三种清热解毒类中成药的荧光指纹图谱研究

朱丹丹，毛 越，杨莉丽

(河北师范大学 化学与材料科学学院，河北 石家庄 050024)

0 引言

金莲花胶囊是采用毛茛科植物金莲花的干燥花制成的单方制剂，具有清热解毒，抗菌消炎的功效，用于上呼吸道感染、咽炎、扁桃体炎的治疗[1]。李勇军等[1]采用高效液相色谱法建立了不同厂家不同批次金莲花胶囊的指纹图谱。李桂兰等[2]采用高效液相色谱法对金莲花胶囊中对羟基苯甲苹果酸、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、荭草素和牡荆素的含量进行测定，为金莲花胶囊的质量评价提供依据。

清火片由大青叶、大黄、石膏、薄荷脑4味中药组成，具有清热泻火、通便之功效，用于咽喉肿痛、牙痛、头目眩晕、口鼻生疮、风火目赤、大便不通的治疗[3]。许苗苗等[4]建立了高效液相色谱-荧光检测测定清火片中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种游离蒽醌和结合蒽醌含量的方法。

复方穿心莲片是由穿心莲和路边青提取制成的片剂，具有清热解毒、利湿之功效，可用于风热感冒、咽喉疼痛、湿热泄泻等疾病的治疗[5]。周少林等[6]采用薄层色谱法鉴别复方穿心莲片中的穿心莲和路边青；采用高效液相色谱法测定复方穿心莲片中的脱水穿心莲内酯的含量。张慧晔等[7]优化了复方穿心莲片的薄层鉴别方法，并对该制剂中的穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯和路边青进行定性鉴别。敖华蓉等[8]建立了不同厂家不同批次复方穿心莲片的高效液相色谱指纹图谱，并对穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯等6种有效成分的含量进行测定。

本文对3种清热解毒类中成药金莲花胶囊、清火片和复方穿心莲片的三维荧光图谱进行测定，应用Matlab软件提取三维荧光图谱数据的特征参数[9]，利用聚类分析法对3种清热解毒类中成药三维荧光图谱的一致性进行考察，对于荧光图谱一致性良好的中成药；采用平均值法分别建立其三维荧光指纹图谱。

1 材料与方法

1.1 仪器、材料与试剂

F-4600荧光分光光度计(Hitachi公司)，SB25-12DTD超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)，0.45 μm滤膜(天津市科亿隆实验设备有限公司)，甲醇(色谱纯，安徽天地高纯溶剂有限公司)，去离子水(自制)。

金莲花胶囊：牙克石市森健药业有限公司(简称牙克石市森健，批号02190102、02190108、02190111、02190301、02190502、02191008)，吉林天药本草堂制药有限公司(简称吉林天药，批号20180101、190601、190602)，贵州益康制药有限公司(简称贵州益康，批号20190501、20190702、20190902、20191101、20191204、20200201、20200102、20200204)，江西银涛药业有限公司(简称江西银涛，批号1904002、1905003、1906004、1907006)。

清火片：广西正堂药业有限责任公司(简称广西正堂，批号20190301、20190701、20190702、20190703、20191001、20200101)，江西省芙蓉堂药业股份有限公司(简称江西芙蓉堂，批号190602、1900702、190807、190808、190809、190901、190910、191109、191111、200203、200307、200308)，伊春金北药制药有限责任公司(简称伊春金北，批号19040260、19060560、19100160、19110760、20021260、20040960)，广西维威制药有限公司(简称广西维威，批号190102、190303、190403、190701)。

复方穿心莲片：广州白云山和记黄埔中药有限公司(简称广州白云山，批号D18S004、G18S006、H18S007、I18S001、B19S001、B19S002、B19S004、G19S001、G19S002、G19S004、G19S006、G19S012、H19S002、I19S007)，广东罗浮山国药股份有限公司(简称广东罗浮山，批号L19C032、L19C221、L19C232、L19I131、L19I142、L19I271、L19I273、L19J191、L19J192、L19J201、L19J202、L19K191、L19K171)，广西禅方药业股份有限公司(简称广西禅方，批号181202、190301、190401、190601、190702、190703、190705、190804、190805、190905、191001、191005)，广东新峰药业股份有限公司(简称广东新峰，批号180907、190403、190406、190501、191104、191108、191201、200203)。

