激光多普勒血流仪评价鹿茸对于动脉硬化大鼠的影响

李子娟 韩杰 王雁彬 李廷荃

摘要：目的 利用激光多普勒血流仪评价鹿茸对于动脉硬化大鼠的疗效。方法 肢体缺血手术、高脂饲料喂养制作大鼠下肢动脉硬化闭塞症模型。分别在给药后0、7、14、28d对各组大鼠进行多普勒检测，观察各时期大鼠血流灌注恢复程度;同时进行体温的监测。结果 各给药组各时期下肢温度及LDPI指数均有不同程度的升高（P<0.05），差异均有统计学意义，其中同时期对比鹿茸高剂量组升高最为显著，其次为鹿茸中剂量组，再次为鹿茸低剂量组，其之间差异有统计学意义（P<0.05）。结论 根据激光多普勒血流仪显示鹿茸促进了动脉硬化大鼠的血流恢复，且与给药浓度具有一定相关性。

关键词：激光多普勒;动脉硬化;鹿茸;血流恢复

中图分类号：R285   文献标志码：A   文章编号：1007-2349（2021）07-0072-04

Evaluation of the Effect of Velvet Antler on Arteriosclerosis Ratsby Laser Doppler Blood Flow Meter

LI Zi-juan1， HAN Jie1， WANG Yan-bin2， LI Ting-quan2

（1. Shanxi University of Traditional Chinese Medicine， Taiyuan 030024， China;2. The Affiliated Hospital of Shanxi University of Traditional Chinese Medicine， Taiyuan 030024， China）

【Abstract】Objective： To evaluate the curative effect of velvet antler on arteriosclerosis rats by using laser Doppler blood flow meter. Methods： Limb ischemia surgery and high-fat feed were used to make a rat model of lower extremity arteriosclerosis obliterans. Doppler detection was performed on the rats in each group at the 0， 7th， 14th and 28th day after the administration to observe the recovery degree of the blood perfusion of the rats in each period and at the same time， the body temperature was monitored. Results： The lower extremity temperature and LDPI index increased to different degrees in each period of each administration group （P<0.05）， and the differences were statistically significant. The increase was the most significant in the high-dose velvet antler group during the same period， followed by the middle-dose velvet antler group and again by the low-dose velvet antler group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion： According to the display of the laser Doppler blood flow meter， the velvet antler can promote the recovery of blood flow in arteriosclerotic rats， and is related to the concentration of administration.

【Key words】Laser Doppler; Arteriosclerosis; Velvet Antler; Blood Flow Recovery

動脉硬化性闭塞症（arteriosclerosis obliterans，ASO）是指由于动脉硬化造成的内膜增厚、管腔狭窄或闭塞，导致相应区域供血不足的一系列疾病。表现在下肢则为下肢动脉硬化闭塞症（arteriosclerosis obliterans of the lower extremities，ASOLE），临床症状有下肢皮温降低、间歇性跛行、疼痛，易引起肢体末端坏疽，甚至有截肢死亡的风险[1-2]。据统计，75 岁以上人群中ASO的发病率高达15%～20%，普通人群发病率为3%～10%，以老年男性患者居多，给患者带来极大痛苦的，也给家庭及社会带来巨大负担[3]。随着中医药事业的发展，中医中药在对本病的治疗上取得的显著成效，许多研究前期表明，激光多普勒技术能较为客观的反应药物对于动脉硬化的疗效[4]，遂本项目则用激光多普勒技术结合对大鼠下肢温度的监测来初步评价鹿茸对于动脉硬化大鼠的疗效。

1 材料

1.1 动物 SPF级雄性SD大鼠36只，2月龄，体重250～300 g，由山西省中医药研究院提供，实验动物质量合格证号：1103221911003889。

1.2 饲料制备 高脂饲料（80.3%基础饲料、15%猪油、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、4%胆固醇）

1.3 药物与试剂 鹿茸采用马鹿茸，购自北京同仁堂（集团）有限责任公司，用普通粉碎机粗粉后再用气流超微粉碎机制成微粉（粒径小于10μm），温水调，搅拌均匀，即用即配。维生素D3针剂（哈尔滨摩天农科兽药有限责任公司）。

1.4 主要仪器 电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司 CPA）;多普勒（HADECO公司 日本 ES-100V3）;离心机（Beckman Coulter公司 美国 Microfuge 20R）。

