某猪场沙门氏菌和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染病例的诊断

杨志刚 汤德元 张森 韩超逸 晏仁潭 陈阊峥 罗柳

摘 要：2020年8月贵州省某猪场出现了大量仔猪发病死亡的现象，为查出该猪场仔猪发病及死亡原因，本研究采用临床症状观察、病理解剖诊断、细菌分离培养、病毒分子生物学检测等检测方法进行病原学检测。试验结果显示：发病仔猪为沙门氏菌和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）混合感染，并根据诊断结果和猪场实际情况给出了相应的防控建议。

关键词：沙门氏菌;猪繁殖与呼吸综合征;混合感染;诊断

中图分类号：S858.9

文献标识码：A

文章编号：1008-0457（2021）03-0079-04

国际DOI编码：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2021.03.013

Diagnosis of a Case of Mixed Infection of Salmonella and Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus on a Pig Farm

YANG Zhigang，TANG Deyuan*，ZHANG Sen，HAN Chaoyi，YAN Rentan，CHEN Changzheng，LUO Liu

（College of Animal Science，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025，China）

Abstract：

A large number of piglets morbidity and death occurred in a pig farm in Guizhou Province in August 2020. In order to find out the causes of morbidity and death of piglets in this pig farm，etiological testing was carried out in this study by clinical symptom observation，pathological anatomy diagnosis，bacterial isolation and culture，virus molecular biological detection and other detection methods. The results showed that the dieseaed piglets were infected with mixture of salmonella and porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV），and the corresponding prevention and control suggestions were given bsaed on the diagnosis results and the actual situation of the pig farm.

Keywords：

salmonella;porcine reproductive and respiratory syndrome;mixed infection;diagnosis

猪沙门氏菌病（swine salmonellosis） 又称猪副伤寒（paratyphus suum） ，是由沙门氏菌属细菌引起的仔猪的一种传染病，致病菌主要是猪霍乱沙门氏菌、猪伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌等，常发于6月龄以下的仔猪，多发于1～4月龄，临床上可分为急性、亚急性和慢性3种类型，急性病死率高达90%，慢性型病死率达25%～50% [1-2]。急性型呈败血症经过而亡，剖检见脾脏肿大硬化，肠系膜淋巴结肿大;亚急性和慢性病例多发坏死性肠炎，死亡动物尸体消瘦，剖检见肠黏膜附有糜烂坏死物，脾脏稍有肿大，肺部常伴有卡他性肺炎病灶[3]。对该病的控制大部分通过抗菌药物，因此猪群沙门氏菌产生耐药性也屡见报道[4]。猪殖繁与呼吸综合征（ porcine repro-ductive and respiratory syndrome，PRRS） 又称猪“蓝耳病”，病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），以种猪群繁殖障碍和仔猪、生长育肥猪群呼吸道问题为特点，严重危害养猪业的发展，给全世界的养猪业造成了巨大的经济损失[5]，哺乳仔猪主要有腹泻、呼吸困难等症状，个别仔猪还会出现精神症状，如震颤、后肢瘫痪等[6]。近年来，国内广泛流行的PRRSV变异毒株引起的猪殖繁与呼吸综合征，发病和死亡率均比较高[7]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料

贵州省某规模化养猪场800多头仔猪有400多头出现腹泻，粪便恶臭，耳部发紫，一个月内30多头小猪出现死亡，于是该猪场将2只濒死仔猪送检。使用高压灭菌的器械剖检对仔猪进行解剖，无菌采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等，并记录病理变化。

1.1.2 主要试剂和培养基

LB培养基和SS培养基培购自生工生物工程（上海）股份有限公司;药敏纸片购自杭州微生物试剂有限公司;DL2000 DNA Maker购自索莱宝（北京）生物有限公司。

1.1.3 主要仪器

梯度PCR 扩增仪和Gel DOC XR凝胶成像系统购自美国BIO-RAD有限公司;恒温培养箱购自宁波江南仪器厂;电泳仪购自北京君意東方电泳设备有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细菌分离与纯培养

在无菌环境下使用接种环，无菌采集心脏、肝脏、脾脏、肠容物分别进行LB培养基和SS培养基培养1～2 d。然后观察菌落，根据其颜色、形态和数目，记录并选取各个不同类型菌落进行纯化和革兰氏染色镜检。

