秃疮花外用喷剂制剂的筛选试验

张莉敏，常攀峰，马志宏，孙春香，苟想珍，党 岩

(甘肃省畜牧兽医研究所，甘肃 平凉 744000)

秃疮花(俗称红荗草，勒马回)是罂粟科(Papaveraceae)秃疮花属(Dicranostigma) 的植物，在我国主要分布于甘肃、西藏、青海、陕西和四川等地。据文献记载：味苦、涩、性寒，凉，有小毒；有清热解毒、消肿止痛、杀虫、治疗扁桃体炎、结核、疥癣、外伤、羊口疮等疾病。从上世纪80年代开始，我国许多研究者对秃疮花的化学成分和秃疮花的药理作用进行了研究。1980年李镇从秃疮花中分离出异紫堇碱；1981年畅行若等从秃疮花中提取了4种结晶，经鉴定分别为：异紫堇碱、原阿片碱、紫堇碱、二十九碳醇；卢贤昭等研究表明，秃疮花对结核病有良好的治愈作用，治愈疗效79.5%以上. 陈正山、龚艳妮等的研究证明秃疮花对动物免疫系统和肿瘤均有作用。

以甘肃陇东特色药用植物秃疮花(俗称红荗草，勒马回)为药材，研制具有抗菌消炎及抗病毒的兽医临床制剂，项目以秃疮花制剂生物学功能为指标，用物理化学提纯法、细菌计数法和正交试验设计等对制剂进行筛选，并开展了秃疮花制剂工艺、药效学、药物代谢动力学以及化学成分的研究工作和临床应用试验。本文仅就秃疮花外用喷剂的筛选实验进行论述，其它实验部分另文发表。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 电热培养箱 、电子分析天平等使用甘肃省畜牧兽医研究所中心实验室仪器。

1.1.2 菌株 副伤寒沙门氏菌为甘肃省畜牧兽医研究所实验室保存的标准菌株 。

1.1.3 药材 秃疮花采自于甘肃省平凉市，由中国科学院兰州化学物理研究所天然药物实验室鉴定；连翘、鱼腥草、黄芩、黄柏、金银花、大青叶、甘草和苍术采购于甘肃省医药公司，由中国科学院兰州化学物理研究所天然药物实验室鉴定。

1.1.4 实验试剂 牛肉膏 、葡萄糖、蛋白胨、磷酸氢二钾 、琼脂 、酚红 、N aO H 、N aCl购自于上海生工 ，其余试剂均为国产或进口分析纯 ；秃疮花唇肤康喷剂B液由甘肃省畜牧兽医研究所制备。

1.2 方法

1.2.1 连翘、鱼腥草、黄芩和黄柏交互作用筛选试验 以正交实验表L16(45)为水平因素组合进行不同制剂配制，将实验用的副伤寒沙门氏菌株进行纯化后，接种于THB营养肉汤中，37℃或24℃培养24 h后，分别用平皿计数法进行计数配制成10 000 cfu/mL的菌株悬液；将菌株悬液100 μL,分别加入6 mL各制剂与THB营养肉汤按1∶1的比例制备的培养肉汤中,37℃培养16 h后用平皿计数法进行计数。最后计算抑制率。

1.2.2 金银花、大青叶、甘草和苍术交互作用筛选试验 在连翘、鱼腥草、黄芩和黄柏交互作用实验的基础上，以连翘50 g、鱼腥草25 g、黄芩37.5 g和黄柏37.5 g为基础药，用上面的正交实验表L16(45)为水平因素组合进行不同制剂配制，将实验用的副伤寒沙门氏菌株进行纯化后，接种于THB营养肉汤中，37℃或24℃培养24 h后，分别用平皿计数法进行计数配制成10 000 cfu/mL的菌株悬液；将菌株悬液100 μL,分别加入6 mL各制剂与THB营养肉汤按1∶1的比例制备的培养肉汤中,37℃培养16 h后用平皿计数法进行计数。最后计算抑制率。

1.2.3 秃疮花喷剂相互作用筛选试验 以秃疮花唇肤康喷剂相互作用实验结果表中的配方，进行不同配方制剂配制，将不同配方的药物配成400 mL的水溶液用于实验。将实验用的副伤寒沙门氏菌株进行纯化后，接种于THB营养肉汤中，37℃或24℃培养24 h后，分别用平皿计数法进行计数配制成10 000 cfu/mL的菌株悬液；将菌株悬液100 μL,分别加入6 mL各制剂与THB营养肉汤按1∶1的比例制备的培养肉汤中,37℃培养16h后用平皿计数法进行计数。最后计算抑制率。