2 方法

2.1 分组 采用随机数字表法分为6组：正常组、模型组、假手术组、鹿茸低剂量组、鹿茸中剂量组、鹿茸高剂量组，每组6只。

2.2 下肢动脉硬化闭塞症模型制作 （1）将SPF级SD雄性大鼠以5%水合氯醛溶液（7mL/kg）腹腔麻醉，隨后取平卧位，固定于手术台，左侧腹股沟备皮。（2）碘伏消毒左侧腹股沟区域后，于此处行一长约1.5cm纵切口，暴露血管鞘，分离股动脉及其分支，齿镊沿股动脉走形钳夹约30s，分别结扎并离断左侧股动脉的分支。（3）用0号线缝合皮下组织及皮肤，背部皮下注射生理盐水10mL补液抗休克治疗，观察大鼠各项生命体征平稳后放回鼠笼。（4）给予30万单位青霉素肌肉注射3天，以预防感染。（5）高脂饲料喂养12周;⑥予维生素D3（30万u/kg）右下肢肌肉注射，1个月1次。

2.3 给药方法 鹿茸低、中、高计量组灌胃给药（0.143 g·kg-1·d-1、 0.286 g·kg-1·d-1、0.572 g·kg-1·d-1）。LY294002 组腹腔注射（1 mg·kg-1·d-1）;正常组、模型组及假手术组给予等容量蒸馏水。

2.4 检测指标

2.4.1 一般状态 观察大鼠一般状态，包括精神状态，毛色，活动灵敏度等。

2.4.2 下肢温度 分别在用药0、7、14、28 d监测大鼠下肢温度。

2.4.3 下肢血流灌注恢复程度 用药0、7、14、28 d，以5%水合氯醛溶液（7 mL/kg）对实验大鼠行腹腔麻醉，用激光多普勒血流仪测定下肢血流灌注。操作时探头尽量与下肢皮肤贴合，施力方向尽量与皮肤垂直，被检测的下肢皮肤组织受压应尽量保持着力均匀。LDPI 指数（LDPI index）=缺血下肢血流/未缺血下肢血流。

2.5 统计学方法 用SPSS 25.0进行统计学分析，数据用（x±s）表示。2组间比较采用独立样本t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 各组大鼠一般状态 空白组、假手术组大鼠精神良好，毛色光泽，活动灵敏;模型组、给药组大鼠在最初1个月增长迅速，后增长速度减缓，其精神萎靡，活动欠灵敏，毛色暗淡。

3.2 鹿茸干预下各时期各组大鼠下肢温度 见表1。纵向相比，给药0d时模型组及各给药组之间温度无明显差异（P>0.05），均显著低于空白组及假手术组（P<0.05）;给药7d时，给药组温度均有所上升，显著高于模型组（P<0.05），显著低于空白组及假手术组（P<0.05），其中鹿茸高剂量组上升最多，其次为鹿茸中剂量组，再次为鹿茸低剂量组，之间均有显著差异（P<0.05）;给药14d时，给药组温度较7d有所上升，显著高于模型组（P<0.05），显著低于空白组及假手术组（P<0.05），其中仍为鹿茸高剂量组上升最多，其次为鹿茸中剂量组，再次为鹿茸低剂量组，之间均有显著差异（P<0.05）;给药28d时，给药组温度较14d有所上升，显著高于模型组（P<0.05），鹿茸高剂量组与空白组及假手术组无显著差异（P>0.05），鹿茸中剂量组与鹿茸低剂量组仍显著低于空白组及假手术组（P<0.05），鹿茸低剂量组显著低于鹿茸中剂量组（P<0.05）。见图1，横向相比，空白组、假手术组、模型组各时期均无明显差异（P>0.05），而给药组温度在逐步上升，且鹿茸高剂量组上升最为明显，28d时可达到空白组及假手术组水平，其次为鹿茸中剂量组，最后为鹿茸低剂量组。

3.3 鹿茸干预下各时期各组大鼠的下肢血流灌注恢复程度 见表2，横向相比，给药0d时，与空白组及假手术组相比，模型组及给药组患侧血流术后立即减少，LDPI指数达到最低值（P<0.05）;给药7d时，给药组LDPI指数均有升高，其中鹿茸高剂量组升高做多，其次为鹿茸中剂量组，再次为鹿茸低剂量组，之间均有显著差异（P<0.05）;给药14d时，各给药组较7d时LDPI指数有所上升，鹿茸高剂量组仍上升最多，其次为鹿茸中剂量组，再次为鹿茸低剂量组，之间均有显著差异（P<0.05）;给药28d时，各给药组较14d时LDPI指数有所上升，鹿茸高剂量组可基本与空白组及假手术组持平，之间无显著差异（P>0.05），其次为鹿茸中剂量组，再次为鹿茸低剂量组，各给药组之间存在显著差异（P<0.05）。见图2，横向相比，空白组、假手术组、模型组各时期均无明显差异（P>0.05），而给药组温度在逐步上升，且鹿茸高剂量组上升最为明显，28d时可达到空白组及假手术组水平，其次为鹿茸中剂量组，最后为鹿茸低剂量组。