1.2.2 细菌的生化特性鉴定

将分离纯化的细菌在无菌的条件下分别进行半固体培琼脂、鸟氨酸脱羧酶肉汤、赖氨酸脱羧酶肉汤、西蒙氏枸橼酸盐、硫化氢、尿素酶、色氨酸肉汤、MR-VP、苯丙氨酸、甘露醇、肌醇、山梨醇、蜜二糖、核糖醇、棉子糖试验。37℃培养1 d后观察结果。

1.2.3 药敏试验

无菌操作将纯化培养的菌落接种于培养基中并涂匀，选用头孢曲松、环丙沙星、氧氟沙星、红霉素、氨苄西林、阿莫西林、庆大霉素、链霉素、卡那霉素、多西環素、磺胺噁唑、林可霉素和青霉素共13种常用药敏片贴在培养基中，于37℃下厌氧培养1～2 d后观察结果，并测定抑菌圈直径，判断其药敏性。

1.2.4 相关病毒分子生物学检测

无菌采集送检猪的血液、心脏、淋巴结、肺脏、肝脏和脾脏混合研磨，反复冻融3次，使用TaKaRa Min BEST Viral DNA＼RNA Extraction Kit Ver.5.0 试剂盒提取总的DNA/RNA，进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和日本乙型脑炎病毒（JEV）的PCR扩增。反应结束后取6 μL PCR产物于1.5%的1×TAE琼脂糖凝胶中电泳检测（90 V，35 min），用凝胶成像系统拍照记录。

2 结果与分析

2.1 临床症状及病理变化

发病猪精神沉郁，体温升高，寒战，喜钻垫草，堆叠在一起，食欲减退，拉水样黄黑色粪便，粪便恶臭，脱水消瘦，耳部发紫及躯体末端皮肤发绀，四肢无力呈俯卧姿势或犬坐姿势，肛门周围被毛被粪便污染。经过剖检可见病猪肠系膜淋巴结肿大，大理石样，其他淋巴结也肿大，肺脏质地变软（图1）;胃胀气、肠壁变薄（图2）;心脏变软（图3）;脾肿大，坚实似橡皮;全身各个粘膜和浆膜均有不同程度的出血斑点，胃肠粘膜常见急性卡他性炎症;其中粪便呈黄色。

2.2 细菌分离培养及染色

接种小肠内容物的SS培养基上有大量黑色菌落生长（图4），然后挑取单菌落进行纯培养并对其革兰氏染色镜检，油镜视野下可见大量革兰氏阴性菌（图 5），初步鉴定为沙门氏菌。

2.3 细菌的生化特性鉴定

细菌的生化特性鉴定结果与沙门氏菌生化特征吻合度较高，具体结果如下：

2.4 药敏试验

药敏试验结果显示该菌对头孢曲松、环丙沙星、氧氟沙星敏感性较高，对红霉素、氨苄西林、阿莫西林、庆大霉素、链霉素、卡那霉素、多西环素、磺胺噁唑、林可霉素、青霉素耐药。

2.5 相关病毒分子生物学检测

相关病毒分子生物学检测结果显示，病料中检测出PRRSVORF6 224 bp特异性条带，测序结果与预期相符。未见CSFV、PRV、PCV2、JEV特异性条带检出（图6）。

3 结论与讨论

随着集约化和规模化养殖的发展，猪的疫病混合感染感染现象增多。猪沙门氏菌与其他猪疫病混合感染的病例经常被报道[9-10]。因此应根据临床症状以及实验室诊断结果及时进行确诊，避免误诊而延误治疗时机并影响治疗效果，给生产者造成不必要的经济损失 [11]。

综合分析该猪场出现的疫病，提出以下建议：首先对病死猪及污染物进行无害化处理，隔离病猪，对饲养用具、猪舍、饲养用水进行严格消毒;病猪治疗时选择使用经过药敏试验确定的有效抗生素，比如头孢曲松、环丙沙星、氧氟沙星，当发生严重脱水时，还要采取对症治疗，即使用止泻剂和补液等;对其健康猪进行疫苗接种，做好防疫工作。

参 考 文 献：

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[3] 张璐.喹赛多对猪和鸡沙门氏菌感染的临床疗效研究[D].武汉：华中农业大学，2017.

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[5] 王辉.近几年我国PRRSV进化趋势及其对防控策略的影响[J].中国动物传染病学报，2021，29（1）：114-118.

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[7] 汪德生，王文亮，史开志.高致病性猪蓝耳病、猪瘟和沙门氏菌混合感染的诊断[J].贵州农业科学，2009，37（4）：110-112.

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