高效液相色谱法测定绰森哈伦-8 散中栀子苷的含量

2021-09-18包冉张冬梅魏颖轩那松巴乙拉宝山

世界最新医学信息文摘 2021年65期

包冉，张冬梅，魏颖轩，那松巴乙拉，宝山

（1 包头市食品药品检验检测中心，内蒙古包头；2 内蒙古自治区国际蒙医医院，内蒙古呼和浩特）

0 引言

绰森哈伦-8 散由寒制红石膏、木香、紫草、栀子、齿叶草、天竺黄、甘草、人工牛黄八味药材组成[1,2]。临床功效清讧热，用于血热头痛，口渴目赤，中暑。栀子功能为泻火除烦、清热利湿。栀子是方中主要药味之一，栀子苷是栀子的主要指标性成分之一，参照《中国药典》2015 年版一部“栀子”项下含量测定方法，采用高效液相色谱法对本品中的栀子进行了含量测定方法研究[3-5]。

1 仪器与试药

仪器U3000 型高效液相色谱仪；隔膜真空泵(巩义市英峪仪器厂)；KQ-250DB 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Heal Force NW15UV 型超纯水系统；ADVENTURERTM 型电子天平（万分之一）；Ohaus Discovery 型电子天平（十万分之一）；FW400A 型多功能粉碎机（材茂科技有限公司）。

栀子苷对照品（批号：110749-201919），由中国食品药品检定研究院提供；供试品三批（批号：20190911、20190912、20190913），由内蒙古国际蒙医医院提供，自制样品一批（20190911）；甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

采用Alltima C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，以乙腈-水溶液(15 ∶85) 为流动相进行流动相条件摸索，流速1.0ml/min，柱温33℃，进样量10μl。栀子苷峰的理论塔板数均大于1500，与相邻杂质峰的分离度均大于1.5。

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液的配制

取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含73μg 的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理40min（功率250kW，频率40kHz），放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得[6,7]。

2.3 标准曲线的绘制

取栀子苷对照品约7.3mg，精密称定，置100ml 量瓶中，加纯甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀(栀子苷实际浓度为：0.0734mg/ml)，然后吸取上述溶液1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、12μl、15μl、20μl 分别进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对栀子苷的进样量进行回归分析，结果栀子苷在进样体积在1μl-20μl 范围内呈良好的线性关系。回归方程为，Y=1.35223X+0.07817，R2=0.99996。

2.4 重复性试验

取同一批号供试品（批号：20190911）6 份，各约0.5g，精密称定，按供试品溶液制备方法处理并测定栀子苷含量，6 份供试品栀子苷平均含量为4.2821mg/g，RSD 为1.4%，表明方法重复性良好。

2.5 稳定性考察

取同一份供试品（批号：20190911）溶液，分别于0h、2h、4h、5h、6h、7h、8h 进样测定，记录峰面积，不同时间测定的峰面积RSD 为1.52%，试验结果表明供试品溶液中栀子苷含量在8h 内基本稳定不变。

2.6 精密度实验

取同一份供试品（批号：20190911）0.5008g，按供试品溶液的制备方法操作，连续进样6 次，测定栀子苷峰面积积分值，测定供试品含量，RSD 为0.90%。

2.7 回收率实验

取供试品（批号：20190911）9 份，均约0.25g，精密称定，其中1、2、3 号各精密加入用甲醇配制的栀子苷对照品溶液(栀子苷浓度：0.1083mg/ml)5ml，4、5、6 号各精密加入上述对照品溶液10ml，7、8、9 号各精密加入上述对照品溶液15ml，分别按上述供试液制备方法和色谱条件测定每份含量，计算回收率，结果见表1。

表1 栀子苷加样回收试验结果

2.8 专属性实验

阴性对照试验：按上述对照品和供试品溶液的制备方法制备供试品溶液和对照品溶液。另取按处方比例并以相同工艺制备的缺栀子的阴性对照，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液[8]。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各10µl，分别注入液相色谱仪，测得结果为：阴性对照色谱中在与栀子苷对照品以及供试品色谱相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对栀子苷的测定无干扰。结果见图1、2、3。