污泥细菌总数检测方法的研究

习苏芸 黄河笑 李显芳 蒋利莎

（国家城市供水水质监测网重庆监测站，重庆 400074）

一、前言

目前污水处理的方法主要包括物理法、化学法及生物法。生物法主要是利用微生物的新陈代谢活动，分解污水中的有机物质，从而达到污水净化的目的。污水中的微生物[2]多数为腐生型细菌和原生动物。测定污泥中能够细菌总数，对污泥污染程度的判断及污水处理厂污泥排放是否符合标准，具有非常重要的意义。2005 年，中华人民共和国建设部颁布的《城市污水处理厂污泥检验方法》（CJ/T 221-2005）[]，为检测污水处理厂的污泥提供了技术方法。

二、实验部分

（一）实验原理

一定量的污泥样品经稀释处理以后，接种于营养琼脂培养基中，在37℃培养24h 后，所生长的细菌菌落的总数即为样品的细菌总数[1]。

（二）药品试剂

氢氧化钠溶液：c(NaOH)=1mol/L；盐酸溶液：c(HCl)=1mol/L；生理盐水：ω(NaCl)=0.8%；无菌稀释水：根据污泥样品的数量配制稀释用的生理盐水，分装于三角瓶及试管中。每个污泥样品需准备一个内装有9mL 生理盐水的试管，同时准备8 个至9 个（具体数量根据污泥样品的稀释倍数确定）内装有90mL 生理盐水的三角瓶，其中放入数玻璃珠），经115℃高压蒸汽灭菌20 min，备用。

营养琼脂培养基成分：蛋白胨（10g），牛肉浸膏（3g），氯化钠（5g），琼脂（15～20g），蒸馏水（1000mL）。将成分混合后，用氢氧化钠（1mol/L）溶液或盐酸溶液（1mol/L）调节pH 值为7.4～7.6，过滤除去沉淀，分装于玻璃容器中，经115℃高压蒸汽灭菌20 min，贮存于冷暗处备用。

（三）仪器及设备

高压蒸汽灭菌器：115℃、121℃可调；隔水式培养箱：允许温度偏差37℃±1℃；恒温水浴锅：46℃±1℃；电子分析天平；菌落计数器；振荡器；可调式电炉。

（四）实验步骤

称取1g 的污泥样品，转至9mL 灭菌的生理盐水，制成1:10 的稀释液。振荡摇匀，全部转移至90mL 的灭菌生理盐水，制成1:100 的稀释液。吸取10mL1:100 的稀释液于90mL 的灭菌生理盐水，制成1:1000 的稀释液。重复上述步骤，根据对污泥样品含菌量的估计，选择2 个至3 个适宜浓度的稀释菌液用作平板培养。污泥的稀释倍数一般选择（1×105）至（1×107）之间，培养后平皿上的菌落数在30～300 之间。

在无菌条件下，用1 mL 灭菌的移液管移取所选择的适宜浓度的稀释菌液1 mL 转入灭菌平皿中，边倒入15 mL 左右已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，边不断转动平皿，使稀释菌液和培养基混合均匀。每个稀释倍数应做两个对照培养结果。每次实验，应另用一个灭菌的平皿只倾注营养琼脂培养基加1mL 灭菌生理盐水做空白对照。待营养琼脂培养基凝固后，翻转平皿，置于37℃±1℃恒温培养箱内培养24 h±1h，取出计数。计算和报告计数结果见表1[1]。

表1 稀释倍数选择及菌落总数测定值[1]

三、结果与讨论

（一）精密度

对同一污泥样品，1 人平行检测6 次，检测结果见表2 所示。

表2 同一污泥样品中细菌总数含量检测结果

由上表2 可知，精密度相对偏差为0.55%，本次精密度检测结果符合技术要求，结果满意。

（二）重现性

对同一污泥样品，3 人各自检测结果见表3 所示。

表3 同一污泥样品中细菌总数检测结果

由上表3 可知，重现性相对偏差为0.43%，本次重现性检测结果符合技术要求，结果满意。

（三）样品的检测

按照本方法对污泥中细菌总数进行测定，测定的结果见表4。

表4 不同污泥样品中细菌总数检测结果

四、结论

综上所述，从检测结果可以看出：在该检测条件下，用平皿计数法对污泥中细菌总数进行测定，方法的精密度RSD 为0.55%，重现性RSD 为0.43%。检测取得了较好结果，满足《城市污水处理厂污泥检验方法》CJ/T 221-2005（13）[1]的要求。