1.2 方法

从每个批号的中成药中随机选取3个样本进行实验，片剂需先除去糖衣，研磨成粉末状备用，胶囊直接取出胶囊内容物即可。

准确称取适量药物，以甲醇为溶剂定容，在超声时间10 min(金莲花胶囊超声时间为15min)和超声温度25℃的条件下，对样品进行超声提取，过滤后得中成药的甲醇提取液，以每毫升溶剂中所含中成药质量表示浓度，分别得到浓度为0.750mg·mL-1、1.00mg·mL-1和0.500mg·mL-1的金莲花胶囊、清火片和复方穿心莲片样本的甲醇提取液。

在响应时间0.5 s、负高压700V、扫描速度2400nm·min-1、狭缝宽度5.0/5.0nm、采样间隔1.0nm的仪器条件下，激发波长扫描范围为200～700nm，发射波长扫描范围为200～800nm，分别测定不同厂家、同一厂家不同批号金莲花胶囊、清火片和复方穿心莲片样本甲醇提取液的三维荧光图谱。应用Matlab软件提取三维荧光图谱数据的特征参数，结合聚类分析法，对3种清热解毒类中成药三维荧光图谱的一致性进行考察，采用平均值法分别建立其三维荧光指纹图谱。

2 结果与讨论

2.1 3种清热解毒类中成药的三维荧光图谱一致性考察

2.1.1 金莲花胶囊的三维荧光图谱一致性考察

测定了牙克石市森健、吉林天药、贵州益康和江西银涛4个厂家生产的21个批号63个金莲花胶囊样本的三维荧光图谱，采用聚类分析法考察不同厂家、同一厂家不同批号金莲花胶囊三维荧光图谱的相似性和差异性。聚类分析结果如图1所示。

图1 63个金莲花胶囊样本的聚类分析结果

由图1的聚类结果可知，在相关系数为0.988时，牙克石市森健(No.1-18)、吉林天药(No.19-27)、贵州益康(No.28-51)和江西银涛(No.52-63)生产的金莲花胶囊样本聚为一类，因此4个厂家生产的21个批号63个金莲花胶囊样本的三维荧光图谱具有良好的一致性。

2.1.2 清火片的三维荧光图谱一致性考察

测定了广西正堂、江西芙蓉堂、伊春金北和广西维威4个厂家生产的28个批号84个清火片样本的三维荧光图谱，采用聚类分析法考察不同厂家、同一厂家不同批号清火片三维荧光图谱的相似性和差异性。聚类分析结果如图2所示。

由图2的聚类结果可知，在相关系数为0.999时，广西正堂(No.1-18)、江西芙蓉堂(No.19-54)、伊春金北(No.55-72)和广西维威(No.73-84)生产的清火片样本聚为一类，因此4个厂家生产的28个批号84个清火片的三维荧光图谱具有良好的一致性。

图2 84个清火片样本的聚类分析结果

2.1.3 复方穿心莲片的三维荧光图谱一致性考察

测定了广东罗浮山、广州白云山、广西禅方和广东新峰4个厂家生产的47个批号141个复方穿心莲片样本的三维荧光图谱，采用聚类分析法考察不同厂家、同一厂家不同批号复方穿心莲片三维荧光图谱的相似性和差异性。聚类分析结果如图3所示。

图3 141个复方穿心莲片样本的聚类分析结果

由图3的聚类结果可知，在相关系数为0.981时，广州白云山(No.1-42)、广东罗浮山(No.43-81)、广西禅方(No.82-117)和广东新峰(No.118-141)生产的复方穿心莲片样本聚为一类，因此4个厂家生产的47个批号141个复方穿心莲片的三维荧光图谱具有良好的一致性。

2.2 清热解毒类中成药的三维荧光指纹图谱的建立

根据聚类分析结果，每种中成药的三维荧光图谱具有良好的一致性，采用平均值法建立其三维荧光指纹图谱，结果如图4所示。

图4 清热解毒类中成药的三维荧光指纹图谱(步长50)

金莲花胶囊的荧光峰位置为λex/λem=397/466nm、λex/λem=305/412nm、λex/λem=232/313nm、λex/λem=247/443nm和λex/λem=283/318nm；清火片的荧光峰位置为λex/λem=229/318nm、λex/λem=281/318nm和λex/λem=316/411nm；复方穿心莲片的荧光峰位置为λex/λem=308/426nm和λex/λem=405/675 nm。

3 结论

采用荧光光谱法测定了不同厂家不同批次的3种中成药的三维荧光图谱，聚类分析结果表明，3种清热解毒类中成药的三维荧光图谱均具有良好的一致性，分别建立了3种清热解毒类中成药的三维荧光指纹图谱，不同中成药的三维荧光指纹图谱存在明显差异，可用于中成药的鉴别。