XO/XOR、GSH-Px、miR-133b在急性肾小球肾炎肾功能损害中诊断价值及意义

李莎 胡明亮 王丽

急性肾小球肾炎（Acute glomerulonephritis，AGN）是以毛细血管内增生性肾小球肾炎为主要病理表现的肾内科疾病，多见于细菌、A 组β 溶血性链球菌感染后等，大多具有自限性，但部分患者可出现急性肾衰竭，威胁患者生命健康，因此对AGN肾功能损害进行明确诊断意义重大［1］。黄嘌呤氧化还原酶（Xanthine oxidoreductase，XOR）主要催化嘌呤降解的末端反应，以黄嘌呤氧化酶（Xanthine oxidase，XO）、黄嘌呤氧化脱氢酶（Xanthine dehydrogenase，XDH）两种形式存在，其中XDH 可将电子转移、转变为还原态，XO 利用氧气生成活性氧，因此XO/XOR 可反映活性氧的生成情况［2］。研究发现，慢性肾脏病肾损害患者XO/XOR 水平升高，与肾损害有关［3］。谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）是含硒清除自由基和抑制自由基生成的抗氧化酶之一，与原发性肾小球疾病患者肾间质纤维化有关［4］。微小RNA-133b（microRNA-133b，miR-133b）在糖尿病肾病患者表达高于健康人群，与肾小球滤过率有关［5］。目前关于XO/XOR、GSH-Px、miR-133b 在AGN 领域的研究较少，本研究对此进行探讨，旨在为临床诊治AGN 肾功能损害，最大程度改善患者预后提供参考，报告如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2018年12月至2020年12月本院收治的120 例AGN 患者（AGN 组）及35 例健康人群（对照组）作为研究对象进行前瞻性研究，本研究经医院伦理委员会审核通过，纳入患者均充分知晓本研究，自愿签署知情同意书。其中观察组女49 例，男71 例，年龄平均（47.50±9.16）岁；对照组女10 例，男25 例，年龄平均（45.96±7.89）岁。两组基线资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

纳入标准：①观察组符合AGN 诊断标准［6］；②发病前无慢性肾脏病史；③入组者均自愿签署知情同意书。排除标准：①急性心脑血管疾病者；②遗传性肾病者；③凝血功能异常者；④有药物滥用史者；⑤自身免疫疾病者；⑥入组前接受过相关治疗者；⑦合并恶性肿瘤患者。

1.2 方法

1.2.1 肾功能损害的诊断［6］

伴有不同程度的血尿、患侧腰痛、腹部疼痛、少尿等临床症状体征，肾小球滤过率降低，血肌酐、血尿素氮、尿蛋白升高。

1.2.2 资料收集

收集两组人员的年龄、性别、体质量指数、病程、饮酒史、吸烟史、高脂血症、糖尿病、冠心病、高血压分布情况。

1.2.3 各指标检测及实验方法

观察组于确诊时，对照组于入院清晨，采集空腹静脉血5 mL，采用高灵敏度荧光法检验XO 活性，采用黄嘌呤氧化还原酶法检测XOR 活性，试剂盒购于上海仁捷生物科技有限公司，计算XO/XOR；采用比色法检测GSH-Px，试剂盒购于上海信帆生物科技有限公司；采用实时荧光定量聚合酶链反应法及TaqMan 探针法检测miR-133b，试剂盒购于杭州博日科技有限公司，miR-133b 上游引物为5′-TTTGGTCCCCTTCAACCAGCTA-3′，下游引物为5′-GTGCAGGTCCGAGGT-3′，内参U6 上游引物为5′-CGCAAGGATGACACGCAAATTC-3′，下游引物为5′-GTGCAGGGTCCGA-3′，检测基因相对表达量=2-△△Ct；采用酶法检测血肌酐水平，试剂盒购于浙江伊利康生物技术有限公司，计算公式：男性肾小球滤过率（eGFR）=186×血肌酐-1.154×年龄-0.203，女性肾小球滤过率（eGFR）=186×血肌酐-1.154×年龄-0.203×0.742。

1.3 统计学方法

数据处理采用统计软件SPSS 22.0，计量资料以（）表示，两组间比较行独立样本t检验；计数资料用n（%）表示、χ2检验，采用Pearson 分析各指标与肾功能指标相关性，采用Logistic 回归方程分析肾功能损害的相关影响因素，采用受试者工作特征曲线（ROC）及ROC 下面积（AUC）分析各指标的诊断价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组各指标比较

AGN 组XO/XOR、miR-133b 高于对照组，GSHPx低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组各指标比较（±s）Table 1 Comparison of indicators between 2 groups（±s）

表1 两组各指标比较（±s）Table 1 Comparison of indicators between 2 groups（±s）

组别AGN 组对照组t 值P 值n 120 35 XO/XOR 0.85±0.30 0.57±0.18 5.246＜0.001 GSH-Px（U/L）89.65±25.80 125.66±20.64 7.575＜0.001 miR-133b 5.35±1.65 1.24±0.39 14.567＜0.001

2.2 有无肾功能损害患者基线资料、各指标比较

有损害组与无损害组患者年龄、性别、体质量指数、病程、饮酒史、吸烟史、高脂血症、糖尿病、冠心病、高血压分布比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；有损害组血肌酐、eGFR、XO/XOR、miR-133b 高于无损害组，GSH-Px 低于无损害组（P＜0.05）。见表2。

表2 有无肾功能损害患者基线资料、各指标比较［（±s），n（%）］Table 2 Comparison of baseline data and indicators of patients with or without renal impairment［（±s），n（%）］

