血清GM-CSF、sTREM-1 联合T-SPOT.TB 鉴别诊断肺结核的价值

李 点， 郑 正， 江叶舟

（湖南省胸科医院综合科，湖南 长沙 410003）

肺结核是常见的呼吸系统疾病，由结核分枝杆菌感染引起，具有较强的传染性[1]。近年来，我国肺结核患病率呈上升趋势[2]。痰液检测是目前肺结核诊断的主要方法，但其敏感性和特异性均不高，并且部分患者无痰，限制了其临床应用[3]。因此，寻找一种适用性广、灵敏度高、特异性高的诊断方法对于肺结核的早期诊断至关重要。结核感染T细胞斑点试验（T-cell spot test for tuberculosis infection，T-SPOT.TB）是近年来出现的诊断结核病的新方法，可用于肺结核的快速诊断[4]。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte macrophage colony stimulating factor，GM-CSF）是重要的炎性反应标志物。WON等[5]的研究结果显示，肺结核患者血清GM-CSF水平明显升高。可溶性髓系细胞触发受体-1（soluble triggering receptor expressed on myeloid cell-1，sTREM-1）是病原菌在感染过程中释放入血的标志物。因此，本研究拟探讨肺结核患者血清GM-CSF、sTREM-1水平及其与T-SPOT.TB联合诊断的价值。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2017年2月—2019年3月湖南省胸科医院收治的肺结核患者94例（肺结核组），其中男53例、女41例，年龄（43.72±5.45）岁，体质量指数（body mass index，BMI）为（23.15±0.84）kg/m2；有26例患者经痰培养确诊，68例患者经痰涂片和痰培养确诊；初治患者39例，复治患者55例。所有患者均根据《肺结核基层诊疗指南（2018年）》[6]确诊为原发性肺结核，排除免疫性疾病、恶性肿瘤及精神类疾病患者。另选取湖南省胸科医院其他肺部疾病患者94例（对照组），其中男55例、女39例，年龄（42.96±5.28）岁，BMI为（23.21±0.79）kg/m2；包括支气管肺炎43例、大叶性肺炎15例、慢性支气管炎26例、支气管扩张6例、肺间质纤维化4例；均排除肺结核及肺外结核病。2个组之间年龄、性别、BMI差异均无统计学意义（P＞0.05）。本研究经湖南省胸科医院伦理委员会批准，所有对象均签署知情同意书。

1.2 方法

采集所有对象入院第2 天的空腹静脉血15 mL，其中10 mL以1 510×g离心10 min，分离血清，-80℃保存。采用酶联免疫吸附试验检测血清GM-CSF及sTREM-1水平，试剂盒均购自上海博湖生物科技有限公司[GM-CSF试剂盒：最低检测限＜1.0 pg/mL，线性范围为15～480 pg/mL，批内变异系数（coefficient of variation，CV）＜8%，批间CV＜10%，标准曲线r=0.84；sTREM-1试剂盒：最低检测限＜1.0 pg/mL，线性范围为7.5～240 pg/mL，批内CV＜10%，批间CV＜15%，标准曲线r=0.85]。剩余5 mL静脉血采用Ficoll淋巴细胞分离液和RPMI 1640培养液获得外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），用AIM-V培养液配置标准溶液，使得PBMC浓度为2.5×105/mL，用于T-SPOT.TB检测，试剂盒购自南通表源生物技术有限公司。所有操作均严格按试剂说明书要求进行。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计分析。呈正态分布的数据以±s表示，2个组之间比较采用t检验。计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验。采用Logistic回归分析建立血清GM-CSF、sTREM-1与T-SPOT.TB联合检测诊断肺结核的回归方程。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评估各项指标鉴别诊断肺结核的价值，采用Hanley-McNeil法比较各项指标的曲线下面积（area under curve，AUC）。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺结核组与对照组血清G M-C S F 和sTREM-1水平的比较

肺结核组血清GM-CSF、sTREM-1水平均显著高于对照组（P=0.000）。见表1。

表1 肺结核组与对照组血清GM-CSF和sTREM-1水平比较 ±s

表1 肺结核组与对照组血清GM-CSF和sTREM-1水平比较 ±s

注：空白表示无此项。

组别 例数GM-CSF/（mg/L） sTREM-1/（ng/L）肺结核组 94 305.27±24.15 5.19±1.16对照组 94 143.29±11.56 3.07±0.93 t值 58.656 13.825 P值 0.000 0.000

