枳椇子泡腾颗粒的制备工艺优化研究
2021-09-15王梦男戴雅吉
何 丹, 王梦男, 戴雅吉
（1.安徽省药品审评查验中心，安徽 合肥 230051；2. 安徽中医药大学 药学院，安徽 合肥 230038；3. 安徽省第二人民医院 药学部，安徽 合肥 230041）
枳椇子为鼠李科植物枳椇Hovenia dulcisThunb的干燥成熟果实，别名拐枣、木蜜、树蜜等[1-3]。枳椇子始载于《唐本草》，在《本草纲目》《 雷公炮制论》《救荒本草》《医林纂要》等多部医药著作中均有收载，常用于治酒醉、烦热、口渴、呕吐、二便不利等症，泡酒服亦能舒筋络[4]。在我国，枳椇子资源丰富，应用广泛。据文献报道[5-7]，枳椇子主要含生物碱类、黄酮类、皂苷类、有机酸类、糖类等成分，能有效减轻酒精诱导的氧化性肝损伤，显著降低丙氨酸和天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶和甘油三酯的水平，起到解酒和保肝的作用，此外，它具有抗肿瘤、抗衰老、抗纤维化、抑制组胺释放、抑制中枢神经等多方面的作用[8-10]。
泡腾颗粒剂具有携带方便、崩解快速、服用方便、起效迅速等优点[11]。基于此，本试验对枳椇子泡腾颗粒的制备工艺进行了优化研究，以总黄酮成分中芦丁及泡腾颗粒的泡腾时间等为主要评价指标，采用正交设计考察了其提取工艺和泡腾颗粒的制备工艺，并对其工艺进行优化。通过对枳椇子泡腾颗粒剂制备的研究，为中药在解酒保肝领域的应用提供实践基础，亦为中药现代化研究提供新的思路和方法。
1 仪器与材料
1.1 实验仪器
DF–1型集热式磁力搅拌器（江苏金坛市金城国盛实验仪器厂）；SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；ZF-2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂）；KQ–200KDB型高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HH-4型数显恒温水浴锅（金坛晶玻实验仪器厂）；CP225D型十万分之一电子天平（德国赛多利斯集团）；GZX-9240型数显鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）。
1.2 材料
无水乙醇（分析纯，上海苏懿化学试剂有限公司）；芦丁（标准品，上海华蓝化学科技有限公司）；氢氧化钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；硝酸铝（分析纯，上海振欣试剂厂）；亚硝酸钠（分析纯，海澜化学工业有限公司）；药用淀粉（辽宁东源药业有限公司）；糊精（化学纯，青岛海洋化工有限公司）；柠檬酸（分析纯，上海中试化工总公司）；碳酸氢钠（分析纯，上海中试化工总公司）；聚乙二醇6000（化学纯，国药集团化学试剂有限公司）；木糖醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。
1.3 药材
枳椇子药材购自安徽亳州，经安徽中医药大学彭华胜教授鉴定为鼠李科植物枳椇Hovenia dulcisThunb的干燥成熟果实。
2 方法与结果
2.1 标准曲线的绘制
精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品33.2 mg，置于100 mL容量瓶中，用80%乙醇溶解并定容,配成浓度为0.332 mg/mL的对照品溶液，精密量取上述对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分别置于50 mL容量瓶中，加5% NaNO2溶液2.0 mL，摇匀，放置6 min，加10% Al（NO3）3溶液2.0 mL，摇匀，放置6 min，加入4% NaOH溶液20.0 mL，用80%乙醇稀释至刻度，混匀，放置15 min，待测。
在500 nm波长处，以相应试剂作空白，分别测吸光度。以吸光度（A）为纵坐标，浓度（C，mg/mL）为横坐标，绘制标准曲线[7]。A= 8.7 × 103C+ 3.8 ×103（ 0 ～ 0.032 mg/mL），R2= 0.994 4。
2.2 提取工艺的考察
2.2.1 回流法 精密称取枳椇子粉末10 g，置提取器中，以乙醇浓度（A）、提取温度（B）、提取时间（C）为因素，以浸膏收率与浸膏中总黄酮含量为指标，设计了正交试验[12-15]，结果见表1、表2。
表1 回流提取法正交试验因素水平表Tab. 1 Factors and levels of orthogonal design of reflux extraction
表2 回流提取法L9（34） 正交试验表Tab. 2 The results of orthogonal test in reflux extraction
由表2看出，影响提取工艺的主次因素为乙醇浓度、提取温度和提取时间，综合分析得出回流法提取最佳工艺为A2B3C1，即70%乙醇，90 ℃提取3次，每次0.5 h。表3与表4的方差分析表明，乙醇浓度对回流法提取工艺有明显影响。
