两种基因位点检测在H型高血压患者中的应用研究

刘艳 李学云 郝万鹏

高血压疾病是我国目前常见的一种慢性病，对人体健康危害极大，也是各种心脑血管系统疾病最主要的危险影响因素之一，在2017年调查我国患病率高达25.2%[1]，其中在临床上，有一种特殊类型的高血压疾病，即称为H型高血压，此种类型的高血压的发病率约等于我国高血压患者总数的3/4[2]。H型高血压患者易发生脑卒中，心脑血管系统疾病突发事件的风险发生率及死亡率增加，威胁患者人身生命安全[3]。但是目前为止我国高血压病患者的整体现状就是发病率高、控制率低，原因是患者常用降压药物的选择是医师根据多年的个人临床经验及用药习惯[4]。这种情况欠缺科学性及合理性，针对H型高血压单独应用药物降压效果并不理想。故H型高血压患者的治疗效果差异很大，不同人群对五类治疗高血压的药物反应不同。药物实际疗效存在较大的个体差异，这主要是是与药物中的代谢酶和药物相互作为靶点的基础多态性相关[5]。因此，本文通过联合检测H型高血压患者血液中血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme，ACE）基因I/D位点及亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene tetra hydro folate reductase，MTHFR）基因C677T位点多态性，血清同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）和叶酸的浓度，同时测量患者血压（包括收缩压与舒张压），旨在深入研究两种基因联合检测，在H型高血压患者中两种药物联合治疗应用效果评价，为此类患者进行个体化治疗选择降压治疗药物，达到精准治疗H型高血压目的，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年6月—2020年10月在门诊及住院部确诊的H型高血压患者，年龄18～70岁，均为成年汉族患者，男女均有，男性60例，女性56例。H型高血压诊断标准，符合《中国高血压防治指南（2018年修订版）》的诊断标准[6]。在未服药的情况下测量血压，收缩压≥140 mmHg和/或舒张压≥90 mmHg），血清Hcy≥10 μmol/L，上述两个条件必须满足的人群同时测定其血清叶酸浓度，并同时检测ACE基因I/D位点和MTHFR基因C677TT位点多态性。入选患者标准，选择ACE基因I/D位点DD型且同时为MTHFR基因C677T位点TT型者，符合条件的患者共有116例，排除标准：（1）患有继发性高血压；（2）糖尿病患者及有肝肾功能病史者；（3）可能合并严重冠心病、脑卒中等疾病；（4）妊娠和哺乳期妇女；（5）未使用任何降压药物、辅助降压药物及B族维生素等可能影响临床研究的药物。116例入选者都签署了知情同意书，这个研究项目获得了医院的伦理道德委员会正式批准。

1.2 研究方法

1.2.1 基因检测 （1）ACE基因I/D位点检测：检测试剂盒原理为PCR-熔解曲线法，①样品中DNA的提取：使用EDTA抗凝血按照天根公司血液基因组DNA提取试剂盒（批号DP304-02）说明书操作方法进行提取DNA。②样品基因型检测：取2 mL提取的样品DNA加入PCR反应管，加入18 μL反应液，将PCR反应管放入SLAN-96P荧光定量PCR仪，设置反应程序，预变性95℃，2 min，循环1次，循环段50次连续循环，溶解段1次循环，根据溶解系数曲线图进行分析，读取样品TM数值，判断样品DD型。（2）MTHFR基因C677T位点检测：取采集的2 mL EDTA抗凝血添加样本稀释液，提取血液中的DNA，然后进行PCR扩增，利用特异性引物和标记物，通过MTHFR基因C677T位点的特异性，使用侧向层析分析技术方法，按照天隆公司基因扩增仪参数进行测定。

1.2.2 生化项目测定 （1）Hcy测定：采用循环酶法进行血清Hcy测定，离心获得血清放入全自动生化分析仪样品架，按照AU680仪器及三维试剂盒提供参数设置仪器的分析条件，测定血清样品中Hcy浓度。（2）叶酸测定：将测定Hcy分离的血清使用化学发光法测定，仪器参数设置按照罗氏E602全自动化学发光分析仪及同厂家试剂盒提供的参数进行，操作方法按仪器及试剂盒说明书进行操作，测定血清叶酸。

1.2.3 药物治疗 采用自身前后治疗对照法，将符合入选条件的H型高血压患者116例，服药依那普利片（批准文号：国药准字H10970079，生产厂家：北京斯利安药业有限公司，规格：10 mg×片）1片/次，1次/d，叶酸片1片/次，1次/d。连续用药2周。

1.3 观察指标

对入选的116例患者，清晨空腹抽静脉血3～5 mL，用乙二胺四乙酸二钾抗凝，抗凝剂与血液充分混匀，以备检测ACE基因I/D及MTHFR基因C677T位点使用，如不能及时检测置-80℃保存，同时用分离胶或促凝剂采血管采集3～5 mL静脉血，用以测定Hcy及叶酸。测定治疗前后患者的收缩压、舒张压、血清Hcy及叶酸水平。