2.2 GM-CSF、sTREM-1和T-SPOT.TB单项及联合检测鉴别诊断肺结核的效能

以痰培养阳性、病理活检为肉芽肿性炎症或干酪样坏死、痰涂片抗酸染色阳性作为肺结核诊断的标准。以肺结核（发生=1，未发生=0）为因变量，以GM-CSF、sTREM-1、T-SPOT.TB检测为自变量进行Logistic回归分析，建立3项指标联合检测定性诊断肺结核的回归方程：Logit（P）=1.061+0.231×GMCSF+0.542×sTREM-1+1.669×T-SPOT.TB，方程中概率值变量pre-1=1/{1+exp[-Logit（P）]}。ROC曲线分析结果显示，GM-CSF、sTREM-1、T-SPOT.TB单项及联合检测鉴别诊断肺结核的AUC分别为0.674、0.687、0.758、0.832。3项指标联合检测鉴别诊断肺结核的效能优于单项检测（P＜0.05）。见表2、图1。

表2 GM-CSF、sTREM-1和T-SPOT.TB单项及联合检测鉴别诊断肺结核的效能

3 讨论

临床诊断肺结核以检出病原菌为金标准，实际工作中常采用直接涂片和培养法测定病原菌[7-8]。虽然直接涂片染色法较为快捷，但阳性率不高；结核杆菌培养法诊断准确，但耗时长[9]。因此，学者们不断推出结核病检测的新技术，如基因芯片、分子生物学检查和线性探针技术等[10-12]。

GM-CSF主要由单核细胞、上皮细胞分泌，是肺部免疫机制中的重要因子，可促进单核细胞转化为巨噬细胞，提高巨噬细胞的生物活性[13]。有研究结果显示，肺结核病患者血清GMCSF水平明显升高，治疗后血清GM-CSF水平显著下降[14]。本研究结果显示，肺结核患者血清GM-CSF水平显著高于对照组（P=0.000）。ROC曲线分析结果显示，GM-CSF鉴别诊断肺结核的AUC为0.674，敏感性为61.70%，特异性为60.63%，表明GM-CSF单独诊断肺结核的价值不高。

sTREM-1是髓样细胞触发体-1（triggering receptor expressed on myeloid cell-1，TREM-1）在人体中的表现形式之一。TREM-1多表达于中性粒细胞和单核细胞表面膜受体，在炎症性疾病中发挥重要作用[15]。在感染早期，sTREM-1被释放入血，与其配体结合后激活中性粒细胞及巨噬细胞，促进肿瘤坏死因子、白细胞介素8等促炎因子的释放[16-17]。CAO等[18]的研究结果显示，sTREM-1是一种比传统指标更敏感的肺结核诊断生物标志物。本研究结果显示，肺结核患者血清sTREM-1水平明显高于对照组（P=0.000），其鉴别诊断肺结核的AUC为0.687，敏感性为70.21%，特异性为59.57%，诊断价值有限。

γ-干扰素释放试验是近年来用于诊断结核分枝杆菌感染的新方法。T-SPOT.TB是目前γ-干扰素释放试验中最常用的方法。与传统的结核菌素皮肤试验相比，T-SPOT.TB不受卡介苗和大多数非致病分枝杆菌的影响[19-20]。本研究结果显示，T-SPOT.TB鉴别诊断肺结核的AUC为0.758，敏感性为80.85%，特异性为63.82%，虽然敏感性较高，但特异性较低，与文献报道[21]一致。因此，寻找特异性较高的肺结核筛查方法，提高临床检出率，对于肺结核的预防、诊断具有重要价值。

有研究结果显示，γ-干扰素释放试验与糖类抗原125联合检测诊断原发性肺结核的准确率为90.6%，敏感性为76.7%，特异性为91.5%[22]，明显高于2项指标单项检测。本研究结果显示，GM-CSF、sTREM-1与T-SPOT.TB联合检测鉴别诊断肺结核的AUC为0.832，敏感性为85.11%，特异性为58.10%。3项指标联合检测鉴别诊断肺结核的效能优于单项检测。

综上所述，虽然GM-CSF和sTREM-1均为非器官特异性和病种特异性指标，但GM-CSF、sTREM-1联合T-SPOT.TB可有效提高诊断肺结核的效能，或可作为肺结核与肺部其他疾病的鉴别诊断指标。