.1 AGT 基因多态性检测（1）DNA 提取：采集所有受试者外周静脉血标本5 ml，EDTA 抗凝处理，应用 DNA 抽提试剂盒（天根生物科技有限公司），按照使用说明书，提取患者 DNA，并检测 DNA 浓度及提取质量。（2）多态性分析：Easy Taq PCR supermix（北京全式金生物技术有限公司，批号：20180311），应用TProfessoinal Gradient 96 PCR 仪（德国 BIOMETRA 公司）对 AGT 基因第二个外显子目的片段采用 PCR-RELP 法扩增，基因引物序列[生工生物（上海）有限公司合成]：上游引物5'-GATGCGCACAAGGTCCTGTG-3';下游引物5'-CAGGGTGCTGTCCACACTGGACCC-3'。其扩增产物采用限制性内切酶TthⅢⅠ在65℃下进行酶切4 h，使用2%琼脂糖凝胶（西班牙Biowest公司，批号：20180534），应用 ECP3000三恒多用电泳仪（北京市六一仪器厂）、AlphaImager凝胶成像仪（美国 Alpha Innotech公司）对酶切产物进行电泳分离，并通过 BIO-RAD 公司的紫外分光光度仪进行观察。基因型包括：①纯合型（MM）：酶切位点在 AGT 等位基因上，产物163 bp;②纯合型（TT）：第二个外显子的核苷酸由 T 变为 C，产物140 bp;③杂合型（MT）：产物163 bp 和140 bp 均存在。

1.3.2臨床疗效分组根据《高尿酸血症和痛风治疗的中国专家共识》[5]对 HUA 患者给予苯溴马隆（昆山龙灯瑞迪制药有限公司，国药准字 J20180056）治疗，初始剂量为50 mg/d，餐后服用，用药1周后增加药量至75～100 mg/d，连续治疗20 d。并限制高嘌呤食物摄入，严格控制饮食总热量，饮水量>2000 ml/d，禁忌饮酒，以促进尿酸排泄。根据治疗后血尿酸浓度将高尿酸血症组分为有效组（≤300 Ummol/L）及无效组（>300 Ummol/L）。

1.4观察指标

①比较高尿酸血症组、痛风组、正常组的 AGT 基因 M235T 位点多态性，分析 AGT 基因 M235T 位点多态性与 HUA、痛风发生的关系。②比较有效组及无效组的 AGT 基因 M235T 位点多态性，分析 AGT 基因 M235T 位点多态性与 HUA 治疗效果的关系。

1.5统计学处理

应用 SPSS 17.0统计学软件处理本研究所得数据，计数资料以[n （%）]表示，采用χ2检验，计量资料经正态检验后以（x ±s）表示，采用独立样本t 检验;采用二元 logistic 回归分析 AGT 基因 M235T 位点多态性与 HUA、痛风发生及 HUA 治疗效果的关联。 P <0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡吻合度检验

高尿酸血症组、痛风组和正常组的 MM、MT、 TT 实际频数与理论频数比较，差异均无统计学意义（ P >0.05），提示三组 AGT 基因 M235T 位点基因型分布符合 Hardy-Weinberg 平衡。见表1。

2.2 AGT基因M235T位点多态性与HUA、痛风发生的单因素分析

高尿酸血症组、痛风组的 AGT 基因 M235T 位点 MT、TT检出率均高于正常组（ P <0.05）。见表2。

2.3 AGT基因M235T位点多态性与HUA、痛风发生的二元logistic回归分析

AGT 基因 M235T 位点 MM 型是 HUA 及痛风发生的保护因素，MT、TT 型为危险因素（P <0.05）。见表3。

2.4 AGT基因M235T位点多态性与HUA治疗效果的单因素分析

有效组的 AGT 基因 M235T 位点 MM 检出率高于无效组（ P <0.05）。见表4。

2.5 AGT基因M235T位点多态性与HUA治疗效果的二元logistic回归分析

AGT 基因 M235T 位点多态性不是影响 HUA 治疗效果的相关因素（ P >0.05）。见表5。

3讨论

痛风患者多表现为关节剧烈疼痛、痛风石等症状，多因大量尿酸盐结晶沉积于关节所致。原发性痛风是指由于单钠尿酸盐在关节及周围结缔组织沉积，诱导的晶体性关节炎[6]。相关研究指出，除了后天因素外，遗传因素也是导致痛风及 HUA 发生的重要原因[7]。HUA 可破坏血小板及其他体细胞，损伤血管内皮功能，增加心血管疾病发生风险[8]，提示 HUA 的发生或与血管相关因子有关。AGT 基因位于染色体1q42～1q43，其 M235T 位点多态性是指密码子的第235位由苏氨酸转换为蛋氨酸，该转换可能会影响 AGT 的表达[9]。AGT 是血管紧张素的前提物质，在肾素的作用下可生成血管紧张素Ⅰ，再经血管紧张素转换酶分解为血管紧张素Ⅱ，影响心血管活动和凝血系统功能，进而提高心血管疾病的易感性[10]。本研究发现，高尿酸血症组、痛风组的 AGT 基因 M235T 位点 MT、TT 检出率高于正常组，说明 HUA 及痛风患者均存在 AGT 基因 M235T 位点多态性的现象。提示 HUA 及痛风的发生或与 AGT 基因 M235T 位点基因型相关。因此，本研究经进一步分析发现，AGT 基因 M235T 位点 MT、TT 型是 HUA 及痛风发生的危险因素，MM 型为保护因素，说明 HUA 及痛风的发生与 AGT 基因 M235T 位点多态性有关。这可能是因为 AGT 基因 M235T 位点多态性会减少机体血液中血管紧张素酶原、血管紧张素酶水平，影响患者全身小血管及肾脏功能，进而导致血尿酸水平升高[11]。

HUA 病情持续可引起尿酸盐晶沉积在体关节及周围软组织，是诱发痛风的生化基础。且 HUA 会影响肾脏功能，引发慢性肾病[12-13]。故对 HUA 患者给予降尿酸治疗对于延缓疾病进展至关重要。目前，多采用排尿酸药物（苯溴马隆等）治疗 HUA，可降低机体血尿酸浓度，但不同患者的治疗效果不尽相同[14]。笔者认为可能与基因易感性有关。本研究结果显示，有效组的 AGT 基因 M235T 位点 MM 检出率高于无效组，说明有效组的 M235T 位点基因突变发生率较低。研究指出，血管紧张素不仅具有较强的血管活性，还能影响肾组织的血流动力学，而 AGT 基因 M235T 位点多态性可抑制血管紧张素生成而影响肾脏功能，可能影响 HUA 治疗效果[15]。但本研究二元 logistic 回归分析显示，AGT 基因 M235T 位点多态性与 HUA 治疗效果无关，这可能与有效组及无效组的人数比例失衡有关，故后期需进一步探究其与 HUA 治疗效果的关系。

综上所述，AGT 基因 M235T 位点多态性是影响 HUA 及痛风发生的危险因素，但与 HUA 治疗效果无关。

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（收稿日期：2021-05-07）