应用QuEChERS结合UPLC－Q－Orbitrap HRMS法测定小麦粉真菌毒素方法研究

向俊 陈同强

真菌毒素是由真菌产生的小分子次级代谢产物，不易被破坏，即使对食物进行烹调、加热或加工等也很难根除。过度服用真菌毒素会诱发机体的癌变、畸形和突变，导致机体的免疫抑制、生殖紊乱和器官损伤，对人类以及动物的生命安全及生活健康造成严重威胁。

当前主要采用酶联免疫吸附法、毛细管电泳法等开展真菌毒素的检测工作，这些检测方法成本低廉、操作方便、易于推广，但灵敏度差、假阳性率高，并且检测对象单一，只能针对一种或一类真菌毒素进行检测，无法满足真菌毒素在痕量水平下的高通量检测需求。UPLC-Q-Orbitrap HRMS法是超高效液相色谱-四级杆/静电轨道离子阱质谱法的简称，这种检测方法是质谱联用技术的分支，通过结合四级杆所具有的高选择性，以及离子阱所具有的高灵敏度和高分辨率，可以让目标物的检测结果更加准确，有效拓宽檢测对象，适用于真菌毒素的高通量筛查。

本实验以QuEChERS结合UPLC-Q-Orbitrap HRMS法对小麦粉的5种真菌毒素进行测定，结果显示，其线性范围是0.25μg/L-100μg/L，定量限范围是0.30μg/kg-3.00μg/kg，在低添加水平、中添加水平和高添加水平下的平均回收率是70.2%-112.0%，相对标准偏差是0.2%-4.5%。以上数据表明，QuEChERS结合UPLC-Q-Orbitrap HRMS法适合作为小麦粉真菌毒素检测中高通量筛查和确认检测的方法。

一、实验材料和设备

1.试剂。黄曲霉毒素B1（下文简称AFB1）、黄曲霉毒素B2（下文简称AFB2）、黄曲霉毒素G1（下文简称AFG1）、黄曲霉毒素G2（下文简称AFG2）、黄曲霉毒素M1（下文简称AFM1）等5种真菌毒素标准品的标准溶液，甲醇、乙腈、甲酸、乙酸等为色谱纯。

2.设备。QuEChERS提取盐包，dSPE净化管，GHP针式过滤器等;超高效液相色谱仪，电子天平，移液器，多功能旋涡混合器，数控超声波清洗器，离心机，智能氮吹仪。

二、实验方法

1.色谱条件。色谱柱选择100mm×2.1mm，规格1.8μm，进样量5.0μL，柱温35℃，A相与B相分别选择乙酸铵溶液和甲醇，梯度洗脱条件如表1所示。

2.质谱条件。采用正离子模式进行扫描，采用数据依赖性二级扫描采集，鞘气流量和辅助气流量分别为40arb和10arb，喷雾电压3.8kv，离子源温度350℃，毛细管温度320℃。5种真菌毒素的质谱信息如表2所示。

3.样品处理。（1）选择50mL聚四氟乙烯离心管，称取2.0g试样置于离心管中，加入水5.0mL，用涡旋方式让样品得到充分浸润;加入2.0%的甲酸乙腈溶液10mL，涡旋振荡2min，超声10min;加入QuEChERS提取盐包，继续振摇1min;在10000r/min条件下，离心5min。（2）取8.0mL上清液转移到dSPE净化管内，dSPE净化管中事先加入复合吸附剂，涡旋1min;在10000r/min条件下，离心5min。（3）取5.0mL上清液转移到氮吹管内，在40℃水浴下吹干氮气后加入内标溶液，取80%甲醇水溶液，定容1.0mL，涡旋振荡时间1min，过0.22μm滤膜，用高效液相色谱-串联高分辨质谱仪进行测定工作。（4）测定完成后，使用SPSS统计软件统计测定结果，统计完成后用Origin软件绘图。

三、测定结果

分别以所选择真菌毒素标准品的峰面积和相应的质量浓度为纵坐标和横坐标，用线性回归作为计算方式，得到线性方程和相关系数后确定线性范围、检出限与定量限，结果如表3所示。

根据5种真菌毒素在小麦粉基质中的定量限，设计低浓度水平、中浓度水平和高浓度水平三个加标实验，计算加标回收率和相对标准偏差，结果如表4所示。

四、结论

QuEChERS结合UPLC-Q-Orbitrap HRMS法测定小麦粉中的5种真菌毒素解决了基质干扰问题，使测定结果的定性和定量准确性都得到了显著提升。因此，本测定方法可以适用于小麦粉中真菌毒素的快速筛查及定量测定，进一步提高食品安全的保障程度。（基金项目：食品安全快速检测与溯源关键技术研究与示范，编号：2020SK2128。）

作者简介：向俊（1984-），女，土族，湖南湘西，硕士，高级工程师，研究方向为食品检测。