基于高效液相色谱法的伊和·古日古木-13 丸蒙药制剂中栀子苷含量测定

宋超，段羚，赵艳霞，宝山，巴乙拉

（1 包头市食品药品检验检测中心，内蒙古 包头；2 内蒙古国际蒙医医院，内蒙古，呼和浩特）

0 引言

伊和·古日古木-13 丸为内蒙古国际蒙医医院提供[1]，由西红花、丁香、大托叶云实、麦冬、木香、诃子、川楝子、栀子、紫檀香、麝香、熊胆粉等13 味药材组成。主要用于清肝热、解毒、杀黏。主治肝肿大、肝衰、配制毒、肝硬化、肝中毒、肾损伤、尿闭、热性亚玛症[2]。本研究对本制剂的栀子中栀子苷进行了高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）含量测定方法研究[3]。对方法进行试验研究后显示，该测定方法具有很好的重现性，同时具有较强的专属性，且组方中的其他成分对于栀子苷的测定不会产生任何的干扰。本研究对具体的试验情况进行了详细的研究。

1 仪器与试药

1.1 主要仪器

日本岛津LC-2010AHT 高效液相色谱仪，LC-10ADVP 输液泵，SPD-10AVP 型检测器；色谱柱为Alltima C18柱(250mm×4.6 mm，5μm) 色谱柱。Precisa 92SM-202A 型电子分析天平。

1.2 试剂与试药

试剂：栀子苷对照品（批号：110749-201919），纯度97.1%，提供方为中国食品药品检定研究院；供试品三批（批号：20 200226；20 200305；20200308），由内蒙古国际蒙医医院提供，自制样品一批，由包头市食品药品检验检测中心自制；甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯[4]。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性实验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（15 ∶85)为流动相；检测波长为238nm。理论板数按栀子苷峰计算应不低于 3000[5]。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取适量的栀子苷对照品进行精密的称定，在其中加入一定量的甲醇，制取成每1ml 含有30µg 的溶液，所得溶液即为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约1g，精密称定后将其放置于有塞盖的锥形瓶中，并加入50ml 甲醇后称取重量进行超声处理，时间为40min，将其冷却处理后再次称取重量，将失去的重量以甲醇补足，将所得溶液摇匀后进行滤过处理，称取出10ml 滤液并将其放置于25ml 的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得[6]。

2.3 测定法

在精密吸取的条件下分别取出分别10μl 的对照品溶液及10μl 的供试品溶液，将液相色谱仪注入后进行测定，即可获得。

2.4 提取方法的选择及提取时间的考察

参考《中国药典》2015 年版一部[7]“栀子”项下，以甲醇作为提取溶剂进行超声处理，试验中考察了超声20min、30min、40min、60min 等不同提取时间对提取效率的影响。通过分析得出，超声处理40min 时得到含量最高的供试品中的栀子苷，因此将超声提取时间定为40min。

2.5 专属性

阴性对照试验：分别取供试品溶液和对照品溶液，另外取出相同工艺制备条件下的阴性对照（缺栀子），以供试品溶液的制备方法制取阴性对照溶液。在相同的色谱条件下分别吸取10μl 的对照品溶液、10μl 的阴性对照溶液和10μl 的供试品溶液，将其分别注入液相色谱仪，测得的结果显示在相应的保留时间下阴性对照色谱中没有出现色谱峰，这就提示组方中的其他成分不会干扰到栀子苷的测定。

2.6 线性关系考察

取测定项下的对照品溶液，摇匀(栀子苷实际浓度为29.92μg/ml)，然后吸 取上述溶液1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、12μl、15μl、20μl 分别进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对栀子苷的进样量进行回归分析，结果栀子苷在进样体积在1-20μl 范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y=0.5045X+0.0699，R2=0.9996。

2.7 稳定性试验

取同一份供试品（批号：20200226）溶液，分别于0h、3h、6h、9h、12h、24h 进样测定，从数据可见，栀子苷在24h内的峰面积积分值基本稳定不变RSD 为0.18%（n=6）。

2.8 精密度试验

取同一份供试品（批号：20200226），连续进样6 次，将栀子苷峰面积积分值进行测定。RSD 为0.43%(n=6)，表明精密度良好。

2.9 重复性试验

按测定项下的方法，对同一批样品（批号20200226)进行供试品溶液的制备，共制备6 份，将峰面积分值进行测定后计算出含量。平均含量为3.56mg/g，RSD 为0.34%。表明该方法重复性良好。

2.10 加样回收率试验

取已知栀子苷含量的样品（批号 20200226 含量3.43mg/g）9 份，对其进行精密的称取后放置在具有塞盖的锥形瓶中，并在其中的3 份中加入栀子苷对照品甲醇溶液，浓度为1.0052mg/ml，量为1ml，另外的3 份中加入对照品溶液2ml，按照测定方法进行制备，对每份的含量进行有效的测定，将回收率进行计算后得出，平均回收率为98.81%，RSD 为0.81%。

2.11 耐用性试验

换不同厂家、不同型号的色谱柱，取重复性试验中的1、2 两份供试品及对照品溶液，按测定项下方法操作并测定含量，结果见表1。

表1 不同色谱柱的耐用性试验

2.12 样品测定

三批样品中栀子苷的含量测定结果见表2。

表2 样品中栀子苷的含量测定结果

2.13 栀子药材的含量考察

取栀子药材粉末约0.1g，精密称定，按《中国药典》2015 年一部“栀子”项下的方法处理并测定，栀子药材中栀子苷的含量测定结果见表3。

表3 栀子药材中栀子苷的含量测定结果

3 样品含量限度的确定

3.1 样品含量限度的确定

从表中数据可见，对栀子原料中的栀子苷含量进行测定得出含量为41.60mg/g，进行折算后得出供试品中栀子苷含量为3.78mg/g。

3.2 栀子苷的转移率为91.53%。

《中国药典》2015 年版一部第173 页对栀子苷的含量设置了限度，因此供试品制定的含量限度为1.34mg/g。

暂定本品每1g 含栀子以栀子苷（C17H24O10)计，不得少于1.3mg[8]。