重庆某三甲医院冠心病患者叶酸基因多态性与利用率分析*

盛芳芳，何 跃，雷 健，黄景彬

（中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院药剂科，重庆 400037）

冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）是由于脂质代谢不正常，血液中的脂质沉着在原本光滑的动脉内膜上，形成类似粥样的白色斑块，造成动脉腔狭窄，血流受阻，导致心脏病。冠心病被称为发达国家居民健康的头号杀手，在发展中国家的发病率也日趋升高［1］。目前尚不清楚冠心病的发病机制，可能是遗传与环境相互作用的结果。同型半胱氨酸（HCY）是导致冠心病的危险因素之一［2－4］。叶酸是人体必需的 B 族维生素，在人体中可转变为四氢叶酸（FH4），进而降低血液中HCY 水平，亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是叶酸影响HCY代谢的关键酶［5－7］。不同 MTHFR 基因型冠心病患者对叶酸的利用率差异较大，MTHFR C677T 突变致该酶活性下降，HCY 再甲基化障碍，突变纯合子的酶活性大约只有正常野生型纯合子酶活性的60% ，A1298C 和C677T 双杂合子的酶活性为野生型的 50% ～ 60%［8－12］，677T 单位点突变、1298C 单位点突变、1298C 和 677T双位点突变酶的活性分别为野生型酶的45%，68%，41%。纤溶酶原激活剂抑制因子1（PAI－1）是体内纤溶酶原激活的主要抑制剂，稳定型心绞痛患者的血浆浓度明显升高，提示PAI－1 可能是冠心病患者病情恶化及急性冠脉事件发生的病理生理基础。27PAI－1 位点突变后，体内纤溶活性降低，形成血栓的风险升高。目前，叶酸对人体健康影响最大的基因多态位点为MTHFR C677T 和 A1298C 位点，以及 27PAI－ 1 位点。本研究中分析了需口服叶酸冠心病患者的MTHFR677，MTHFR1298，27PAI－1 3 个基因位点，探讨了叶酸治疗冠心病基因多态性的分布情况及利用率，以最大限度保障药物的有效性和安全性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入标准［9］：疑似冠心病和有稳定型心绞痛症状，无论有无呼吸困难；新出现的心力衰竭或左心室功能障碍，怀疑为冠心病；急性冠状动脉综合征（ACS）发病后1 年内无症状或症状稳定，或近期行血运重建；评估验前概率（PTP）与冠心病的临床可能性→其他原因所致胸痛→适当治疗及检查；根据冠心病的临床可能性选择相关影像学或功能学检查；评估不良事件发生风险，以指导后续治疗。

排除标准：叶酸禁忌证。

病例选择：选取我院心血管内科2018 年1 月至2020 年5 月收治的符合冠心病诊断标准并需口服叶酸治疗的患者 797 例，对患者进行叶酸 MTHFR 677，MTHFR 1298，27PAI－1 3 个位点的基因检测。

1.2 仪器与试药

仪器：Fluotec 48E 型微量荧光检测仪（西安天隆科技有限公司）；SoravallTMLegendTMMicro17R 型离心机（美国 Thermo Scientific 公司）；Vortex － 5 型旋涡混合器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）。

试药：叶酸片（天津力生制药股份有限公司，国药准字H12020215，规格为每片5 mg）；测序反应通用试剂盒（北京华夏时代基因科技发展有限公司）。

1.3 方法

取1 mL 核酸纯化试剂置 EP 管中，加入 150 μL 血样，混匀，静置，待血样澄清后，常温离心（转速为3 500 r／min）5 min；弃上清液，再加入1 mL 核酸纯化试剂，混匀细胞，常温离心（转速为 3 500 r／min）5 min；弃去上清液，加入35 μL 核酸纯化试剂，混匀，稍加涡旋，离心机瞬时离心，放置 30 min；精密吸取 1.5 μL 加入试剂盒中，采用荧光聚合酶链式反应法检测患者的MTHFR 677，MTHFR 1298，27PAI－1 基因型。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 叶酸基因检测结果

我院就诊的冠心病患者中，MTHFR 677 突变型的突变率为 60.73% ，高于野生型的 39.27% ；MTHFR 1298 突变型的突变率为 37.92% ，低于野生型的62.08% ；27PAI－ 1 突变型的突变率为 94.32% ，高于野生型的5.68%。详见表1。

