新型隐球菌性脑膜炎的脑脊液标本检验方法分析

何俊鹏

（辽宁省丹东市第一医院，辽宁 丹东 118000）

新型隐球菌性脑膜炎是由新型隐球菌感染引起的中枢神经系统病变。新型隐球菌性脑膜炎病死率较高，临床症状不典型，通常表现为低热、间隙性头痛、恶心呕吐等症状[1]。近年来发病趋势上升，尤其好发于艾滋病或长期使用皮质类固醇激素者等免疫功能缺陷或受抑制的人群[2]。新型隐球菌性脑膜炎往往发病隐匿，症状表现复杂多样，病情较重，临床治疗反应不佳，患者病死率较高。本研究选择我院收治的70例新型隐球菌性脑膜炎患者作为本次研究入组对象，时间为2017年6月至2019年6月，采取4种不同的检验方法检测脑脊液标本，对比不同方法检测的阳性率。探讨新型隐球菌性脑膜炎的脑脊液标本检验方法。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院收治的70例新型隐球菌性脑膜炎患者为研究对象，时间为2017年6月至2019年6月，男性女性患者比例为39∶31，患者年龄29～65岁，平均年龄为（43.18±6.55）岁；病程为5 d～10个月，平均病程为（26.65±4.18）d。本研究经我院医学伦理委会的批准通过。

1.2 纳入标准与排除标准 纳入标准：①患者临床上存在头痛、发热、恶心呕吐、脑膜刺激征等临床表现，并被确诊为新型隐球菌性脑膜炎。②均知情并签署知情同意书。③病历资料齐全。排除标准：①合并急性感染性疾病者。②合并严重的肝、肾功能障碍需要紧急抢救处理者。③合并肿瘤者。④合并急性心肌梗死需要紧急抢救者。⑤合并精神性疾病无法配合检查工作者。

1.3 方法 本研究检验新型隐球菌采用4种实验室检查方法，患者入院后由主管护士抽取4管脑脊液用于实验室检查，分别进行真菌培养法、墨汁染色法、乳胶凝集试验和革兰染色法检测新型隐球菌。

1.3.1 真菌培养 沉淀处理适量脑脊液标本，并接种脑脊液沉淀物于沙氏琼脂培养基内，分别放置在25 ℃、37 ℃的环境，观察2～5 d，随后按检测方法规定进行氧化酶试验、尿酶试验，从而鉴定培养基内是否有新型隐球菌。

1.3.2 革兰染色法 取适量脑脊液制作标本涂片，经加热固定后使用草酸铵结晶紫染色1 min。用适量清水匀速冲洗涂片上的染色剂，随后再次使用碘-碘化钾溶液染色涂片1 min，并使用沙黄对涂片进行复色，复色时间为5 min。使用显微镜对涂片进行观察。

1.3.3 墨汁染色法 对制作好的脑脊液涂片使用印度墨汁进行染色，使用显微镜对脑脊液涂片进行观察。

1.3.4 隐球菌乳胶凝集法 加入120 μL脑脊液于试管中，再将加入20 μL酶类物质。将加样的试管放在56 ℃的水中水浴30 min，水浴完毕后再放置在100 ℃的水中加热5 min。室温下放置一段时间等待试管温度恢复正常后，从中提取40 μL脑脊液放置在另一试管中，随后加入1滴乳胶试剂并使用搅拌棒充分搅拌均匀，使用振动器以每分钟160转的速度震动搅拌均匀的试管让其充分反应，观察该试管内混合液是否发生凝集反应，若出现凝集反应则定义检验为阳性。

1.4 观察指标 观察指标为观察4种检测方法检测患者脑脊液标本新型隐球菌的阳性例数和阳性率。

1.5 统计学方法 数据分析采用SPSS19.0统计软件对比分析相关指标，以率表示计数资料，组间比较采用χ2检验。P＜0.05表示有显著性统计学差异。

2 结果

使用4种实验室检查方法检测患者脑脊液标本新型隐球菌，乳胶凝聚试验为4种实验室检查方法检测到70例患者中脑脊液检测阳性率最高的一种，阳性率第二为真菌培养法，阳性率较低的为墨汁染色法、革兰染色法，且乳胶凝聚试验与真菌培养法阳性率对比无统计学差异（P＞0.05），乳胶凝聚试验阳性率显著高于墨汁染色法、革兰染色法（P＜0.05）。见表1。

