改良抗酸热染法对痰中抗酸杆菌的结果分析

李静

(南阳医学高等专科学校第一附属医院 检验科，河南 南阳 473000)

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性全身性传染病，其中肺结核最为常见，占结核病总病例的80% 以上，严重危害人类健康[1]。近年来，结核病人的不断增加，引起了世界卫生组织的高度关注。目前，痰涂片抗酸杆菌直接镜检结果仍是结核病诊断的重要依据，而抗酸染色法则是其主要方法之一[2]。为探寻一种可靠而操作较为简单的检测方法，以提高阳性检出率，本研究对痰中抗酸杆菌用改良抗酸热染法的检测结果进行了分析，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

98 例标本均来源于2018年6月至2019年6月南阳医学高等专科学校第一附属医院感染科肺结核住院患者送检的合格痰标本。

1.2 仪器与试剂

抗酸染色液由珠海贝索生物技术有限公司提供，其中主要包括亚甲蓝溶液、酸性酒精及石碳酸复红溶液等；显微镜选自日本生产的奥林巴斯显微镜，型号为CX31RTSF；生物安全柜由济南鑫贝西生物技术有限公司生产，型号为BSC-1500 ⅡA2-X。

1.3 制片方法

制片均在生物安全柜内进行，按照《中国结核病防治规划实施指南》要求，制备痰涂片98 张(每份各2 张)，自然干燥后火焰固定，先使用铅笔在每张玻片的磨砂面上编号分成两组，再用接种环挑取痰标本的脓性部分大约0.05～0.1 mL，涂于无划痕的载玻片右2/3 处，做螺旋状轨迹均匀抹成2.0 cm×2.5 cm 大小的卵圆形膜，不要太厚，以透过染色前的痰膜可以隐约看到报纸上的字迹为宜，待干后火焰固定置于染色架上进行染色。

传统抗酸冷染法：①将干燥固定后带有编号的玻片置于染色架上进行染色，然后滴加石碳酸复红溶液盖满玻片进行初染，室温染色10min，流水冲去溶液，沥干；②滴加酸性酒精溶液盖满玻片，进行脱色1～2 分钟，至无红色为止，然后用流水冲洗；③滴加亚甲蓝染液30～60 s 进行复染，流水冲去染液，待干后油镜观察，在蓝色背景下，抗酸杆菌(如结核杆菌)呈红色，其他细菌及细胞呈蓝色复染。

改良抗酸热染法：①将干燥固定后带有编号的玻片置于染色架上，加石碳酸复红溶液均匀布满片子。用棉签蘸95% 的酒精，在酒精灯上点燃；②将带火焰的棉签在片子下方移动，均匀加热每张片子,以微微冒出热蒸汽为宜，此步骤为初染过程。③燃烧后的棉签放入备有水的烧瓶中熄灭。在初染过程中区别于传统抗酸冷染法加热是最关键一步。其余步骤脱色、复染，其染色方法与传统抗酸冷染法相同。

1.4 结果判读

在油镜下观察，结果记录及报告均按照《全国临床检验操作规程》进行，抗酸杆菌阳性结果判读方法：报告抗酸杆菌菌数为1～8 条抗酸杆菌/300 个视野。抗酸杆菌阳性“+”为3～9 条抗酸杆菌/100 个视野，“++”为1～9 条抗酸杆菌/10 个视野，“+++”为1～9 条抗酸杆菌/ 每个视野，“++++”为≥10 条抗酸杆菌/ 每个视野。

1.5 统计学处理

用SPSS 15.0 统计学软件对所得数据进行分析处理，配对计数资料采用χ2检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

改良抗酸染色热染法和传统抗酸冷染法最大的区别，在于初染时加热这一关键步骤。从表中两种染色方法的阳性率可以看出：传统抗酸杆菌冷染法中，阳性总数22例，阳性率为22.4%(22/98)；抗酸杆菌热染法中，阳性总数39 例，阳性率为39.8%(39/98)，经检验，差异有统计学意义(χ2=6.878，P＜0.01)；尤其在“+”阳性率的两组结果对比中，改良抗酸染色热染法中阳性数31 例，阳性率为15.3%(15/98)，传统抗酸冷染法中，阳性数为15 例，阳性率为15.3%(15/98)，经检验，差异有统计学意义(χ2=7.272，P＜0.01)，而“++”“+++”“++++”的阳性率之间比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。

由此可见，改良抗酸热染法可大大提高阳性检出率，尤其在菌体数量较少时更为显著。其结果见表1。

表1 98例痰标本抗酸染色中抗酸杆菌阳性结果

3 讨论

肺结核是由结核分枝杆菌感染所致的传染病，会损伤患者肺部功能，影响患者正常生活甚至导致死亡，该病原菌可通过痰液和飞沫等形式进行传播，因此传染性极强。临床通常采用痰涂片查找抗酸杆菌对患者病情进行判断[3]，而典型的分枝杆菌菌体形态为微弯曲或直的杆菌，一旦着色后有抵抗盐酸酒精脱色的性能，故称为抗酸杆菌。分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是磷脂、脂肪酸和蜡质三种成分[4]，分枝杆菌酸包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色。在常规工作中，多采用传统抗酸冷染法进行染色，但由于抗酸杆菌的菌体含有一层蜡质，使染液难以进入，致使染色效果不佳，要经过加热和延长染色时间来促其着色[5]。结合本研究结果分析，改良抗酸热染法中提高染液的温度可加速染液透过抗酸杆菌的细胞壁，并能缩短染色时间和提高染色效果，染出的菌体大而清晰，大大提高阳性检出率，在菌体数量较少的痰标本中更具有明显优越性[6]，且此法操作简便、快捷。因此，该方法值得在基层各实验室中推广应用，以减少漏检率。