多发性骨髓瘤患者EB病毒检测及其临床意义

晏建国，罗 萍，胡 飞，欧阳贤凤，李金凤，朱文凤，郭 瑛

（九江市第一人民医院血液内科，江西 九江 332000）

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一种以浆细胞克隆性增殖为特征的血液系统恶性肿瘤，占血液系统恶性肿瘤第2 位，其病因及机制尚不清楚[1]。EB 病毒（Epstein-Barr Virus，EBV）属于人疱疹病毒γ 亚科，是一种嗜人类淋巴细胞的双链线性DNA 病毒，也是第一个被证实与人类肿瘤相关的病毒，全世界约有90%以上的成年人曾感染过EBV，但绝大多数仅表现为自限性潜伏性感染[2，3]。我国感染EBV 的患者年龄比西方国家年轻[4]。因此，在我国研究EBV 感染与肿瘤的关系显得尤为重要。研究表明EBV 和其他疱疹病毒一样，Burkitt 淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤和弥漫性大B 细胞淋巴瘤等不同类型的B细胞源性淋巴恶性肿瘤密切相关[5]。B 淋巴细胞恶性肿瘤可由EBV 感染的B 细胞克隆引起，有证据表明持续的EBV 感染可导致疾病进展[6]。但EBV 感染与MM 之间的关系仍有争议[7]，需要进一步的研究。本研究通过检测MM 患者外周血中EBV-DNA 拷贝数，探讨EBV 感染与MM 的潜在关系及其对MM 患者临床特征、分期、预后的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2012 年5 月～2020 年2 月在九江市第一人民医院初诊的MM 患者110 例被纳入MM 组，其中男性患者53 例，女性患者57 例，年龄38～85 岁，所有患者诊断均符合《血液病诊断及疗效标准》多发性骨髓瘤诊断标准[8]。依照异常增殖的免疫球蛋白类型分为IgG 型45 例（40.04%），IgA 型42 例（37.50%），IgD 型6 例（5.77%），κ 轻链型7 例（6.73%），入轻链型7 例（6.73%），不分泌型3 例（2.88%）。按照国际分期体系（ISS）临床分期，I 期18例（16.36%），Ⅱ期22 例（20.00%），Ⅲ期70 例（63.64%）。按照梅奥骨髓瘤分层（mSMART）为基础国际危险度分层，低危32 例（29.09%），中危43 例（39.09%），高危35 例（31.82%）。另选取同一时间段在九江市第一人民医院就诊的110 例没有任何类型的血液系统疾病和其他癌症且骨髓象大致正常患者作为正常对照组，其中男性患者55 例，女性患者55 例。

1.2 方法 通过实时荧光定量PCR 检测所有受试者外周血EBV-DNA 拷贝数。按EBV-DNA 拷贝数分为EBV-DNA 阳性（≥500 IU/ml）和EBV-DNA 阴性（＜500 IU/ml）。取2～4 mlEDTA 抗凝外周血进行检验，加入淋巴细胞分离液进行分离，将白细胞层吸出，使用0.9%的氯化钠溶液洗涤白细胞层，再加入50 μl DNA 提取液，充分混匀后在100 ℃的恒温环境内反应10 min，再经过5 min 离心处理后，取上清液用于PCR 检测。通过实时荧光定量PCR 试剂盒（中山大学达安基因股份有限公司生产）检测，基因拷使用IU/ml 表示，按EBV-DNA 拷贝数分为EBV-DNA 阳性（≥500 IU/ml）和EBV-DNA 阴性（＜500 IU/ml）。

1.3 观察指标 观察所有受试者EBV-DNA 表达情况，分析外周血EBV-DNA 在不同分型、不同分期、不同危险度分层MM 患者中的表达情况。

1.4 统计学分析 采用SPSS 19.0 进行统计学分析，正态分布计量资料以（）表示，两组之间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。计数资料以（%）表示，采用χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MM 组与对照组EBV-DNA 阳性表达率比较MM 组的EBV 感染率高于对照组，差异有统计学意义（χ2=83.887，P＜0.05），见表1。