表1 我院就诊冠心病患者叶酸基因型分布情况［例（%）］Tab.1 Efficacy－related genotype distribution of folic acid in CHD patients in our hospital［case（%）］

2.2 叶酸突变基因型分布

叶酸突变基因型患者中，MTHFR 677 突变基因以突变纯合型为主，占 75.83% （367 ／484）；MTHFR 1298和27PAI－1 突变基因型均以突变杂合型为主，分别占86.78%（256 ／295）和 61.90%（442 ／714）。详见表 2。

表2 我院就诊冠心病患者叶酸突变基因型分布情况［例（%）］Tab. 2 Genotype distribution of folate mutation in CHD patients in our hospital［case（%）］

2.3 叶酸MTHFR 基因型和利用率分析

按MTHFR 基因位点对检测数据进行分析，排除仅有MTHFR 677 或MTHFR 1298 基因型数据的患者，结果见表3。对应 MTHFR 677 和 MTHFR 1298 基因型与叶酸利用率的关系见图1，患者的叶酸利用率分布情况见表4。由表4 可知，我院就诊的冠心病患者中，叶酸利用率100%的仅占18.77%，80%以上的占36.25%，60%以下的占31.24%，不超过25%的占15.94%。可见，患者对叶酸的利用率总体偏低，普遍存在叶酸代谢障碍。

表4 我院就诊冠心病患者叶酸利用率分布情况（%）Tab.4 Distribution of the utilization rate of folic acid in CHD patients in our hospital（%）

图1 MTHFR 677 和MTHFR 1298 基因型与叶酸利用率的关系Fig.1 Relationship between MTHFR 677 and MTHFR 1298 genotypes and the utilization rate of folic acid

表3 我院就诊冠心病患者MTHFR 677 和MTHFR 1298 基因型分布情况［例（%），n ＝778］Tab.3 Distribution of MTHFR 677 and MTHFR 1298 genotypes in CHD patients in our hospital［case（%），n ＝778］

3 讨论

本研究结果表明，我院就诊的冠心病患者中MTHFR 677 基因突变率为 60.73% （484 ／797），以纯合型突变为主（367 ／484，75.83% ）；MTHFR 1298 基因突变率为 37.92%（295 ／778），以突变杂合型为主（256 ／295，86.78%）；27PAI－1 基因突变率高达94.32%（714／757），以突变杂合型为主（442 ／714，61.90% ）。WANG 等［10］指出，MTHFR 677 在中国南方、中部、北方的突变率分别为 32%，60%，81%；MTHFR 1298 在南方、中部、北方的突变率分别为35%，22%，20%。本研究结果显示，我院就诊的冠心病患者MTHFR 677 和MTHFR 1298 多态位点基因突变率均高于南方、中部和北方，说明中国人群MTHFR 677 和MTHFR 1298 多态位点基因型频率存在显著的地域差异。

根据MTHFR 677 和MTHFR 1298 基因型与叶酸利用率的关系，我院就诊的冠心病患者叶酸利用率为100%的仅占18.77%，80%以上的占36.25%，60%以下的占31.24%，不超过25%的占15.94%。说明我院就诊的大部分冠心病患者的机体不能正常利用叶酸，叶酸转化为甲基叶酸、甲基叶酸转化为四氢蝶呤的活性受限，同时叶酸代谢障碍会引起HCY 升高，建议加强监测冠心病患者的血液HCY 浓度，必要时配合服用叶酸、维生素 B12、维生素 B6。

冠心病患者的血浆PAI－1 水平明显增高，前瞻性研究也证实血浆 PAI－ 1 与冠心病事件密切相关［11－12］，提示PAI－1 在冠心病发病过程中可发挥重要作用。本研究中，我院就诊的冠心病患者的27PAI－1 位点突变率高达94.32%，即患者体内纤溶活性降低，形成血栓的风险升高，建议密切监测患者的凝血功能。

综上所述，冠心病患者在服用叶酸前进行叶酸基因检测，可最大限度地保障药物的有效性和安全性，既可为患者制订个体化治疗方案，也可为叶酸的合理使用提供依据。