龙山县湘西黄牛药物使用情况和耐药性调查

秦 涛，向胜超

（1.湘西州龙山县兴隆街道办事处农业综合服务中心，湖南，湘西416800；2.湘西州龙山县动物卫生监督所，湖南，湘西416800）

湘西黄牛的肉质优良、脂肪少、水分少，蛋白质含量高，口感好，试销港澳及国际市场曾获好评。现阶段湘西地区正在充分利用产业品牌优势、饲草资源优势、生态环境优势、旅游资源优势，大力发展湘西黄牛产业。通过湘西黄牛区域品牌建设、龙头企业带动打造、加强选育、提高养殖技术水平等工作，大力发展湘西黄牛产业，瞄准中高端牛肉市场，实现知名品牌下的优质优价，努力将将湘西黄牛发展为绿色、生态、有机品牌，促进使湘西黄牛产业持续稳定发展[1]。

虽然湘西黄牛养殖业发展势头良好,但也存在着许多问题：首先是基础防疫设施薄弱，疫病诊断及检测仪器设备简陋,仪器设备不能正常使用，工作方法、手段落后，技术含量低,缺乏办公场地，难以适应基层实际工作需要[2]。其次是基层畜牧兽医人员集中进修、培训学习的少，年龄结构老化,知识结构偏低,对新事物新技术缺乏学习。缺乏技术过硬的服务队伍，在养殖过程中缺乏对一些科学技术的运用[3]。再次是养殖户养殖水平较低，许多养殖户没有修建专门的、标准的牛舍，基础设施薄弱[4]。所有这些存在的问题，对湘西黄牛养殖过程中疾病的发生构成了一定威胁。

笔者于2020年10月对龙山县召市镇、咱果乡、洗洛镇、里耶镇等镇的湘西黄牛进行了用药调查，并通过采集湘西黄牛肛门拭子，分离大肠杆菌，采用NCCLS推荐的K-B法进行细菌耐药性检测，为龙山县湘西黄牛的细菌性疾病防控提供了参考依据。

1 材料与方法

1.1 湘西黄牛药物使用情况调查

从龙山县召市镇、咱果乡、洗洛镇、里耶镇、桂塘镇5个乡镇，挑取5个湘西黄牛场（养殖规模20～40头），通过问询和走访的形式对5个黄牛场的用药情况进行了调查和记录。

1.2 肛门拭子采样

从每个湘西黄牛饲养场选择10～30头湘西黄牛，用灭菌棉签拭子采集肛门拭子，将灭菌棉签拭子折段放置于含有PBS缓冲液的1.5mL离心管中，将所采集样品带至实验室。

1.3 大肠杆菌分离纯化

在无菌条件下，将采集的棉签拭子在麦康凯培养基上划线，过夜培养。挑取麦康凯平板上的粉红色菌落，在普通肉汤琼脂平板上再次进行纯化培养，并进行镜检。将符合大肠杆菌培养形态和镜检形态的单菌落用LB培养基扩增细菌，准备下一步药敏实验。

1.4 药敏实验

取过夜培养的大肠杆菌用生理盐水稀释至0.5麦氏浓度，用灭菌棉签拭子蘸取稀释的菌液在肉汤琼脂平板上涂板并静置干燥5分钟。选取五类共13种抗生素（四环素、多西环素、萘啶酸、吡哌酸、加替沙星、氨苄西林、头孢氨苄、头孢噻肟、链霉素、庆大霉素、妥布霉素、复方新诺明、甲氧苄氨嘧啶）药敏纸片贴于已经涂好菌液的平板，过夜培养后，用游标卡尺测量抑菌圈半径，根据NCCLS推荐的标准，对各细菌药敏结果进行判定。

2 结果

2.1 各乡镇湘西黄牛养殖场药物使用情况

根据各养殖场饲养员口述，同时走访各黄牛养殖场药房，各牛场的用药情况无太大差异。由于湘西黄牛平时主要在山坡上放养，自由采食，野性较强，所以在黄牛出现异常时，注射用药品均不太方便使用，拌料用的药品使用稍微较多。根据养殖员描述，在黄牛出现胃肠道疾病或者呼吸系统异常时，养殖户常采取加食过程中往玉米中拌入抗生素预混剂的方式喂牛。各乡镇黄牛养殖场使用的抗生素见表1。