表2 有无肾功能损害患者基线资料、各指标比较［（±s），n（%）］Table 2 Comparison of baseline data and indicators of patients with or without renal impairment［（±s），n（%）］

资料年龄(岁)性别（男/女）体质量指数（kg/m2）偏瘦正常超重肥胖病程（d）饮酒史吸烟史合并疾病高脂血症糖尿病冠心病高血压血肌酐（μmol/L）eGFR（mL/min）XO/XOR GSH-Px（U/L）miR-133b有损害组（n=72）48.52±12.54 41/31 6（8.33）49（68.06）10（13.89）7（9.72）8.52±2.63 68（94.44）35（48.61）6（8.33）11（15.28）3（4.17）7（9.72）286.88±92.57 64.88±12.05 0.96±0.29 71.14±21.95 6.39±2.11无损害组（n=48）45.97±10.65 30/18 4（8.33）30（62.50）9（18.75）5（10.42）9.21±2.84 42（87.50）22（45.83）7（14.58）4（8.33）1（2.08）2（4.17）102.26±20.26 92.25±18.97 0.69±0.22 117.42±32.26 3.79±1.05 t/χ2值1.157 0.368 0.579 1.364 1.023 0.089 0.608 1.270 0.011 0.606 13.584 9.670 5.481 9.358 7.902 P 值0.249 0.544 0.901 0.175 0.312 0.765 0.436 0.260 0.917 0.436＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.3 各指标与肾功能指标相关性

采用Pearson 进行相关性分析结果显示，XO/XOR、miR-133b 与血肌酐呈正相关，与eGFR 呈负相关（P＜0.05）；GSH-Px 与血肌酐呈负相关，与eGFR 呈正相关（P＜0.05）。见表3。

表3 各指标与肾功能指标相关性Table 3 Correlation between each index and renal function index

2.4 肾功能损害影响因素的Logistic 回归方程分析

以AGN 肾功能损害情况为因变量（0=无，1=有），纳入XO/XOR、GSH-Px、miR-133b 作为自变量（低于均值赋值为1，高于均值赋值为2），结果显示，XO/XOR、GSH-Px、miR-133b 均与肾功能损害相关（P＜0.05）。见表4。

表4 肾功能损害影响因素的Logistic 回归方程分析Table 4 Logistic regression equation analysis of factors affecting renal function damage

2.5 各指标的诊断价值

ROC 分析结果显示，XO/XOR+GSH-Px+miR-133b 诊断AGN 肾功能损害 的AUC 为0.972（P＜0.05）。见表5、图1。

表5 ROC 分析结果Table 5 ROC analysis results

图1 ROC 曲线Figure 1 ROC curve

3 讨论

XOR 是一种含钼蛋白质聚合物，参与机体的嘌呤代谢，终产物包括氧自由基、羟基自由基等［7］。XO 形式是XOR 产生活性氧的主要来源，可增加活性氧的生成速率，故XO/XOR 越高，表明机体活性氧产生越多［8］。以往关于XO/XOR 在AGN领域的报道鲜见，本研究结果提示XO/XOR 与AGN 及其肾功能损害有关。本研究进行了相关性分析，结果显示，XO/XOR 与血肌酐呈正相关，与eGFR 呈负相关，对肾功能损害起到促进作用。

GSH-Px 是机体抗氧化应激系统的重要成员之一，其水平增高可清除氧自由基、羟基自由基等过氧化反应产物，抑制氧化应激反应，保护肾脏［9-10］。肾损伤时，GSH-Px显著降低，采用相关措施增加GSH-Px，则可通过抑制氧化应激，减轻肾损伤程度［11］。与正常人群比较，AGN 患者GSH-Px 较低，且有肾功能损害患者GSH-Px 进一步降低，佐证了GSH-Px 对肾功能具有保护作用。AGN 肾功能损害时，介导了机体氧化应激反应，氧自由基、羟基自由基大量产生，GSH-Px 被大量消耗而表现出较低水平，且GSH-Px与血肌酐呈负相关，与eGFR 呈正相关，故检测AGN患者GSH-Px，不仅能直接反映患者肾功能状况，并能为AGN 肾功能损害的诊断提供依据。同时从本研究结果推测，GSH-Px 降低与AGN 及肾功能损害密切相关，给予抗氧化应激药物，提高GSH-Px，可能为AGN 及肾功能损害的防治提供了一个新的靶点。

miR-133b 系非编码RNA 分子，能通过转录活动调控靶基因表达，参与感染、免疫、细胞凋亡等重要的生物学过程［12-13］。Zhang XL 等［14］报道，应用LncRNA 癌易感性候选基因2 靶向miR-133b，能抑制肾小球系膜细胞氧化应激损伤，保护肾小球系膜，提示miR-133b 与肾小球损伤有关。本研究结果提示miR-133b 是AGN 及肾功能损害的一个分子标志物。关于miR-133b 在AGN 中机制尚不明确，结合文献推测，miR-133b 通过转录，参与系膜细胞肥大、肾小管间质的纤维化、细胞外基质沉积等，介导肾小球硬化，从而影响肾功能［15-16］。miR-133b与血肌酐呈正相关，与eGFR 呈负相关，检测miR-133b 水平，可为AGN 肾功能损害的诊断提供参考。

综上所述，AGN 及肾功能损害患者XO/XOR、miR-133b 升高，GSH-Px 降低，不仅可作为诊断AGN 肾功能损害的生物标志物，还为AGN 及肾功能损害的机制和防治提供了新的思路。但受研究经费、研究时间等限制，本研究对照组人群较小，可能造成数据的偏倚，后续仍需增加样本量，进一步进行深入的观察分析。