1.4 统计学方法

将用上述检测方法得到的原始数据使用SPSS 22.0统计软件进行分析。计量资料用（±s）表示，采用t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

经过比较服药前后观察数据对比，收缩压、舒张压及Hcy都下降，疗效显著，叶酸浓度上升，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见统计表1。

表1 血压、Hcy及叶酸治疗前后结果对比 （±s）

表1 血压、Hcy及叶酸治疗前后结果对比 （±s）

组别 例数 收缩压（mmHg） 舒张压（mmHg） Hcy（μmol/L） 叶酸（μg/L）治疗前 116 153.80±7.12 102.30±6.14 19.10±4.91 4.70±2.21治疗后 116 122.60±6.21 81.60±4.81 9.60±2.16 17.20±3.41 t值 - 35.568 28.584 19.075 33.131 P值 - 0.000 0.000 0.000 0.000

3 讨论

3.1 精准治疗在H型高血压降压应用

原发性高血压是由于遗传与自然环境因素共同相互作用所而导致的多基因疾病，在典型原发性高血压患者中，患者伴随血清Hcy浓度在10.0 μmol/L以上的称为H型高血压。H型高血压是心脑血管系统疾病发病高发原因，根据我国H型高血压现状，降低血压和Hcy很有必要。据文献报道发现高血压伴随有高Hcy患者心脑血管事件发生风险高于正常人的10倍以上[7]。治疗H型高血压刻不容缓，但目前单独应用降压药物的降压效果并不理想，药物基因检测技术能够分析其治疗失败的原因，制定有针对性的降压药物治疗方案。是提高其治疗效果和成功率的一种个体治疗的方法[8]。因此，传统的“经验医学”模式正在向“精准医学”模式转变，而基因检测则已经成为精准治疗的一个重要方法和手段。

3.2 ACE 基因多态性与H型高血压药物治疗

ACE在人体心血管活动中起着及其重要的生物学作用，生物学效应与心血管的生理功能有密切相关的关系，在人体内，血液中ACE水平受ACE基因的影响。有研究报道，ACE基因多态性与高血压密切相关，其中ACE基因I/D的位点DD型更易患高血压[9]。DD型与高血压存在交互协同作用。研究发现，ACE基因DD型增加了脑卒中的风险，H型高血压也易引起脑卒中。血管紧张素转移酶抑制剂（ACEI）是一类在临床经常使用的降压药，ACEI可以抑制ACE活性，ACE基因多态性是ACEI类药物发生不同反应的原因。故对DD基因型的H型高血压患者应该建议首选ACEI类降压治疗药物，提高H型高血压患者的治疗效果[10]。ACEI类存药的作用靶点是ACE，有研究显示，ACE基因I/D位点DD型个体血浆ACE的活性明显升高，依那普利用药治疗后血液ACE活性显著的降低[8]。

3.3 MTHFR基因多态性与Hcy及叶酸的关系

MTHFR是叶酸代谢与Hcy代谢中的重要关键酶，研究表明，MTHFR基因C67TT位点发生突变，导致其活性下降，其中TT基因型人群的酶活性可以降低70%[11]。引起叶酸代谢通路功能发生障碍，从而直接导致血浆Hcy浓度的升高，血浆中Hcy积累，持续积累后会造成高Hcy血症，如果患者有高血压，便发展为H型高血压，同时还要提示MTHFR基因C677T位点TT基因型突变与H型高血压的高发病危害性风险密切相关[12]。MTHFR基因多态性TT基因型主要具有血清高Hcy与低叶酸水平，叶酸是Hcy体内代谢的重要底物，对叶酸的利用率下降，目前人们普遍认为补充叶酸是降低Hcy最有效的途径。研究说明，临床应用叶酸对于治疗H型高血压具有疗效[13]。

3.4 H型高血压精准治疗效果及相关指标

治疗前后血压值变化，是H型高血压疗效的评价指标。H型高血压是以血压和Hcy升高为首要特征的全身代谢性疾病，主要原因是体内的代谢辅助因子叶酸等缺乏引起血清Hcy水平的升高。在临床应用中，单纯依那普利治疗效果不佳，叶酸可使血浆Hcy水平降低，本研究是基于在ACE基因DD型与MTHFR基因TT基因型检测的基础上，ACEI类降压药依那普利辅以叶酸联合使用降低血压及Hcy，使得两者具有良好的协同作用。给予H型高血压患者依那普利联合叶酸治疗可以提高其疗效[14-15]。本研究结果，收缩压、舒张压、Hcy治疗前后三者下降，叶酸升高，四项观察指标P＜0.001，差异具有统计学意义。

综上所述，对H型高血压患者进行联合检测ACE基因I/D位点及MTHFR基因C677T位点多态性，可以及时有针对性的选择用药，达到早期精准治疗的目的，可以少走弯路。ACE基因DD型与MTHFR基因TT型患者使用依那普利联合叶酸治疗H型高血压患者，能起到快速、精准、高效的降Hcy及血压治疗效果。