西黄丸联合GP方案对晚期乳腺癌患者细胞免疫功能的影响

徐炜 丁少坤 石露露

乳腺癌是来源于乳腺上皮细胞的恶性肿瘤，近年来，其发病率和病死率居高不下，严重危害女性健康[1,2]。乳腺癌根治术是治疗该病的重要手段，但多数患者确诊时已进展为晚期，手术难度大，且术后复发率高。因此，临床常采用手术和化疗相结合的综合治疗措施，能够有效杀灭肿瘤细胞，延长患者生存期。然而，长期使用化疗药物容易产生消化道、骨髓抑制等不良反应，并造成机体免疫功能紊乱[3]。近年来，传统中医药在恶性肿瘤的辅助治疗中发挥了重要作用[4]。本研究采用西黄丸联合GP方案治疗晚期乳腺癌，观察联合治疗方案对患者细胞免疫功能的影响，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月至2019年4月我院收治的晚期乳腺癌患者110例，随机分为对照组和观察组，每组55例。对照组年龄33～64岁，平均年龄(42.75±5.48)岁：病程2～6年，平均(5.00±0.62)年；TNM分期：Ⅲ期30例，Ⅳ期25例。观察组年龄35～66岁，平均年龄(43.12±5.56)岁：病程2～8年，平均(5.09±0.68)年；TNM分期：Ⅲ期32例，Ⅳ期23例。2组基线资料比较差异无统计学意义，具有可比性(P>0.05)。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准[5,6]：①符合晚期乳腺癌诊断标准，均经临床症状体征检查、实验室检查、病理学检查确诊；②TNM分期均为Ⅲ、Ⅳ期者；③预计生存时间≥3个月；④未发生远处组织器官转移者；⑤近1个月内未接受其他抗肿瘤治疗者；⑥患者及家属均签署知情同意书。

1.2.2 排除标准：①已发生远处转移者；②预计生存时间<3个月；③合并心脑血管病或肝肾等重要脏器功能不全者；④依从性差者；⑤过敏体质或对使用药物过敏者。

1.3 治疗方法 2组均给予GP化疗方案：吉西他滨(山东罗欣药业)1 000 mg/m2，第1、8天，静脉滴注；顺铂(云南植物药业)20 mg/m2，第2～5天，静脉滴注。观察组在化疗基础上加用西黄丸(北京同仁堂)治疗，3 g/次，2次/d。21 d为1个周期，2组均持续2个疗程。

1.4 观察指标

1.4.1 标本采集:分别于治疗前后采集患者清晨空腹肘静脉血4 ml，分2管，一管3 000 r/min离心5 min取上清，另一管加入3 ml淋巴细胞分离液，2 000 r/min离心20 min提取外周血单个核细胞(PBMCs)。

1.4.3 细胞因子:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定Th1/Th2细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-6)、Th17/Treg细胞因子(IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β)。

1.4.4 转录因子:Trizol提取PBMCs总RNA，反转录试剂盒合成cDNA第一链，于7500型荧光定量PCR仪进行扩增反应，设β-actin为内参照基因，根据扩增曲线计算T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA表达量。

2 结果

表1 2 组T 淋巴细胞亚群比较

2.2 2组Th1/Th2细胞因子比较 2组治疗前TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-6比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组治疗后TNF-α、IFN-γ均较治疗前升高，IL-4、IL-6均较治疗前降低(P<0.05)，且观察组TNF-α、IFN-γ高于对照组，IL-4、IL-6低于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 2 组Th1/Th2 细胞因子比较

2.3 2组Th1/Th2比较 2组治疗前Th1、Th2、Th1/Th2比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组治疗后Th1、Th1/Th2均较治疗前升高，Th2均较治疗前降低(P<0.05)，且观察组Th1、Th1/Th2高于对照组，Th2低于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 2 组Th1/Th2 比较

2.4 2组Th1/Th2转录因子比较 2组治疗前T-bet、GATA-3 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组治疗后T-bet mRNA表达均较治疗前升高，GATA-3 mRNA表达均较治疗前降低(P<0.05)，且观察组T-bet mRNA表达高于对照组，GATA-3 mRNA表达低于对照组(P<0.05)。见表4。

