天然橡胶胶乳避孕套微生物污染的检测分析及建议

卜红宇 滕贇 张茜 内蒙古自治区药品检验研究院 （内蒙古 呼和浩特 010020）

内容提要：采用验证的微生物检查法对不同厂家天然橡胶胶乳避孕套的微生物污染进行检测分析，探讨引起微生物污染差异的特点和规律。结果表明，16个厂家20批供试品需氧菌总数为0～500CFU/g；霉菌和酵母菌总数为0～10CFU/g；大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌及白色念珠菌均未检出。不同厂家避孕套需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数差异很大，应加强生产单位的监督管理，规范生产，完善提高避孕套微生物限度标准。

天然胶乳橡胶避孕套在世界各国得到广泛应用，是能够有效避孕、阻隔某些疾病传播的医用器具，其卫生指标直接影响避孕套的使用安全。我国现行国家标准《GB7544-2019天然橡胶胶乳男用避孕套技术要求与试验方法》建议不得检出金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌和肠杆菌科细菌，但标准未对需氧菌、霉菌和酵母菌总数限度作明确规定[1]。《GB15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准》规定了包括手套、纸巾、口罩、避孕套等卫生用品的微生物指标[2]，但该标准在国内现行避孕套监管中未得到充分重视[3]。此外，白色念珠菌是外阴阴道念珠菌病的主要感染菌种[4]，但在上述标准中均未作规定。而且目前未见关于避孕套污染的研究。所以本试验对避孕套需氧菌、霉菌和酵母菌总数、金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌以及白色念珠菌进行检测，分析微生物污染以及安全风险，为生产厂家控制监测微生物污染提供理论依据，为避孕套制定科学的限度标准提供数据支持。

1.材料与方法

1.1 一般材料

培养基：蛋白胨水、胰酪大豆胨琼脂、沙氏葡萄糖液体、沙氏葡萄糖琼脂、甘露醇氯化钠琼脂、胰酪大豆胨液体、麦康凯琼脂、麦康凯液体、十六烷三甲基溴化铵琼脂、念珠菌显色琼脂（美国BD公司），吐温-80、卵磷脂（东京化成工业）。

菌种：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26003]、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC(B)10104]、大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44102]、白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F) 98001]（中国食品药品检定研究院）。

样品：天然橡胶胶乳避孕套，生产厂家A（批号：70802），B（批号：20190306），C（批号：180602），D（批号：16114、18120106 003），E（批号：18122108），F（批号：17041101），G（批号：LH180912），H（批号：18086JD），I（批号：19010702），J（批号：18010611），L（批号：1811/10），M（批号：23807AC、23851AB），N（批号：U8I810S），O（批号：1000745338、1000659343），P（批号：SD18091），Q（批号：1808021、1811011），S（批号：23851AB）。

仪器：AC2-4SI型生物安全柜（Esco集团），PL602-S型电子天平（梅特勒托利多集团），MIR-554型培养箱（日本三洋公司），高压蒸汽灭菌柜（德国洁定有限公司），超低温保存箱（海尔集团），Easy MIX型均质器（生物梅里埃法国公司），移液器（德国艾本德科学公司）。

1.2 方法

1.2.1 菌液制备

取铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及白色念珠菌的新鲜培养物，制成5000～10000CFU/mL的菌悬液。

1.2.2 供试液制备

取供试品10g，用无菌棒与镊子展开，置于均质袋中，加入含吐温-80、卵磷脂的蛋白胨水至100mL，用均质器拍打，作为1:10的供试液；另取1:10供试液20mL，加80mL TSB，摇匀，制成1:50供试液。

1.2.3 微生物检查方法

需氧菌总数计数：平皿法，取1:10供试液1mL，注入直径9cm培养皿；稀释法，取1:50供试液1mL，注入直径9cm培养皿。霉菌及酵母菌计数：平皿法，取1:10供试液5mL，注入直径15cm培养皿。控制菌检查方法：取1:10供试液10mL加入含吐温-80、卵磷脂的增菌培养液。分别依2020年版《中国药典》进行检查[5]。

2.结果

天然橡胶胶乳避孕套微生物污染检测结果见表1。

表1.天然橡胶胶乳避孕套微生物污染检测结果

由表1可见，供试品需氧菌总数为0～500CFU/g；霉菌和酵母菌总数为0～10CFU/g；大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌及白色念珠菌均未检出。不同厂家的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数差异显著，其中B、G、J、L、N及Q厂家需氧菌污染较严重，B、J、M及Q厂家真菌污染较严重，说明不同厂家的产品质量存在较大差异。此外，Q厂家中2批供试品需氧菌、霉菌和酵母菌数差异显著，Q-2需氧菌总数高达500CFU/g，霉菌和酵母菌数高达10CFU/g，这提示该厂家生产过程存在微生物污染风险点，需要强化生产程序标准化管理。

3.讨论

《GB15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准》规定避孕套微生物指标为：细菌菌落总数≤20，真菌总数、大肠菌群、致病性化脓菌不得检出；若按此标准进行判定，需氧菌总数有8批不合格，霉菌及酵母菌总数有12批不合格，不合格率为60%。《中国药典》2020年版阴道给药制剂的限度标准为：需氧菌总数（CFU/g）102；霉菌和酵母菌数（CFU/g）101；不得检出铜绿假单胞菌（1g中）、金黄色葡萄球菌（1g中）、白色念珠菌（1g中）。若按此标准进行判定，N厂家及Q厂家（Q-2）两批供试品需氧菌总数不符合规定，不合格率为10%。该研究结果为制定科学的限度标准提供了数据支撑，应结合考虑产品生产、销售及使用的实际情况，制定符合我国监管的切实可行的标准。

橡胶避孕套产品目前没有较好的灭菌方法[6,7]，所以生产商需要建立过程管理控制程序，在整个生产过程中监测控制微生物的污染，包括生产环境、设备、原料、人员等方面，使微生物负载降至最低。另外，生产商也应该监测避孕套产品在存放过程中微生物的变化规律及影响因素，以确保产品在有效期内不会受到微生物污染。避孕套在使用中直接接触人体黏膜组织，极易引起细菌或真菌感染，造成使用者身心伤害，所以建议将避孕套列为无菌医疗器械管理。

本研究检测分析了16个厂家20批供试品的微生物污染数据，不同厂家避孕套需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数差异很大，若按照《GB15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准》中避孕套的微生物指标进行判定，不合格率为60%。该研究为制定科学合理的避孕套限度标准提供数据支撑。