2 结果

2.1 连翘、鱼腥草、黄芩和黄柏交互作用筛选试验结果

从连翘、鱼腥草、黄芩和黄柏交互作用实验结果可以看出：从因素上讲，连翘>黄芩>黄柏>鱼腥草；从水平上讲，连翘的第4水平最好，黄芩的第2水平最好，黄柏的第3水平最好，鱼腥草第3水平最好。根据正交实验的原则，我们选择连翘50g、鱼腥草25g、黄芩37.5g和黄柏37.5g为进一步进行秃疮花唇肤康喷剂A液筛选的比例基础。

表1 连翘、鱼腥草、黄芩和黄柏交互作用水平因素表 g

表2 连翘、鱼腥草、黄芩和黄柏交互作用实验结果表

2.2 金银花、大青叶、甘草和苍术交互作用筛选试验结果

从金银花复方中药外用制剂中的金银花、板蓝根、甘草和苍术交互作用实验结果可以看出：从因素上讲，金银花>大青叶>甘草>苍术；从水平上讲，金银花的第4水平最好，大青叶的第4水平最好，甘草的第3水平最好，苍术第3水平最好但与第2水平差别不大。根据正交实验的原则，结合连翘、鱼腥草、黄芩、黄柏交互作用实验结果和金银花、大青叶、甘草和苍术交互作用实验结果，我们筛选出：连翘3-4份、鱼腥草2-3份、黄芩3-4份、黄柏3-4份、金银花3-4份、大青叶3-4份、甘草2-3份和苍术2-3份为秃疮花唇肤康喷剂A液的基础比例配方。

表3 金银花、大青叶、甘草和苍术交互作用水平因素表

表4 秃疮花唇肤康喷剂A液交互作用实验结果表

2.3 秃疮花喷剂相互作用筛选试验结果

为确保实验结果明显，本实验将应用浓度进行了2倍的稀释，虽然抑菌率低但能更清楚地看出各配方的抑菌率之间的差异。从秃疮花唇肤康喷剂相互作用实验结果看，秃疮花唇肤康喷剂(秃疮花唇肤康喷剂A液+秃疮花唇肤康喷剂B液)抑制副伤寒沙门氏菌的效果比秃疮花唇肤康喷剂B液和秃疮花唇肤康喷剂A液好；秃疮花唇肤康喷剂配方4抑制副伤寒沙门氏菌的作用最好，因此将配方4筛选为秃疮花唇肤康喷剂的基础比例配方。

表5 秃疮花唇肤康喷剂相互作用实验结果表

3 讨论

目前在我国绿色环保战略实施的背景下，社会广泛关注食品安全，呼唤无公害产品及绿色畜产品生产，尤其是应用于食源性动物药品迅速转向低毒、无残留、高效等方面发展。本项目以传统中草药特有的低毒易代谢的药物成分解决动物外用消炎药物的环境污染问题；以传统中草药特有的抗微生物的成分及作用的多样性和协同性解决病原微生物的药物耐药性问题；以传统中草药特有的药物有效成分的安全性和对动物机体外损组织的免疫调节功能解决动物皮肤损伤组织细胞的快速修复生长问题。

金银花、苍术、连翘、黄芩、黄柏、大青叶、鱼腥草和甘草多是清热解毒类中草药，这些中草药中多含有有机酸、生物碱、苷类或甙类、多糖、黄酮、甾醇、挥发油和微量元素等，均有抗微生物和抗炎的作用，同时这些中草药之间有较好的协同作用。上述这些中草药不仅具有良好抗微生物作用，而且有调节动物机体免疫系统的机能从而促使动物机体的伤口愈合。中草药中的成分易于分解代谢，对人类的绿色环保和公共卫生有重要的意义。试验结果表明，金银花、苍术、连翘、黄芩、黄柏、板蓝根、鱼腥草、甘草和秃疮花制剂共用有良好的抗微生物、抗炎和促进伤口愈合协同作用。我所多年从事秃疮花等中草药的研究工作，在研制秃疮花冲剂、针剂、擦剂和口服胶囊的基础上，研制秃疮花唇肤康喷剂，以解决兽医临床操作困难，使治疗在确保疗效的基础上变的省时省力。

按中草药君臣佐使的复方原则，秃疮花唇肤康喷剂用清热解毒抗微生物类药秃疮花为君；以清热解毒抗微生物类药金银花、连翘、黄芩为臣，使秃疮花唇肤康喷剂的解毒抗微生物作用范围增大和作用效果增强；以清热解毒抗微生物类药黄柏、鱼腥草为臣使秃疮花唇肤康喷剂的抗炎症抗溃疡及抗微生物作用效果增强；以利湿消炎类药苍术为佐，与黄柏等协同增强复方的利湿抑酸抑疡及保护粘膜作用，以温性清热解毒类药甘草为使调和君臣佐药，使复方的抗炎康复作用效果增强及利于药物有效成分到达病位和保护粘膜。