血清可溶性CD40配体水平与克罗恩病疾病活动度的相关性研究

庞雪芹 朱兰香 顾洁 陈彦君

克罗恩病(CD)是一种消化道慢性非特异性炎症性疾病，从口腔至肛门均可累及，但最常发生于末端回肠。CD的确切病因尚不明确，目前认为微生物损伤、遗传倾向、肠道屏障通透性改变、应激及机体免疫异常均参与了其疾病的发生过程[1]。CD40及其配体(CD40L)是机体细胞免疫应答、尤其是T淋巴细胞活化中重要的共刺激分子。有研究表明CD40-CD40L相互作用通过影响各种信号通路促进肠道炎症的发生，同时也产生机体细胞和体液免疫中的膜表面分子标记以及可溶性受体，且在炎症时表现的更为显著。临床中常通过检测红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、粪钙卫蛋白(FC)、克罗恩病活动指数(CDAI)来判断疾病的活动度，但其结果值受较多因素影响。本研究通过检测CD患者外周血中可溶性CD40L(sCD40L)水平探讨其与CD临床活动度的关系。

对象与方法

1.对象：2018年1月～2019年8月于我院就诊的CD患者79例，其中男63例，女16例，年龄15～54岁，平均年龄(32.35±9.35)岁。入组患者根据小肠镜及病理组织活检结果，结合临床资料，均符合CD诊断标准。克罗恩病简化内镜评分(SES-CD)标准见表1，根据SES-CD分数(各指标对应评分之和)将79例CD患者分为缓解期组(SES-CD≤3分，13例)和活动期组(SES-CD≥4分，66例)。本研究通过我院伦理委员会审批通过，所有患者均知情同意。

表1 SES-CD评分方法

2.方法

(1)临床资料收集：收集入组患者的一般资料，于入院第二天早晨空腹状态下采集外周静脉血3 ml，室温下静置凝固，以5 000 G离心5 min，取上清液无菌分装后置于-80 ℃冰箱备用，同时采集外周静脉血各3 ml送至本院临床检测中心检验CRP和ESR。嘱患者留取当日大便6～10 g置于大便收集容器中，送至本院临床检验中心检测FC。所有患者于住院期间完成调查问卷以便于计算CDAI评分。由两名内镜操作经验丰富(≥5年)的医生对患者行小肠镜检查，检查结束后行SES-CD评估。

(2)sCD40L定量检测：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者sCD40L，按说明书步骤进行操作，试剂盒购自Bender Medsysterm公司。应用酶标仪获取对应OD值，绘制标准曲线，得到对应sCD40L水平。

结 果

1.活动期组与缓解期组CD患者临床资料比较比较：两组CD患者的性别与年龄比较差异均无统计学意义(P>0.05)。活动期组CD患者CRP、ESR、FC、sCD40L、CDAI水平均明显高于缓解期组(P<0.01)。见表2。

表2 活动期组与缓解期组CD患者临床资料比较

2.CD患者sCD40L、CRP、ESR、FC、CDAI与SES-CD评分的相关性分析结果：Spearman相关分析结果显示，CD患者的sCD40L、CRP、ESR、FC、CDAI与SES-CD评分均呈正相关，且sCD40L相关系数最高(P<0.001)。见表3。

表3 CD患者sCD40L、CRP、ESR、FC、CDAI与SES-CD评分的相关性分析结果

3.sCD40L、CDAI、CRP、ESR、FC水平及联合检测对CD活动度敏感度与特异度的诊断价值分析：ROC曲线分析结果显示，sCD40L在截点值2.45 ng/ml时预测CD活动度的敏感度为62.1%，特异度为86.6%；联合检测sCD40L、CDAI、CRP、ESR、FC预测CD活动度的敏感度为90.2%，特异度为89.5%。见表4。

表4 血清sCD40L、CRP、ESR、FC、CDAI对CD活动度的预测价值分析结果

讨 论

CD40L也被称为CD154，是分子量为32～39 kDa的Ⅱ型跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子-α(TNF-α)家族的一员，CD40L与T淋巴细胞结合对B淋巴细胞的成熟、记忆、激活和增殖发挥重要作用[2-3]。CD40-CD40L的相互作用与诸多炎症反应发生发展密切相关，参与机体免疫调节及维持内环境稳态。在正常机体结肠黏膜组织中，CD40主要在部分固有层的单核细胞中表达，而在微血管的内皮细胞中表达较低。有文献报道，炎症性肠病患者结肠黏膜组织中表达CD40L的单核细胞较正常人群明显增高[4]。进一步研究结肠黏膜固有层发现，CD患者肠黏膜固有层中T淋巴细胞表达的CD40L较正常肠黏膜更高[5]。

目前常用SES-CD评价CD患者肠黏膜愈合情况，是CD活动度判断的金标准[6]，但由于内镜检查的有创性，导致患者依从性较差，而CD具有病情易反复发作的临床特点，因此对其疾病活动度的评估尤为重要。大多数临床医生采用CRP、ESR、FC、CDAI等指标来判断疾病活动度并指导治疗，在一定程度上减轻了患者的内镜检查负担[7-8]。但在临床工作中发现，由于CD患者免疫功能紊乱、营养状态欠佳、治疗中使用免疫抑制剂等因素，易诱发机会性感染[9]，感染发生时通过这些指标监测疾病本身的活动度给临床医生带来较大的挑战，因此检测指标的选择对疾病活动度特异性的判断显得尤为重要。

本研究选取接受小肠镜检查的CD患者作为研究对象，检测其外周血sCD40L水平并进行分析，结果显示，以2.45 ng/ml为截点值对疾病的活动度进行判断时，其敏感度与目前临床常用指标比较无优势，但其特异度不低于其他指标。联合检测结果显示，在临床常用指标基础上，联合sCD40L检测可明显提高判断CD活动的敏感度及特异度，因此建议在临床工作中可尝试通过联合检测sCD40L来提高对CD活动度判断的准确性，有利于对病情进行动态监测。有研究在CD患者的外周血中分离淋巴细胞和单核细胞，发现两者的CD40表达均明显上调[10]。还有学者发现,炎症性肠病患者的外周血血小板水平较正常人显著升高[11]，且在激活的血小板表面同样检测出CD40L的表达显著上调，这表明CD40-CD40L共刺激通路可能参与了CD局部组织和外周循环的免疫调节机制。但本研究的样本量有限，有待未来针对sCD40L开展更大样本的研究。

总之，sCD40L与CDAI、CRP、ESR、FC在CD疾病活动度的评估中均有一定价值。联合检测患者的外周血sCD40L可能成为对CD疾病活动度判断的有益尝试。