2.5 2组Th17/Treg比较 2组治疗前Th17、Treg、Th17/Treg比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组治疗后Th17、Treg、Th17/Treg均较治疗前降低(P<

表4 2 组Th1/Th2 转录因子比较

0.05)，且观察组Th17、Treg、Th17/Treg低于对照组(P<0.05)。见表5。

表5 2 组Th17/Treg 比较

2.6 2组Th17/Treg细胞因子比较 2组治疗前IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组治疗后IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β均较治疗前降低(P<0.05)，且观察组IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β低于对照组(P<0.05)。见表6。

表6 2 组Th17/Treg 细胞因子比较

2.7 2组Th17/Treg转录因子比较 2组治疗前RORγt、Foxp3 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组治疗后RORγt、Foxp3 mRNA表达均较治疗前降低(P<0.05)，且观察组RORγt、Foxp3 mRNA表达低于对照组(P<0.05)。见表7。

表7 2 组Th17/Treg 转录因子比较

3 讨论

辅助性T细胞Th分为Th1、Th2两个亚群，前者分泌TNF-α、IFN-γ等细胞因子，能够促进单核巨噬细胞吞噬、杀灭肿瘤细胞，并抑制肿瘤细胞增殖；后者分泌IL-4、IL-6等细胞因子，能够抑制抗肿瘤免疫应答，同时促进体液免疫应答[11]。正常情况下，Th1、Th2维持动态平衡，多种恶性肿瘤患者表现为Th1/Th2免疫紊乱，即Th1向Th2漂移，Th1/Th2比值下降，机体抗肿瘤免疫受抑[12,13]。另外，转录因子T-bet、GATA-3在调控Th1、Th2细胞分化过程中发挥关键作用。本研究结果显示，2组治疗前Th1、Th2、Th1/Th2、TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-6、T-bet、GATA-3 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组治疗后Th1、Th1/Th2、TNF-α、IFN-γ、T-bet mRNA表达均较治疗前升高，Th2、IL-4、IL-6、GATA-3 mRNA表达均较治疗前降低(P<0.05)，且观察组Th1、Th1/Th2、TNF-α、IFN-γ、T-bet mRNA表达高于对照组，Th2、IL-4、IL-6、GATA-3 mRNA表达低于对照组(P<0.05)，说明Th1/Th2漂移在乳腺癌发生发展中发挥重要作用，西黄丸联合GP方案治疗晚期乳腺癌能够纠正Th1/Th2免疫紊乱，这可能是其增强细胞免疫功能的机制之一。

Th17、Treg是近年来新发现的T淋巴细胞亚群成员，前者可通过分泌IL-17、IL-22等细胞因子诱导炎性反应并促进新生血管形成，从而有利于肿瘤增殖、侵袭和转移；后者能够分泌IL-35、TGF-β等细胞因子抑制细胞免疫应答，从而介导肿瘤免疫逃逸[14,15]。研究发现，恶性肿瘤患者Th17、Treg细胞比例、Th17/Treg均较正常人显著增加，参与调控抗肿瘤免疫应答[16,17]。RORγt、Foxp3分别是诱导Th17、Treg细胞分化的特异性转录因子，其表达降低能够抑制Th17、Treg细胞分化，相反其表达增加能够促进Th17、Treg细胞分化[18]。本研究结果显示，2组治疗前Th17、Treg、Th17/Treg、IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β、RORγt、Foxp3 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组治疗后Th17、Treg、Th17/Treg、IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β、RORγt、Foxp3 mRNA表达均较治疗前降低(P<0.05)，且观察组Th17、Treg、Th17/Treg、IL-17、IL-22、IL-35、TGF-β、RORγt、Foxp3 mRNA表达低于对照组(P<0.05)，说明Th17、Treg细胞及其分泌的细胞因子在乳腺癌患者中高表达，西黄丸联合GP方案治疗晚期乳腺癌能够调控Th17、Treg细胞比例及功能，从而改善细胞免疫功能紊乱。

综上所述，西黄丸联合GP方案治疗晚期乳腺癌能够有效调控Th1、Th2、Th17、Treg细胞比例及相关细胞因子、转录因子表达，从而改善细胞免疫功能，有较大临床应用价值。