表1 各乡镇湘西黄牛饲养场规模及药物使用统计

2.2 湘西黄牛肛门拭子采集及细菌分离结果

根据各黄牛养殖场的用药情况，对各养殖场的黄牛采集肛门拭子，桂塘镇的黄牛养殖场规模偏大，抗生素使用量稍微偏多，所以采集的肛门拭子和分离的大肠杆菌数均较多。共分离到57株大肠杆菌。

表2 各湘西黄牛饲养场肛门拭子细菌分离情况

2.3 药物敏感实验结果

对所有分离到的细菌进行药敏实验，结果显示，各牛场细菌对各抗生素的耐药性也存在一定的差异，召市镇、里耶镇、桂塘镇分离的细菌均对四环素、多西环素、复方新诺明（里耶镇牛场除外）、甲氧苄氨嘧啶表现出耐药性，同时召市镇与洗洛镇、咱果乡分离的细菌均对氨苄西林有一定的耐药性。洗洛镇分离的细菌仅仅表现出对氨苄西林的耐药性。咱果乡分离的细菌除表现出对氨苄西林存在耐药性以外，还对链霉素、庆大霉素、妥布霉素存在一定的耐药性，而其他牛场分离的细菌均对这三种抗生素未表现出耐药性。从整体上看，各牛场分离的细菌耐药性质均不高，除桂塘镇分离的细菌对甲氧苄胺嘧啶耐药性较高（38.89%）和召市镇分离的细菌对氨苄西林耐药性较高外（27.27%），其余分离到的细菌的耐药率均低于25%，同时有四种药物（萘啶酸、吡哌酸、加替沙星、头孢噻肟）对五个猪场分离的细菌均未出现耐药性。5个乡镇各牛场分离的细菌耐药性比较见表3。

表3 5个乡镇各牛场分离的细菌耐药性比较

3 讨论

药物使用结果调查显示，各湘西黄牛饲养场虽然都备有一些抗生素，但是由于湘西黄牛在饲养过程中发病的次数并不多，加之用药不方便，注射药物基本不曾使用，即使有个别牛发病，也是在加饲过程中将药物拌入饲料中，进行单独饲喂。所以抗生素在各牛场的使用频率均不高，且用药量也不大。

耐药结果显示各牛场的细菌耐药性存在一定差异，耐药性的产生与药物使用的情况基本一致，耐药出现频率较高的四环素类抗生素和磺胺类抗生素在牛场均有使用。这提示即使小剂量使用抗生素也会导致耐药性的产生，养殖场在使用抗生素过程中应该持谨慎态度。部分抗生素没有使用，也出现了耐药性，如咱果乡的牛场从未使用过氨基糖苷类抗生素，但是出现了对链霉素、庆大霉素、妥布霉素等抗生素的耐药。这可能是由于其他种类的抗生素使用，导致某些耐药系统被激活，从而导致该种抗生素出现耐药[5]。综合5个牛场的耐药性结果，湘西黄牛源细菌的耐药性整体偏低，但是不能忽视的是，少量的抗生素使用都将导致耐药性的出现，养殖户必须要引起重视，在黄牛发生疾病后，尽量不要使用抗生素，可以采用湘西本地的中草药方进行治疗，既可以就地取材，节约成本，还可以减少耐药性的发生。

湘西黄牛是我国国家级优良地方品种，2014年被农业部列入特色草食畜类特色农产品，湘西黄牛产业是国家精准扶贫农业产业化重点项目。龙山县地处武陵山片区，饲草资源丰富，适合发展湘西黄牛产业。本研究对龙山县主要黄牛饲养区域的湘西黄牛进行了药物使用调查和耐药性检测，能够从整体上反应出龙山县湘西黄牛药物使用过程中存在的风险以及细菌耐药性情况。本研究对促进湘西黄牛产业健康发展具有重要意义，为湘西黄牛疾病防控提供了参考。