急性淋巴细胞白血病患儿细胞因子水平与疾病状态的关系研究*

宋晓梅，李 化，舒莉萍△

1.贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室/贵州省再生医学重点实验室/贵州医科大学基础医学院免疫学教研室,贵州贵阳 550004;2.贵州省贵阳市妇幼保健院检验科，贵州贵阳 550004；3.中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室，贵州贵阳 550004

白血病是一种造血干细胞异常增生性肿瘤，急性白血病可分为急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病两大类，其中急性淋巴细胞白血病较易治疗。根据病情轻重,人们将急性淋巴细胞白血病分为低危、中危和高危3种。骨髓移植是通过移植正常的造血干细胞到患儿体内来治疗白血病的一种可行的方法[1-2]，其最为关键的步骤是找到与患儿匹配的造血干细胞。儿童急性淋巴细胞白血病具有较高的病死率，尽管临床医师在白血病患者体内细胞因子变化方面已有诸多研究，但大部分是以成人为主，部分研究覆盖儿童群体，但病例选择年龄偏大。近年来，儿童急性白血病发病率呈逐年增高的趋势，患儿表现为不同程度贫血、出血及关节浸润等，病情进展速度快、复发率高[3-4]。既往研究发现，细胞免疫功能在急性淋巴细胞白血病发病机制中有着重要的作用[4]，为探讨急性淋巴细胞白血病患儿细胞因子水平与疾病状态的关系，本研究收集急性淋巴细胞白血病患儿212例进行相关研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2018年1月至2019年12月贵阳市妇幼保健院收治的212例急性淋巴细胞白血病患儿纳入急性淋巴细胞白血病组，根据患儿不同的疾病状态将其分为初诊组(128例)、缓解组(84例)，并将同期在该院进行常规体检的200例健康儿童纳入对照组，同期收治的50例急性髓细胞白血病患儿纳入急性髓细胞白血病组。初诊组：男76例，女52例；年龄1～13岁，平均(7.38±1.25)岁；其中116例为B型，12例为T型。缓解组：男52例，女32例；年龄1～14岁，平均(7.35±1.22)岁；其中76例为B型，8例为T型。对照组：男120例，女80例；年龄1～14岁，平均(7.34±1.26)岁。急性髓细胞白血病组：男29例，女21例；年龄1～12岁，平均(7.21±1.35)岁；其中M0型12例，M1型10例，M2型17例，M3型5例，其他类型6例。4组研究对象年龄、性别等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，所有研究对象家属对研究目的、注意事项表示了解，均签署知情同意书。

1.2患儿纳入与排除标准 纳入标准：(1)儿童急性淋巴细胞白血病诊断参照中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会发布的《淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症诊断与治疗中国专家共识(2016年版)》[3]相关标准，急性髓细胞白血病诊断参照《急性髓系白血病(复发难治性)中国诊疗指南(2011年版)》[4]相关标准。(2)患儿临床资料及病史、检查记录等资料完整。排除标准：(1)合并肝、肾疾病患儿；(2)神志不清或精神障碍患儿；(3)经过病原学检测及临床检查诊断为合并感染患儿；(4)合并其他类型血液系统疾病患儿；(5)存在语言交流沟通障碍、听力障碍以及无法配合研究者；(6)预计生存期≤3个月患儿。

1.3方法 于清晨空腹状态下采集各组研究对象静脉血3 mL，室温环境下静置直至血细胞凝固，3 000 r/min离心5～10 min，将血清分离后，于-80 ℃冰箱中保存待测。采用ELISA双抗体夹心法对研究对象白细胞介素(IL)-2、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α等细胞因子进行检测。静脉采血2 mL，采用Sysmex XS-500i全自动五分类血液分析仪测定各项血常规指标。

1.4观察指标[5](1)对比急性淋巴细胞白血病组、急性髓细胞白血病组及对照组血清IL-2、IL-10、TNF-α及白细胞计数(WBC)水平。(2)比较初诊组、缓解组及对照组血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平。(3)随访6个月，根据急性淋巴细胞白血病患儿是否复发分为复发组与未复发组。比较两组血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平。实验室参考值范围如下：IL-2 0～7.5 pg/mL，IL-10 0～12.9 pg/mL，TNF-α 0～16.5 pg/mL，WBC (4～12)×109/L。

1.5急性淋巴细胞白血病危险程度分型 WBC>10×109/L，属于高危。WBC<10×109/L，血小板计数>40×109/L，属于低危。WBC<10×109/L，血小板计数<40×109/L，属于中危[6]。

2 结 果

2.1各组血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比较 急性淋巴细胞白血病组TNF-α、IL-10、WBC水平高于急性髓细胞白血病组与对照组，IL-2水平低于急性髓细胞白血病组与对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 各组血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比较

2.2初诊组、缓解组、对照组血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比较 初诊组IL-2水平低于缓解组及对照组，TNF-α、IL-10、WBC水平高于缓解组及对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 初诊组、缓解组、对照组血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比较

2.3血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平与初诊急性淋巴细胞白血病患儿临床特征的关系 初诊急性淋巴细胞白血病患儿血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平与患儿年龄、性别以及肝大无关(P>0.05)，与患儿疾病危险程度分型有关(P<0.05)，见表3。

表3 血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平与初诊急性淋巴细胞白血病患儿临床特征的关系

续表3 血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平与初诊急性淋巴细胞白血病患儿临床特征的关系

2.4复发组与未复发组IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平比较 急性淋巴细胞白血病患儿复发72例，未复发140例。与未复发组相比，复发组血清IL-2水平降低，IL-10、WBC以及TNF-α水平升高，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 复发组与未复发组IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平比较

