不同产地的猴头菇提取物中腺苷含量测定

2021-09-15李美珍陈炎欢冯华业黄绮敏黄照荣

现代食品 2021年16期

◎ 李美珍，陈炎欢，冯华业，黄绮敏，黄照荣

（无限极（中国）有限公司，广东江门 529100）

猴头菇提取物是以猴头菇为原料，经提取、过滤、浓缩、干燥等工序制成的提取物[1-3]。猴头菇提取物具有抗氧化、保护胃黏膜等作用[4-10]。猴头菇提取物目前在国内外均未有相关的质量标准。本研究建立不同产地猴头菇提取物的腺苷含量测定方法，并测定了不同产地的猴头菇提取物中腺苷的含量，为初步评价猴头菇提取物的质量提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

HP1200型高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器，美国Agilent公司。腺苷标准品（CAS号58-61-7，批号110879-201703），中国食品药品检定研究院，含量以99.9%计；甲醇为色谱纯，德国Merck公司；其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

猴头菇提取物由适量猴头菇药材加8倍量水煎煮3次，合并滤液，70 ℃减压浓缩，经喷雾干燥而得。10批猴头菇提取物来源于3个厂家，编号1～10。

1.2 方法

1.2.1 腺苷的含量测定

（1）对照品溶液制备。精密称取腺苷对照品约2 mg于100 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，即得。

（2）供试品溶液制备。精密称取本品约2.0 g于50 mL小烧杯中，加水40 mL，加热使溶解，取出，放至室温，转移至50 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，用0.45 μm的针式过滤器过滤，取续滤液，即得。

1.2.2 色谱条件

（1）色谱柱。十八烷基键合硅胶柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：以甲醇为流动相A，以水为流动相B。

（2）采用梯度洗脱。0～5 min流动相A由1%上升到3%，流动相B由99%下降到97%；5～10 min流动相A由3%上升到31%，流动相B由97%下降到69%，10～15 min流动相A由31%上升到35%，流动相B由69%下降到65%。波长260 nm；柱温30 ℃；流速1.0 mL·min-1；进样量5 μL；理论塔板数按腺苷峰计算应不低于5 000。

1.2.3 方法学考察

（1）线性关系考察。精密称取腺苷对照品2.220 mg置50 mL容量瓶中，按1.2.1项下制备方法加50%甲醇溶解制成储备液，再精密吸取该储备液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL及10.0 mL分别至10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀，按1.2.2项下色谱条件分析，测定峰面积。

（2）精密度试验。精密称取1.2.1项下制备的腺苷对照品溶液，重复进样6次，分别计算峰面积及保留时间的RSD值。

（3）稳定性试验。精密称取猴头菇提取物按1.2.1项下制备供试品溶液，按色谱条件分别于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h及24 h测定。

（4）重复性试验。精密称取猴头菇提取物同一天内按1.2.1项下制备的6份供试品溶液，按色谱条件测定。

（5）回收率试验。精密称取猴头菇提取物约1.0 g于9个50 mL小烧杯中，另取腺苷对照品4.882 mg置10 0mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，分别吸取该对照品溶液2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL，分三组加入含样品的9个50 mL小烧杯中，按1.2.1项下制成供回收率测定用供试品溶液，按色谱条件测定，计算腺苷的回收率。

（6）样品含量测定。精密吸取对照品溶液和供试品溶各5 μL，注入液相色谱仪，测定。根据所得对照品溶液和供试品溶液色谱图中腺苷峰面积计算供试品中待测组分腺苷含量。