4 讨论

动脉硬化闭塞症（ASO）是由于血管动脉粥样硬化斑块的不断扩大和继发血栓引起动脉管腔狭窄甚至闭塞，出现患肢慢性或急性的缺血症状[5]。因此，改善缺血区域血流灌注促进血管新生就成为治疗的重要步骤之一。鹿茸具有补肾、填精、益髓的功效，可促进血液的生成和运行，而鹿茸的主要成分鹿茸多肽对表皮细胞及成纤维细胞有显著的促进增殖作用，可以加速疮面愈合，促进血管内皮细胞的增殖分化及迁移，促进病变部位的血管生成[6]。

近年来，微循环检测方法在下肢动脉硬化闭塞症的应用越来越被推崇，其中激光多普勒血流测定是一种无损伤性的快速组织血流测量方法，其可以连续、实时检测组织微循环粗流量[7]，其中前期数名学者应用LDPI指数来观察动脉硬化闭塞的治疗疗效，发现LDPI值较治疗前增加显著，同时临床评分显著下降[8]，从而证实的疗法的疗效。因此，激光多普勒LDPI指数在判断下肢动脉硬化闭塞症中的血流灌注恢复程度中有很好的实用价值，目前已较为广泛的应用于临床中。

本研究中，各给药组在给药7、14、28d LDPI指数均有显著上升，其中鹿茸高剂量组上升程度最为显著，在给药28d时基本可达空白组及假手术组水平;而鹿茸中剂量组上升对比鹿茸高剂量组效果稍逊色，在给药同时期，鹿茸中剂量组的LDPI指数均显著低于鹿茸高剂量组;鹿茸低剂量组上升程度对比鹿茸中剂量组亦显逊色，在给药同时期，鹿茸低剂量组的LDPI指数均显著低于鹿茸中剂量组。同时，下肢动脉硬化闭塞症其中一个临床表现为下肢皮温的降低，本实验同时监测大鼠各时期各组下肢温度得出各组各时期变化与LDPI指数变化水平基本一致，从而得出结论：鹿茸对于下肢动脉硬化闭塞症大鼠疗效显著，且其疗效水平与给药浓度密切相关，鹿茸高剂量组的疗效优于鹿茸中剂量组及鹿茸低剂量组的疗效，但具体鹿茸对于下肢动脉硬化闭塞大鼠的作用具体机制还需实验后期对于关键蛋白检测来进行探讨验证。

参考文献：

[1]Zhang K，Song W，Li D，et al.The Association between Polymorphism of CARD8 rs2043211 and Susceptibility to Arteriosclerosis Obliterans in Chinese Han Male Population[J].Cell Physiol Biochem，2017，41（1）：173-180.

[2]下肢动脉硬化闭塞症诊治指南[J].中华普通外科学文献（电子版），2016，10（1）：1-18.

[3]王继雪，杨稀瑞，吕勃川，等.四妙勇安汤通过JAK/STAT信号通路治疗下肢动脉硬化闭塞症的机制研究[J/OL].海南：医学院学报，1-20[2020-12-16].https：//doi.org/10.13210/j.cnki.jhmu.20201027.004.

[4]柴政，丁毅，贾慧，等.基于患者频数分布规律探讨糖尿病足中医证型与疮周血流量的相关性[J].辽宁中医药大学学报，2018，20（9）：181-184.

[5]化金凤，索炜，李廷荃.动脉硬化闭塞症的中医治疗研究进展[J].中西医结合心脑血管病杂志，2013，11（2）：211-212.

[6]李琳，叶彤，陈文凤，等.鹿茸多肽功能的研究进展[J].吉林医药学院学报，2020，41（1）：54-56.

[7]Duval A，Helley D，Capron L，et al.Endothelial dysfunction in systemic lupus patients with low disease activity：evaluation by quantification and characterization of circulating endothelial microparticles，role of anti-endothelial cell antibodies[J].Rheumatology，2010，49（6）：1049-1055.

[8]刘亮，李小鹰，赵秀梅，等.激光多普勒血流图像仪检测老年下肢动脉硬化闭塞症的临床疗效[J].中华老年心脑血管病杂志，2003（6）：368-370.

（收稿日期：2021-04-19）

基金项目：国家自然科学基金项目（81874474）

第一作者简介：李子娟（1996-），女，在读研究生，研究方向：中醫药防治心血管系统疾病的研究。

通信作者：李廷荃，E-mail：ltqnsfc@163.com