3 讨 论

儿童肿瘤的发病率为12.2/10万～17.3/10万，而白血病的发病率在儿童恶性肿瘤中位列第1，约占全部儿童恶性肿瘤的1/3。在儿童血液系统肿瘤中，白血病是最为常见且最为严重的一种[7-9]。儿童白血病治疗首选化疗方案，针对部分复发、难治、高危的患儿则需要进行骨髓移植。目前，规范化的白血病诊治方案在全国各儿童白血病定点医院已经推广实施多年，经过规范化的诊治，80%以上的急性淋巴细胞白血病患儿可以治愈。以往研究发现：辅助性T淋巴细胞1(Th1细胞)主要分泌的细胞因子包括IL-2、干扰素(IFN)-γ等，Th1细胞在细胞免疫中具有较高的效能；辅助性T淋巴细胞2(Th2细胞)主要分泌的细胞因子包括IL-10、IL-4等，Th2细胞在免疫系统中具有负调控作用。一旦Th1细胞、Th2细胞在人体免疫应答中动态平衡被打破，将会导致免疫功能紊乱，诱发一系列疾病[10-13]。

白血病是对人体危害较大的一种疾病，该病在发展过程中会因为克隆性白血病细胞增殖失控、分化障碍、凋亡受阻等机制而导致白血病细胞在骨髓或者其他造血组织中大量增殖，累积浸润其他非造血组织与器官，影响正常造血功能，引发一系列相关症状。白血病进展时患者会有感染现象，多以细菌入侵为主，而感染发生时身体会出现一系列不良反应。作为细胞免疫主要调节因子，IL-2来源于活化的Th1细胞，其他免疫细胞如B淋巴细胞、树突状细胞尽管也能分泌IL-2，但分泌量较少[14-15]。以往学者在研究中对IL-2免疫调节作用进行了如下总结：(1)IL-2对B、T淋巴细胞增殖、分化具有促进作用，且能够促使B淋巴细胞分泌抗体；(2)IL-2一方面可加强淋巴细胞表面黏附分子的表达，另一方面能够对细胞杀伤靶细胞起到诱导作用；(3)IL-2刺激CD8+细胞产生，加快TNF、IFN等细胞因子的分泌，强化抗白血病作用机制；(4)在对自然杀伤(NK)细胞产生诱导作用的同时，促使活化的NK细胞杀伤力的提升；(5)对巨噬细胞具有激活作用，能够促进吞噬及抗原呈递功能的提升，参与抗肿瘤过程。本研究结果显示，与对照组相比，初诊组、缓解组IL-2水平明显降低，考虑是由于白血病细胞分泌可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)，与IL-2R竞争性结合IL-2，导致IL-2水平减少，另外Th1细胞数量减少，其分泌IL-2能力也会下降，进而导致IL-2水平降低。作为一种负向调控的细胞因子，IL-10能够起到免疫抑制的作用。IL-10能够对抗原已致敏的CD4+Th细胞(Th0型细胞)向Th1细胞的增殖、分化起到抑制作用，使其向Th2细胞方向增殖、分化，弱化Th1细胞分泌细胞因子的能力，抑制机体免疫功能，在肿瘤性疾病形成中具有参与作用。其次，IL-10能够对炎性反应起到抑制作用，引起自身免疫性疾病的发生，在IL-10作用下，细胞毒性T淋巴细胞对免疫无应答，更容易发生免疫功能缺陷。当机体出现恶性病变，调节性T细胞(Treg细胞)显著增多，进而增加IL-10的分泌，血清IL-10水平呈现出升高趋势。本研究中，与对照组相比，初诊组及缓解组患儿IL-10水平均升高，IL-10对机体免疫功能产生抑制作用，降低了免疫监控能力，使得白血病细胞发生免疫逃逸，导致了白血病的发生。TNF-α主要来源于巨噬细胞及活化的单核细胞，具有多种生物活性，抗肿瘤能力强，在多种机体病理反应中有着一定的参与作用。与此同时，该指标还能够促使细胞凋亡[16]。本研究中TNF-α在急性淋巴细胞白血病患儿中有所升高，且初诊组TNF-α水平高于缓解组及对照组(P<0.05)。单纯性的WBC升高是不能确诊为白血病的，但是白血病患者在进行血常规检查时，往往出现WBC过高的情况，WBC过高是白血病的一种表现。本研究中初诊急性淋巴细胞白血病患儿血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平与患儿年龄、性别及肝大等无关，与患儿疾病危险程度分型密切相关，说明上述指标能够反映患儿疾病状态，可用于患儿病情及预后的评估。对急性淋巴细胞白血病患儿进行为期6个月随访，与未复发组相比，复发组血清IL-2水平降低，IL-10、WBC及TNF-α水平升高，差异均有统计学意义(P<0.05)，提示急性淋巴细胞白血病患儿疾病复发后仍伴随炎症因子水平的升高，对急性淋巴细胞白血病患儿给予细胞因子水平监测，能够掌握患儿肿瘤生长情况及复发风险，以便予以有效的干预措施。但由于样本量少，本研究可能存在一定偏倚，在后续研究中应加大样本量，增加随访指标，从更多方面探讨急性淋巴细胞白血病患儿细胞因子表达变化情况，为临床提供更可靠的依据。

综上所述，血清IL-2、TNF-α、IL-10、WBC水平能反映出急性淋巴细胞白血病患儿疾病状态，其水平变化能够对患儿免疫功能起到预测作用，在急性淋巴细胞白血病预后及治疗进展评估中有着重要的意义。