表3 回流提取法中浸膏率方差分析表Tab. 3 Variance analysis of extraction rate
表4 回流提取法中黄酮含量方差分析表Tab. 4 Variance analysis of flavone content in reflux extraction
2.2.2 超声法 精密称取枳椇子粉末10 g，置于提取器中，以乙醇浓度（A）、提取温度（B）、提取时间（C）为因素，以浸膏收率与浸膏中总黄酮含量为指标，设计了正交试验，结果见表5、表6。
表5 超声提取法正交试验因素水平表Tab. 5 Factors and levels of orthogonal design of ultrasonic extraction
表6 超声提取法L9（34） 正交试验表Tab. 6 The results of orthogonal test in ultrasonic extraction
综合考察浸膏率和总黄酮含量2个指标，由正交试验结果可以看出，乙醇浓度对浸膏率影响最大，优水平为A2；温度对总黄酮含量影响最大，优水平为B3，即70%乙醇，90 ℃提取3次，每次15 min。表7与表8的方差分析表明，温度对超声法提取工艺有明显影响。
表7 超声提取法中浸膏率方差分析表Tab. 7 Variance analysis of extraction rate in ultrasonic extraction
表8 超声提取法中黄酮含量方差分析表Tab. 8 Variance analysis of flavone content in ultrasonic extraction
2.2.3 索氏提取法 精密称取枳椇子粉末10 g，置于提取器中，以乙醇浓度（A）、提取温度（B）、提取时间（C）为因素，以浸膏收率与浸膏中总黄酮含量为指标，设计了正交试验，结果见表9、表10。
表9 索氏提取法正交试验因素水平表Tab. 9 Factors and levels of orthogonal design of soxhlet extraction
由表10可以看出，在索氏提取法中，实验1、2、3、4、5、7、9不能提取出相关物质，仅有实验6、8可正常提取。
表10 索氏提取法L9（34）正交试验表表Tab. 10 The results of orthogonal test in soxhlet extraction
2.3 制粒工艺考察
将聚乙二醇加热熔融后, 加入碳酸氢钠搅拌（聚乙二醇6000与碳酸氢钠的比例为0.5∶1），冷却后，粉碎成细粉（过60目筛）。取淀粉3 g、糊精2 g、木糖醇3 g，加入药物浸膏1.6 g，以柠檬酸含量（E）、碳酸氢钠含量（F）、是否包裹为因素（G），每个因素选取3水平，见表11，以pH值与泡腾时间为指标，按L9（34）正交试验表进行制粒，50 ℃以下干燥，结果见表12。
表11 制粒正交试验因素水平表Tab. 11 Factors and levels of orthogonal design of pellet
通过表12正交试验结果，再结合实际进行综合分析，确定影响制粒工艺的主要因素为是否包裹，其次是碳酸氢钠含量和柠檬酸含量，明确制粒最佳工艺为E1F1G1，即用10%柠檬酸、10%碳酸氢钠进行包裹。
表12 制粒正交试验结果及分析表Tab. 12 The results of orthogonal test in pellet
3 讨论
结合文献[11]及前期实验结果，在回流法、超声波提取法及索氏提取法中，索氏提取法相比较前两种方法所需反应条件较高，在所设定的实验条件下无法完成相应的提取，必须提高乙醇浓度或提高相应温度才能完成相应提取，而提高乙醇浓度会增加相应生产成本，提高提取温度可能会破坏提取物，故在实际生产中，为降低生产成本，尽可能保证提取物不被破坏，可将索氏提取法排除。进一步的试验结果表明乙醇回流法的提取效果明显优于超声波提取法与索氏提取法，最终确定枳椇子的提取工艺为70%乙醇，90 ℃提取3次，每次0.5 h。以最佳工艺提取后，测得的浸膏收率与总黄酮含量均优于正交试验中的任何一组，说明该工艺稳定可行。
另外，传统的方法不能有效地将酸源和碱源进行隔离，因此存在泡腾颗粒引湿失效的问题。本试验采用聚乙二醇6000包裹碳酸氢钠，有效地隔离了酸源与碱源，有利于制剂的稳定，使泡腾剂能发挥最佳效果。在泡腾颗粒制备正交试验中也证明包裹对pH值和泡腾时间影响最大。因此制粒最佳工艺为10%柠檬酸、10%碳酸氢钠，采用5%聚乙二醇包裹碳酸氢钠。
4 结论
枳椇子作为我国传统中药，具有疗效确切、应用广泛的特点。枳椇子泡腾颗粒剂携带方便、易保存、质量可控，优于其传统的复方制剂。因此在优化枳椇子提取工艺的基础上，本试验对枳椇子泡腾颗粒的制备工艺加以研究，具有一定的创新性和实用性，同时也为枳椇子在制剂方面研究与探索提供参考。在现有工艺基础上，下一步将在枳椇子提取与制备泡腾颗粒的试验过程中采用响应面法分析进行提取工艺考察，制备口感更好的泡腾颗粒。