表1 4种实验室检查方法检测患者脑脊液标本新型隐球菌的阳性情况

3 讨论

新型隐球菌性脑膜炎是由新型隐球菌感染脑膜和（或）脑实质引起的，误诊率和病死率较高。近年来，新型隐球菌性脑膜炎的发病率逐年增加，其中多数病原体是从呼吸道吸入，形成肺部病变并通过血液循环扩散到脑膜。新型隐球菌是深部感染真菌中的重要菌种之一，广泛分布于自然界，难以被一般的染色法发现，因而称为隐球菌[3]。显微镜下新型隐球菌是一种外周具有肥厚荚膜的圆形酵母型真菌，直径一般为5～10 μm，与酵母菌相类似，又称溶组织酵母菌。该真菌最常见于被鸽粪污染的土壤。通常情况下正常人不会感染新型隐球菌，只有当人体免疫力缺陷难以抵抗新型隐球菌的入侵时，新型隐球菌才会入侵并导致真菌性脑膜炎[4]。获得性免疫缺陷综合征患者由于体内T淋巴细胞功能下降，是新型隐球菌的高发人群。临床往往通过呼吸道吸入感染新型隐球菌，再由肺部血液循环播散到身体其他部位，人体多个系统中以中枢神经系统最容易受到侵犯，导致新型隐球菌性脑膜炎。新型隐球菌性脑膜炎早期临床症状往往不典型，临床难以发现或者容易发生误诊，因新型隐球菌性脑膜炎的症状表现和结核性脑膜炎相似程度很高，增加了临床医师简便诊断新型隐球菌性脑膜炎与结核性脑膜炎的难度[5]。虽然新型隐球菌性脑膜炎的临床症状不具有特异性，但是早期诊断并治疗对于新型隐球菌性脑膜炎患者临床治疗效果和临床预后具有非常重要的意义。本研究试验采用四种方法检验新型隐球菌。真菌培养法使用的是沙氏琼脂培养基，阳性表现为浅褐色的黏稠酵母型菌落。虽然真菌培养是诊断新型隐球菌的金标准，但培养耗费时间长，培养受多种因素影响较易出现假阴性的结果，限制了其在临床上的广泛使用，临床辅助早期诊断的意义不大[6]。革兰染色下新型隐球菌通常表现为透明或半透明、大小不等的孢子样，胞核颜色为紫色，荚膜富含多糖因而革兰染色方法难以将其染色。墨汁染色法负染后镜检操作便捷，是检测新型隐球菌的最直接方法，镜检下新型隐球菌表现为圆形并伴有一圈透明荚膜的透亮菌体，在黑色背景中特别明显。在发病初期，墨汁染色需多次反复检查才能找到隐球菌。研究表明乳胶凝聚试验诊断准确性较其他三种方法更高，乳胶凝聚试验诊的抗原低度与感染程度呈正相关，感染程度越严重，抗原低度越高，而滴度降低表明治疗效果较好。研究表明，当患者处于早期感染时体内抗原滴度较低容易出现假阴性的检测结果，而当患者存在风湿因子、试验操作失误等情况时，容易出现假阳性结果。特异性的临床表现、脑脊液检验变化、病原学检测、影像学检查等对早期识别新型隐球菌具有重要作用。若误诊新型隐球菌性脑膜炎为结核性脑膜炎容易由于抗结核治疗延误患者疾病的正确治疗，同时患者因抗结核药物承受较大的精神心理压力和身体健康损伤，临床诊断时应该慎重考虑[7]。新型隐球菌性脑膜炎患者通常以头痛为首发症状就诊，因新型隐球菌性脑膜炎患者颅内压升高较为明显，头痛程度较重，可合并视神经乳头水肿或视力受损。发热通常为中低热，头痛程度与发热程度不符。结核性脑膜炎患者发热多为高热，同时结核全身中毒症状较重。新型隐球菌性脑膜炎如治疗不及时可导致死亡，除早期诊断外，及时治疗对提高生活质量、挽救患者生命十分重要[8-10]。

本研究结果显示，乳胶凝聚试验、墨汁染色法、革兰染色法、真菌培养的脑脊液检测阳性率分别为95.71%、88.57%、77.14%、67.14%；乳胶凝聚试验阳性率显著高于墨汁染色法、革兰染色法，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。可见，新型隐球菌性脑膜炎的脑脊液标本检验方法中乳胶凝聚试验的检测准确率最高，但建议临床联合采用2种或两种以上的方法检测同一份标本进行联合验证。

综上所述，新型隐球菌性脑膜炎的脑脊液标本检验方法中乳胶凝聚试验的检测准确率最高，但建议临床联合采用2种或两种以上的方法检测同一份标本进行联合验证。