表1 MM 患者与对照组外周血EBV-DNA 的阳性表达率[n（%）]

2.2 患者外周血EBV-DNA 的阳性表达比较 不分泌型多发性骨髓瘤EBV-DNA 阳性表达率高于其他类型多发性骨髓瘤，差异有统计学意义（P＜0.05）；ISS 分期Ⅰ期EBV-DNA 阳性表达率高于正常对照组（χ2=6.098，P＜0.05），低于Ⅱ期（χ2=3.922，P＜0.05）和Ⅲ期（χ2=19.799，P＜0.00），Ⅱ期EBV-DNA 阳性表达率低于Ⅲ期（χ2=4.591，P＜0.05）；mSMART 危险度分层低位组EBV-DNA 阳性表达率高于正常对照组（χ2=23.104，P＜0.00），但低于中危组（χ2=5.121，P＜0.05）和高危组（χ2=15.228，P＜0.00），中危组EBVDNA 阳性表达率低于高危组（χ2=4.003，P＜0.05），见表2。

表2 MM 患者外周血EBV-DNA 的阳性表达比较（n，%）

3 讨论

多发性骨髓瘤是一种病因不明的血液系统肿瘤，常有低水平的多克隆免疫球蛋白，并表现出中至重度的体液免疫缺陷[9]。此外，治疗期间使用免疫抑制药物是导致免疫低下和诱发感染的另一个重要因素[10]。因此，确定与MM 进展相关的各种感染因素，对于确定疾病预后和选择个体化治疗方案至关重要。

研究表明[11]，多发性骨髓瘤的发生与EBV 感染存在一定关系，且EBV-DNA 的阳性率在50.0%～83.3%[12]，本研究检测的MM 患者EBV 的感染率为59.09%。其可能机制为：①EBV 诱导免疫功能低下者发生MM[13]；②EBV 感染B 淋巴细胞引起永生化，促进其分泌IL-6，并可能在癌基因的参与下引起细胞恶性变[14]；③EBV 可能通过上调Bel-2 及其他抑制凋亡的蛋白，激活NF-KB 信号传导通路导致IL-10 表达增多，使细胞间的增殖与凋亡失衡，引起肿瘤的发生[3，15]；④EBV 干扰细胞DNA 修复机制，并可能导致感染细胞的遗传变化[16，17]。

本研究结果显示，EBV-DNA 阳性表达率在不同分型多发性骨髓瘤患者中存在差异，尤其是不分泌型多发性骨髓瘤EBV-DNA 阳性表达率明显高于其他类型多发性骨髓瘤，可能是因为不分泌型多发性骨髓瘤恶性程度较高，其发生可能与EBV 感染更加密切相关，但由于样本量少，缺乏统计价值。在不同分期比较中，Ⅰ期EBV-DNA 阳性表达率低于Ⅱ期和Ⅲ期（P＜0.05），Ⅱ期EBV-DNA 阳性表达率低于Ⅲ期（P＜0.05），提示临床分期越晚的患者EBV 阳性表达率越高，提示病情较严重。在不同危险度分层比较中，低位组EBV-DNA 阳性表达率低于中位组和高位组（P＜0.05），中位组EBV-DNA 阳性表达率低于高位组（P＜0.05），提示危险程度越高的患者EBV 阳性表达率越高，提示预后较差。因此表明，EBV 在不同分型、不同分期、不同危险度分层多发性骨髓瘤患者中存在一定差异，这与Xia B 等[18]研究结果相似。

综上所述，EBV 感染与多发性骨髓瘤的发生密切相关，EBV 感染与多发性骨髓瘤的发生密切相关，外周血EBV-DNA 表达在多发性骨髓瘤患者临床分型、分期、危险度分层的存在差异，通过检测外周血EBV-DNA 对多发性骨髓瘤诊断、预后判断具有一定应用价值，且检测手段方便、快捷。