高效液相色谱法检测医疗美容产品中9种酰胺类局麻药

沈心，顾晓风，周震宇（苏州市药品检验检测研究中心，江苏 苏州 215014）

利多卡因、普鲁卡因、阿替卡因等是我国目前广泛使用的酰胺类局麻药，具有显著的镇痛作用，且起效快、作用强、持续时间长，主要用作临床医疗产品[1-3]。然而，随着社会经济的发展和人们生活水平的提高，美容行业逐渐兴起，此类局麻药可能被添加于晒后修复、祛斑祛痘等功能性化妆品中，通过皮肤吸收发挥镇静、抗皱抗衰老功效，但化妆品在使用过程中长期直接与人体接触，若含有此类物质会危害人体健康安全[4-6]。一些不法美容院为了达到在医疗美容过程中减轻人体肌肤疼痛或不适的目的，忽视顾客的身体健康，使用一些价格低廉、无合格证书生产批文的麻醉药品，此类产品中麻醉成分含量不可控，具有中枢神经毒性和心血管毒性，由于人体肌肤毛细管丰富，易被吸收并迅速进入血液循环，对人体健康造成严重危害，风险性极大[7-8]。因此，我国《化妆品安全技术规范》（2015年版）[9]、欧盟化妆品法规及东盟化妆品指令[10]中均明确将普鲁卡因等局麻药列为化妆品中禁用组分。

目前文献报道的局麻药高效液相色谱测定法多局限于单种或者4 种目标组分的检测[3，11-12]。基于此，本文建立同时定量测定9 种酰胺类局麻药（普鲁卡因胺、N-去丁基布比卡因、甲哌卡因、阿替卡因、丙胺卡因、利多卡因、罗哌卡因、地布卡因、布比卡因）的高效液相色谱分析方法，检测范围全面、操作简便、成本低、适用性强、有利于方法的推广，可用于医疗美容产品中酰胺类局麻药的检测，以期为市场监督管理提供技术支撑。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent Technologies 1260 Infinity Ⅱ高效液相色谱仪（Agilent Open Lab Acquisition CDS 2.4 工作站）；METTLER TOLEDO XSE205DU 电子天平（梅特勒）。

1.2 试药

盐酸普鲁卡因（批号：C10589495，纯度：99.0%，麦克林）；N-去丁基布比卡因（批号：7-ECGW-135-1，纯度：98.0%）、盐酸甲哌卡因（批号：36SKB-BI，纯度：98.0%）、盐酸丙胺卡因（批号：3SRKC-HF，纯度：98.0%）、盐酸布比卡因（批号：ZXXLC-AF，纯度：98.0%）对照品（TCI）；阿替卡因（批号：L1820009，纯度：99.0%）、地布卡因（批号：G1825214，纯度：99.0%）对照品（阿拉丁）；盐酸利多卡因对照品（批号：1-TGG-11-1，纯度：99.0%，TRC）；盐酸罗哌卡因对照品（批号：100866-201302，纯度：94.5%，中国食品药品检定研究院）。样品均来源于苏州市市场监督抽查。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为国产分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters XBridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相A 为5 mmol·L－1磷酸二氢钠溶液-15 mmol·L－1磷酸氢二钠溶液（pH 7.5），流动相B 为乙腈；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：215 nm；柱温：35 ℃；进样量：10 μL；梯度洗脱条件见表1。

表1 梯度洗脱条件Tab 1 Condition of gradient elution

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 称取盐酸丙胺卡因、盐酸布比卡因、盐酸甲哌卡因、盐酸罗哌卡因、盐酸利多卡因、N-去丁基布比卡因、地布卡因、阿替卡因、盐酸普鲁卡因胺对照品各约100 mg，精密称定，置100 mL 量瓶中，加入适量甲醇超声使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得9 种酰胺类局麻药的混合对照品储备液（1 mg·mL－1）。取混合对照品储备液，用甲醇逐级稀释成系列浓度的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取样品约1 g，精密称定，置100 mL 量瓶中，加入适量甲醇，置40 ℃水浴中加热5 min 使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 取空白基质（空白样品）约1 g，精密称定，置100 mL 量瓶中，加入适量甲醇，置40 ℃水浴中加热5 min 使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过。

