前胡提取方法比较

徐 广，谭秋生，罗 敏，郭 瑀，杨 丹，邓才富，杨永东，任星宇，傅 滟

(重庆市药物种植研究所 中药材生产质量控制研究中心，重庆 408435)

前胡为伞形科植物白花前胡的干燥根，具有散风清热、降气化痰的功效，常用于治疗风热咳嗽、痰多、痰热喘满、咳痰黄稠等[1]。药理研究表明，白花前胡具有钙通道阻滞、降压、抗肿瘤、抗病毒、抗炎及逆转肿瘤多药耐药等多种生物活性[2-4]。随着经济的发展，前胡野生资源日渐枯竭，难以满足需求。目前前胡药材主要来源于栽培品种，然而栽培品和野生品的活性成分含量差异大[5-6]。前胡的栽培方式有助于提高其有效物质的含量，同时活性物质的提取方法也对于前胡的开发利用至关重要。本研究通过对比不同提取方法对白花前胡甲素和白花前胡乙素提取量的影响，为前胡药材的质量提升提供帮助。

1 材料与仪器

甲醇(色谱纯)：重庆川东化工(集团)有限公司，批号20190901；三氯甲烷：重庆川东化工(集团)有限公司，批号20120702；水：均为临用现制的超纯水；白花前胡甲素、白花前胡乙素对照品：中国食品药品检定研究院，批号分别为111711-201904、111904-201804。

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，包括LCsolution色谱管理处理软件、CTO-20A柱温箱、SIL-20A自动进样器、SPD-M20A二极管阵列检测器、日本岛津Shim-pack VP-ODS色谱柱(4.6 mm×0.5 μm×250 mm)、CBM-20Alite系统控制器；METTLER AL104型电子天平(感量：0.1 mg)，CPA225D型电子天平(感量：0.01 mg)；Molecular标准智能型纯水机；KQ-1000DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；DHG电热恒温鼓风干燥箱(上海龙跃仪器有限公司)；HH-8数显恒温水浴锅(上海汗诺仪器有限公司)；多功能微波合成萃取仪(UWav-2000，上海新仪微波化学科技有限公司)；LYZ恒温摇床(上海龙跃仪器设备有限公司)。

2 方法与结果

2.1 提取方法

2.1.1 按照 2015版药典超声提取法(S1) 取前胡样品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置250 mL具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率400 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5 mL，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.1.2 按照药典改进法(S2、S3) 取前胡样品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置250 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇或乙醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率400 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用相应提取液补足减失的重量，摇匀，滤过，50 mL量瓶中定容，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.1.3 按照微波法(S4) 取前胡样品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置250 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，微波处理(功率400 W，30 ℃)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，50 mL量瓶中定容，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.1.4 按照摇瓶法(S5) 取前胡样品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置250 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，恒温摇床(30 ℃，120 rmp)摇瓶30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，50 mL量瓶中定容，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.2 测定方法与结果

2.2.1 色谱条件 按《中国药典》2015年版一部“前胡”标准项下“含量测定”规定进行测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(75∶25)为流动相；检测波长为321 nm，理论板数按白花前胡甲素峰计算应不低于3 000。

精密称取白花前胡甲素、白花前胡乙素对照品适量，加甲醇制成每1 mL各含白花前胡甲素73.0 μg、白花前胡乙素79.8 μg的混合溶液，即得。白花前胡甲、乙素混合对照品色谱，见图1。

注：1.白花前胡甲素；2.白花前胡乙素。

2.2.2 谱图相似度 将色谱数据导出为AIA格式，然后导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012版，进行相似度分析，其色谱见图2，相似度见表1。由图2可知，4种提取方法所得色谱图和药典法均较为相似，提取物质种类和出峰时间都和药典提取法较为吻合。由表1可知，S5法和药典提取法相似度最高，系数为1.000；S2、S3及S4和药典提取法的相似系数均在0.96以上。由此可见，上述几种方法都能很好地满足药典要求，进而替代药典提取法。

表1 HPLC图谱相似度系数

图2 前胡不同提取方法的HPLC图谱

2.2.3 提取量比较 不同提取方法所得白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量见表2。由表2可知，S2、S3、S4和S5均能提高白花前胡甲素和白花前胡乙素的提取量，增加其可检测性。与药典提取法相比白花前胡乙素的含量提高了12.61%～20.05%，白花前胡乙素的含量提高了11.23%～21.05%。同时，优化的提取方法测得的白花前胡甲素和白花前胡乙素含量均高于药典要求(大于0.9%和大于0.24%)。

表2 提取方法对白花前胡甲素、乙素的影响 (%)

3 讨论

《中国药典》2015版Ⅰ部前胡项下的HPLC测定方法，样品提取方法繁琐，操作过程多，且采用三氯甲烷为提取溶剂，该溶剂为二类有毒试剂，应避免使用。故项目组对其提取方法进行优化，首先将提取溶剂三氯甲烷替换为甲醇或乙醇，实验结果表明甲醇更有利于白花前胡甲素和白花前胡乙素的提取，使其测得含量更高；在此基础上，对比了微波提取和摇瓶提取的差异，摇瓶法对白花前胡乙素的提取有一定促进作用。摇瓶法所得HPLC图谱和药典法的HPLC图谱相似度最为接近，系数为1.000；此法提取溶剂更安全，提取方式更温和、安全、有效，且能同时提高白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量；该方法有望替代三氯甲烷超声提取法。

通过对比前胡的提取方法，采用甲醇超声提取法提取前胡的白花前胡甲素和白花前胡乙素，均能获得较高的含量；而采用更为温和的摇瓶法则更有利于白花前胡乙素的提取。在实际生产过程中，可以根据样品的不同情况，选择合适的提取方法，有利于提高生产效率。