妊娠期高血压疾病血白细胞水平与胎盘FaS基因表达的相关性研究

杨微微，梅丽娜，王家建，陆艳

有研究表明妊娠期高血压疾病（HDCP）患者胎盘中Fas的表达显著高于正常孕妇[1-2]。外周血白细胞计数水平升高与高血压患病和发生风险有关，慢性炎症参与高血压的发生和发展[3]，但关于各类外周血白细胞计数对HDCP疾病影响的研究较少，关于外周血白细胞计数和Fas基因相关性的研究更少。本研究拟通过检测白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞计数及胎盘组织中Fas 基因miRNA的表达量情况，进一步探讨各类外周血白细胞计数水平和Fas 基因表达对HDCP的影响及相关性，旨在为HDCP的防治提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2017 年1—6 月浙江省湖州市妇幼保健院收治的妊娠期高血压（HDP）患者和重度子痫前期患者各30例，分别纳入HDP 组和重度子痫前期组，HDP及重度子痫前期诊断标准参照第9 版《妇产科学》诊断标准[4]。另纳入同期30例无妊娠合并症且选择择期剖宫产的正常妊娠孕妇作为对照组。排除：多胎妊娠、糖尿病、慢性高血压、心脑血管病、自身免疫性疾病、慢性肾脏病史、甲状腺功能亢进、妊娠并发症（前置胎盘、胎盘早剥、母儿血型不合）、复发性自然流产、长期吸烟及孕期或长期特殊用药者。本研究方案经湖州市妇幼保健院医学伦理委员会批准（伦理批号：2021-013）。所有纳入研究的孕妇均签署知情同意书。

1.2 方法 入院第2天清晨空腹状态下，在肘静脉处采集1～2 ml 静脉血置于抗凝管中，用乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝，采用希森美原装标准试剂经XN9000 全自动血液细胞分析仪检测患者血液指标，包括白细胞计数、中性粒细胞计数及淋巴细胞计数。患者剖宫产术中胎盘娩出后，立即在胎盘母体面正中近脐带处取250～500 mg的组织，避开出血、坏死组织及钙化部位，立即置入液氮浸没以便迅速降温，液氮运输。标本离体取样后立即保存在－80℃中。采用美国Applied Biosystems 公司订制茎环逆转录引物、荧光PCR 引物和探针，取10 ng RNA采用AppliedBiosystems 公司的逆转录试剂盒（TaqMan®MicroRNAReverseTranscription Kit）进行逆转录，荧光定量PCR法检测各组胎盘组织中的Fas 基因miRNA 表达情况。

1.3 统计方法 采用SPSS26.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-检验；采用Spearman 相关性分析。＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组一般资料比较 3 组年龄及孕次差异均无统计学意义（均＞0.05），3 组孕周差异有统计学意义（＜0.05），见表1。

表1 3 组一般资料比较

2.2 3 组血白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞计数比较 3 组血白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞计数差异均有统计学意义（均＜0.05），重度子痫前期组血白细胞、淋巴细胞及中性粒细胞计数均高于对照组（均＜0.05），HDCP 组白细胞和中性粒细胞计数均高于对照组（均＜0.05），重度子痫前期组淋巴细胞计数高于HDCP 组（＜0.05），见表2。

表2 3 组血白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞计数比较 ×109/L

2.3 3 组Fas 基因miRNA 表达情况 HDP组和重度子痫前期组Fas 基因miRNA 表达量均高于对照组（均＜0.05），见图1及表3。

表3 3 组Fas 基因miRNA 表达情况

图1 Fas 基因miRNA的荧光定量PCR 溶解曲线图

2.4 相关性分析 外周血白细胞、中性粒细胞及淋巴细胞计数与胎盘中Fas表达均呈正相关（=0.400、0.421、0.277，均＜0.05）。

3 讨论

HDCP 发生的重要环节在于血管内皮的损伤和免疫功能的失调，其体内的多种炎症因子与正常孕妇存在明显差异[5]。白细胞是人体血液中非常重要的一类血细胞，参与机体的免疫炎症反应。当病菌侵入人体体内时，白细胞能通过变形而穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围和吞噬。近年来研究表明，白细胞计数与高血压的发生风险存在相关性[6]；Kim等[7]对韩国15654 名健康体检者进行横断面研究，结果提示白细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞计数水平升高与高血压患病风险增加有关。本研究结果显示外周血白细胞及淋巴细胞与HDCP的发生存在密切关系，且随疾病严重程度的增加而升高。Amidu 等[8]研究显示淋巴细胞计数增加与HDCP的严重程度相关；本研究也进一步证实不同血白细胞参数对HDCP的发生和发展有一定的预测价值，重度子痫前期组白细胞、淋巴细胞及中性粒细胞计数高于对照组（均＜0.05），这说明炎症反应是引起HDCP特别是重度子痫前期的一个重要因素。

Fa（sCD95/APO-1）是一种I类跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体（TNF/NGF）超家族[9]。Fas/FasL系统的通过清除过多的活化淋巴细胞以维持免疫系统的内稳定[10]。有研究发现经免疫组化分析检测HDCP 胎盘绒毛滋养细胞Fas表达明显升高[11]；Fas的异常表达在子痫前期的发病过程中也扮演着重要角色[12]。本研究结果显示Fas 基因miRNA 表达量水平在HDP 组及重度子痫前期组中明显高于对照组，且在重度子痫前期组中Fas 基因miRNA的表达量高于HDP 组（均＜0.05）；这证实Fas基因miRNA的表达量与HDCP的发生及发展有密切关系。HDCP的基本病理改变是全身小血管的痉挛，Allaire等[13]发现HDCP患者胎盘绒毛滋养细胞FaS 表达显著高于正常组，分析认为滋养细胞Fas高表达致使孕妇循环血中白细胞凋亡延迟。本研究结果显示外周血白细胞、中性粒细胞及淋巴细胞计数与胎盘中Fas 表达均呈正相关性（均＜0.05）。因此，白细胞计数水平检测作为基层水平的普遍检测手段，对HDCP的诊断及病情进展有较高的临床应用价值。