2.3 专属性试验

取对照品溶液（0.05 mg·mL－1）、供试品溶液、阴性样品溶液以及空白溶剂（甲醇），按 “2.1”项下色谱条件进行测定。对照品溶液中9 种待测酰胺类局麻药均达到基线分离，各理论板数均不低于5000，空白溶剂以及阴性样品溶液对测定均无干扰，阳性样品中检测出3种酰胺类局麻药（见图1）。

图1 空白溶剂（A）、阴性样品溶液（B）、对照品溶液（C）及供试品溶液（D）典型色谱图Fig 1 Chromatogram of blank solvent（A），negative sample solution（B），reference solution（C）and sample solution（D）

2.4 标准曲线、检测限和定量限

取“2.2.1”项下混合对照品储备液及系列对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱峰面积响应值（A），以对照品溶液质量浓度（C）为横坐标，A值为纵坐标进行线性回归。另取对照品溶液（0.004 mg·mL－1），用甲醇逐级稀释，同法测定，分别按3 倍和10 倍信噪比计算各组分的检测限和定量限，结果见表2。

表2 9 种酰胺类局麻药的线性关系Tab 2 Regression equation，LOD and LOQ of 9 amide local anesthetics

2.5 精密度试验

取“2.2.1”项下混合对照品储备液，用甲醇稀释成浓度为0.04 mg·mL－1的对照品溶液，重复进样测定6 次，测得峰面积RSD在0.15%～0.32%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取阳性样品，平行制备6 份供试品溶液，结果显示样品含普鲁卡因胺、丙胺卡因、利多卡因3 种酰胺类局麻药，各组分含量的RSD在1.1%～2.8%，表明该方法具有良好重复性。

2.7 稳定性试验

取“2.5”项下对照品溶液，分别于室温下放置0、6、10、12、24 h 后，进样测定，结果显示9 种酰胺类局麻药峰面积的RSD均小于1.1%，说明该溶液在24 h 内基本稳定。

2.8 回收试验

取约1 g 空白样品作为空白基质，精密称定，共9 份，分别置100 mL 量瓶中，按低、中、高3个浓度分别加入“2.2.1”项下的混合对照品储备液（1.0、5.0、10.0 mL），加入适量甲醇，于40℃水浴上加热5 min 使其充分溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进行测定，按外标法计算回收率，9 种酰胺类局麻药平均回收率在93.4%～105.7%，RSD≤5.7%，在亲水性基质中的平均回收率为92.4%～102.1%，RSD≤5.2%，符合测定要求。

2.9 实际样品检测

对10 批医疗美容产品进行检测分析，结果显示，仅1 批样品中检出利多卡因、普鲁卡因胺和丙胺卡因3 种酰胺类局麻药，分别为24.81、3.91、6.65 mg·g－1，其余样品均未检出。

3 讨论

3.1 流动相pH 的选择

考察不同pH 值（7.0、7.5、8.0、8.5、9.0）的流动相对待测组分色谱峰形和分离效果的影响，结果显示，当pH 值高于或者低于7.5 时，均不能获得满意的分离效果；当pH 值为7.5 时，各组分在峰形和分离效果上均较为理想。因此，确定流动相pH 值为7.5。

3.2 色谱柱的选择

比较3 种不同填料的色谱柱Phenomenex Gemini C18110A（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Agilent ZORBAX Extend C18（4.6 mm×250 mm，5μm）、Waters XBridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）对色谱行为的影响，结果显示，使用Phenomenex Gemini C18110A、Agilent ZORBAX Extend C18色谱柱，色谱峰均会出现不同程度的拖尾，峰形较差，使用Waters XBridge C18色谱柱结果理想。因此，选择使用Waters XBridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱作为试验用色谱柱。

3.3 小结

本研究以市场抽检医疗美容产品为研究对象，建立了同时测定9 种酰胺类局麻药的高效液相色谱方法。选择临床常用酰胺类局麻药作为待测物，对《化妆品安全技术规范》（2015年版）中规定的7 种禁用组分作出补充，建议将本研究中目标组分（普鲁卡因胺、N-去丁基布比卡因、甲哌卡因、阿替卡因、丙胺卡因、利多卡因、罗哌卡因、地布卡因、布比卡因）均列为禁用组分，且相比于已报道的色谱-质谱联用法[13-14]，本方法成本低，同时优化样品前处理过程，操作简便，更利于方法的普及，可为市场监督管理提供有力的技术支持。