TNIP1基因多态性rs17728338及负性情绪与寻常型银屑病相关性研究

张 强,陈彩霞,崔梓榆,韩建文,张 琰,黄永清

（1.内蒙古医科大学学生工作部，内蒙古 呼和浩特 010059；2.内蒙古医科大学附属医院皮肤科；3.内蒙古医科大学附属医院康复科；4.内蒙古精神卫生中心）

银屑病是一种慢性炎症性复发性系统性疾病。近年来的多项研究表明，银屑病的发生、复发和焦虑、抑郁等负性情绪相关，尤其是寻常型银屑病[1，2]。许多报道称，银屑病的发生、复发和相关遗传因子有关。NF-κB（nuclear factor-κB）是一种重要的真核细胞转录因子，连接着活化的T细胞和银屑病相关分子的转录。目前已经有研究报道，TNIP1基因在调节NF-κB信号方面发挥重要作用[3~5]。本研究就负性情绪（焦虑、抑郁）和遗传因子（TNIP1基因多态性rs17728338）与寻常型银屑病的相关性进行探讨。

1 研究对象与方法

1.1 研究对象

经过临床和病理确诊的寻常型银屑病患者345例，年龄39～76岁，平均年龄（58.12±9.57）岁，男性183例，女性162例，正常对照组341例，男性181例，女性160例，年龄和患者想当，所选疾病均无系统性疾病。所有患者2周内没有使用过任何外用药物，2个月内未使用过维A酸、糖皮质激素等药物。

1.2 负性情绪评定

应用焦虑自评量表（SAS），抑郁自评量表（SDS）对345例寻常型银屑病患者和341例正常对照进行评定，标准总分≥50分即认定为患者具有负性情绪的症状。

1.3 主要试剂及设备

10%SDS（十二烷基磺酸钠），0.5M EDTA（pH8.0），10mg/mL蛋白酶K（Merk公司），红细胞裂解液，白细胞裂解液，琼脂糖凝胶加样缓冲液（6x），PCR仪Gene Amp PCR system 9600（Norwalk，CT.06859 USA），TU-1810型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）。

1.4 基因组DNA提取

采用盐析法进行人外周血基因组DNA提取。空腹抽取受试者静脉血3mL，置于K2EDTA抗凝真空采血管，提取基因组DNA，并检测纯度和浓度。

1.5 引物及探针的合成

设计引物和LDR探针，应用Primer3online（Version0.4.0，http://frodo.wi.mit.edu/）软 件 和Oligo（Version 6.31，Molecular Biology Insights Inc.，USA），PCR引物序列（见表1、2）。

表1 PCR引物序列

表2 LDR探针序列

1.6 多重PCR扩增

10mM Tris-HCl（pH7.4），2.0mM MgCl2，50mM KCl，0.5μM Primers，200mM dNTPs，1U polymerase。再加入2μL基因组DNA。

1.7 多重连接酶检测反应（LDR）

20mM Tris-HCl（pH 8.5），100mM KCl，5mM Mg-Cl2，0.2μM Probes，1mM NAD+，10mM DTT。加入2μL多重PCR的产物。

1.8 ABI3730测序仪检测

分析判读每个位点上，每个样本的基因分型。

1.9 统计学分析

所有计量数据采用均数±标准差表示，等位基因及基因型频率用卡方检验（χ2），基因型分布用拟合优度卡方检验，检验水准为α=0.05，所有检验用SPSS 13.0和PLINK1.07[6]处理。

2 结果

2.1 寻常型银屑病与对照组焦虑、抑郁的比较

寻常型银屑病组焦虑发生率（44.9%）明显高于对照组（7.3%），差异有显著性（P=0.000），而且在寻常型银屑病组的焦虑评分（SAS）分值（41.33±8.00）高于对照组（36.57±7.66），差异有显著性（P=0.000）。寻常型银屑病组抑郁的发生率（55.1%）明显高于对照组（11.7%），差异有显著性（P=0.000），寻常型银屑病组的抑郁自评（SDS）分值（45.21±9.06）高于正常对照组（29.08±10.36）（见表3、4）。

表3 寻常型银屑病与对照组焦虑、抑郁的比较

表4 寻常型银屑病组和对照组SAS、SDS评分的比较

2.2 寻常型银屑病组和对照组中TNIP1基因多态位点rs17728338：G>A基因型分布情况

TNIP1基因多态位点rs17728338在寻常型银屑病组和对照组之间的基因型分布差异有显著性（P<0.01），寻常型银屑病组A等位基因频率（15.22%）显著高于对照组（8.06%）（P=0.000）（见表5）。

表5 寻常型银屑病组和对照组中TNIP1基因多态位点rs17728338：G>A基因型分布情况

2.3 焦虑、抑郁、TNIP1基因交互作用和寻常型银屑病相关性

2.3.1TNIP1基因多态位点rs17728338基因型及等位基因频率在银屑病伴/不伴焦虑症状组患者的分布 基因型AG和A等位基因频率在寻常型银屑病伴焦虑组和不伴焦虑组差异有统计学意义（P<0.01）。基因型AG和A等位基因频率在寻常型银屑病伴焦虑组高于不伴焦虑组（见表6）。

表6 TNIP1基因多态位点rs17728338基因型及等位基因频率在银屑病伴/不伴焦虑症状组患者的分布

2.3.2TNIP1基因多态位点rs17728338基因型及等位基因频率在银屑病伴/不伴抑郁症状组患者的分布 基因型AG和A等位基因频率在寻常型银屑病伴抑郁组和不伴抑郁组差异有统计学意义（P<0.01）。基因型AG和A等位基因频率在寻常型银屑病伴抑郁组高于不伴抑郁组（见表7）。

表7 TNIP1基因多态位点rs17728338基因型及等位基因频率在银屑病伴/不伴抑郁症状组患者的分布

3 讨论

既往研究显示焦虑、抑郁等负性情绪参与多种慢性病的发生发展。本研究发现在寻常型银屑病患者中的负性情绪（焦虑、抑郁）的发生率，以及SAS和SDS评分显著高于健康对照组，与既往相关研究结果一致。可能是由于紧张、焦虑、抑郁等心理因素可促进P物质释放，从而剌激细胞增殖和角质形成，导致免疫系统异常，加重和诱发银屑病[7，8]。TNIP1基因多态性与寻常型银屑病的相关性在中国人群和欧洲人群均有报道[9~11]。本研究在进一步的基因分型实验中结果示TNIP1基因多态位点rs17728338在寻常型银屑病组和对照组之间的基因型分布差异有显著性，寻常型银屑病组A等位基因频率显著高于对照组，与Nair和Sun等人的研究结果一致[9~11]提示TNIP1基因多态性与寻常型银屑病具有相关性。在进一步的分层分析发现rs17728338的基因型AG和A等位基因频率和寻常型银屑病伴焦虑呈正相关，基因型AG和A等位基因频率和寻常型银屑病伴抑郁呈正相关，这和聂鑫等人的研究相一致[12]。总之，本研究通过流行病学、基因分型研究，发现寻常型银屑病患者中负性情绪（焦虑、抑郁）的发生率及评分均明显增高；TNIP1基因多态性rs17728338与焦虑、抑郁可能存在交互作用进而影响银屑病的易感性，但关于基因多态性如何与负性情绪相互影响，如何影响基因功能和免疫系统，仍有待于进一步研究。